瘦素及瘦素受體在妊娠期尖銳濕疣組織中的表達及意義

賈月琴，姜　新，石長珠，朱應玉,謝貞蘭，劉　瑩

(銅陵市人民醫院　1.皮膚性病科;2.病理科,安徽　銅陵　244000)

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·臨床醫學·

瘦素及瘦素受體在妊娠期尖銳濕疣組織中的表達及意義

賈月琴1，姜新1，石長珠1，朱應玉1,謝貞蘭2，劉瑩2

(銅陵市人民醫院1.皮膚性病科;2.病理科,安徽銅陵244000)

目的：探討瘦素(Ob)及瘦素受體(Ob-R)在妊娠期尖銳濕疣(CA)組織中的表達及意義。方法：采用免疫組化法分別檢測24例非妊娠期CA、16例妊娠期CA組織中Ob 及Ob-R表達。結果：Ob及Ob-R表達于角質形成細胞胞質。Ob 及Ob-R在非妊娠期CA組患者組織中呈弱陽性、陽性表達，表達于基底層、棘層和顆粒層；Ob 及Ob-R在妊娠期CA患者皮損組織中呈陽性、強陽性表達，主要表達于基底層、棘層和顆粒層；妊娠期CA組織中Ob及Ob-R表達量高于非妊娠期CA組，差異有統計學意義(P<0.01)；妊娠期CA組皮損中Ob和Ob-R的表達呈正相關關系(r=0.714,P<0.01 )。結論：①非妊娠期CA與妊娠期CA組織的基底層、棘層和顆粒層均有不同程度的Ob及Ob-R表達，可能與CA組織表皮細胞異常增殖過程有關；② Ob及Ob-R在妊娠期CA組織中過度表達，可能促進了妊娠期CA組織表皮細胞的過度增殖。

瘦素；瘦素受體，尖銳濕疣；妊娠

尖銳濕疣(condyloma acuminatum,CA)是由人類乳頭瘤病毒(HPV)感染引起的一種良性增生性疾病，主要發生在肛周及外生殖器等皮膚與黏膜處，其組織病理學的主要特征為表皮角質形成細胞過度增殖。臨床上，妊娠期CA與非妊娠期CA相比，疣體生長迅速，多點并發、治療后極易復發。其發生機制尚未完全闡明。有研究表明，Ob與其受體特異性結合，可以作為促有絲分裂劑及非特異性促腫瘤生長因子，促進腫瘤細胞生長和增殖[1-3]。妊娠期CA雖屬于良性增生，但其皮損處表皮細胞過度、過快地增殖，具有與實體惡性腫瘤極其相似的生物學特征。研究證實，妊娠期體內多種生理、病理過程與孕婦體內Ob水平升高有關[4-5]。筆者通過檢測、分析Ob和Ob-R在非妊娠期CA及妊娠期CA組織中的表達，探討其在妊娠期CA組織發展過程中的可能作用。

1　資料與方法

1.1組織標本收集我院皮膚性病科2015年1月～2016年1月女性CA患者外陰及肛周皮損組織，均經組織病理學確診。其中，非妊娠期CA組24例(年齡18～42歲；病程2周～3月)；妊娠期CA組16例(年齡21～36歲，病程2周～2月，孕8～20周)。所有患者就診前4周內未接受過任何治療，入選患者均無肥胖癥、高血壓、糖尿病、乳腺癌等系統性疾病和腫瘤性疾病。每個標本經10%中性福爾馬林固定液固定后常規制成蠟塊，制成5 μm厚度4張，其中1張進行常規蘇木素-伊紅(HE)染色,2張行免疫組化染色檢測Ob和Ob-R表達，1張PBS液代替一抗作陰性對照。

1.2主要試劑鼠抗人Ob單克隆抗體(sc-28344)、鼠抗人Ob-R單克隆抗體(sc-8391)購自美國Santa Cruz Biotechnology公司,PV-6000免疫組化檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3免疫組化二步法檢測各組組織中Ob和Ob-R表達石蠟切片常規脫蠟至水化，3%H2O2去離子水室溫孵育5 min，以阻斷內源性過氧化物酶，PBS沖洗；滴加一抗4℃過夜，PBS洗滌2 min×3次；滴加酶標記的二抗37℃孵育20 min，PBS洗滌2 min×3次；DAB溶液顯色，蒸餾水沖洗、復染、脫水、透明封片。用PBS液代替一抗作陰性對照，用已知陽性片作陽性對照。

1.4結果判定參照文獻[6]的方法，免疫組化染色以包膜或胞質棕黃色著色為陽性細胞,根據陽性細胞染色強度和百分比確定Ob、Ob-R在各組組織中的半定量分級：① 按細胞著色強度，無染色為0分(陰性)，淺黃色為1分(弱陽性)，黃色為2分(陽性)，棕黃色為3分(強陽性)；②按陽性細胞百分比，0分為無陽性細胞，1分為陽性細胞數<25%，2分為陽性細胞數25%～50%，3分為陽性細胞數51%～75%，4分為陽性細胞數>75%。根據上述兩項分值的乘積判定結果，0分為陰性，1～4分為弱陽性(+)，6～8分為陽性()，9～12分為強陽性()。采用Image J圖像分析軟件，對染色陽性的切片進行半定量分析。在相同條件下對同一批染色切片進行圖像采集，每張切片隨機取5個高倍(×400)鏡視野，測定每張圖像的平均光密度值(average optical density,AOD),以每張切片5個視野平均光密度值的平均值作為該張切片測量值。

2　結果

2.1一般臨床資料的可比性分析非妊娠期CA組與妊娠期CA組患者年齡、病程差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1兩組間年齡、病程的比較

組別例數年齡/歲病程/周非妊娠期CA組2428.58±5.8528.67±17.08妊娠期CA組1626.88±3.8827.50±12.48t值1.0250.234P值>0.05>0.05

2.2Ob的表達Ob表達于角質形成細胞的胞質，呈棕黃色顆粒。Ob在非妊娠期CA組織中呈弱陽性表達，表達于基底層、棘層和顆粒層(圖1a)。在妊娠期CA組織中呈陽性、強陽性表達，主要表達于基底層、棘層和顆粒層(圖1b)。圖像分析顯示AOD值在非妊娠期CA組、妊娠期CA組分別為0.211±0.019和0.272±0.014。統計學分析顯示：非妊娠期CA組與妊娠期CA組患者Ob表達量差異具有統計學意義(t=<10.795,P<0.01)。

a：Ob在非妊娠期CA組織中的弱陽性表達；b：Ob在妊娠期CA組織中的陽性表達。

圖1不同時期CA組織中Ob的表達(PV-6000×400)

2.3Ob-R的表達Ob-R表達于角質形成細胞的胞漿，呈棕黃色顆粒。Ob-R在非妊娠期CA組織中呈弱陽性表達，表達于基底層、棘層和顆粒層(圖2a)。在妊娠期CA組織中呈陽性表達，主要表達于基底層、棘層和顆粒層(圖2b)。圖像分析顯示AOD值在非妊娠期CA組、妊娠期CA組分別為0.220±0.018和0.301±0.021。統計學分析顯示：非妊娠期CA組與妊娠期CA組之間Ob-R表達量差異有統計學意義(t=<13.086，P<0.01)。

2.4妊娠期CA組患者皮損中Ob和Ob-R表達的相關性分析直線相關分析顯示妊娠期CA組患者皮損中Ob和Ob-R的表達呈正相關(r=0.714,P<0.01)。

a：Ob-R在非妊娠期CA組織中的弱陽性表達；b：Ob-R在妊娠期CA組織中的強陽性表達。

圖2不同時期CA組織中Ob-R的表達(PV-6000×400)

3　討論

妊娠并發CA是皮膚科醫生面臨的較為棘手的問題，疣體生長迅速，采用冷凍、微波或二氧化碳激光等物理治療后，疣體極易復發。研究認為可能與以下因素有關：①妊娠期機體細胞免疫功能下調，削弱了機體的抗病毒能力，可能促進了HPV病毒的復制；②妊娠期體內內分泌狀態及激素水平的變化，可能是妊娠期CA組織過快增殖的重要原因之一。但其確切的機制尚未完全闡明。

Ob是一種由肥胖基因編碼、由脂肪細胞分泌的多肽類激素，含167個氨基酸，通過與Ob-R特異性結合發揮多種生物學功能，如調節攝食、能量代謝，生長，促進細胞增殖、血管生成，參與腫瘤形成等[7]。研究證實，Ob及Ob-R參與了口腔鱗狀細胞癌、乳腺癌、食管癌、子宮內膜癌等多種惡性腫瘤的發生與發展[8-11]。

本研究結果顯示，①Ob及Ob-R在非妊娠期CA組患者皮損組織中呈弱陽性表達，表達于基底層、棘層和顆粒層；②Ob及Ob-R在妊娠期CA患者皮損組織中呈陽性、強陽性表達，表達于基底層、棘層和顆粒層；③兩組Ob及Ob-R表達量差異有統計學意義(妊娠期CA組Ob及Ob-R表達量高于非妊娠期CA組)；④Ob與Ob-R在兩組組織中的表達位置、表達量及表達趨勢相一致。據此，筆者推測，①非妊娠期CA與妊娠期CA組織基底層、棘層和顆粒層內存在的Ob及Ob-R，可能與CA組織表皮細胞異常增殖有關；②Ob及Ob-R在妊娠期CA組織表皮細胞中過度表達，可能促進了妊娠期CA疣體處表皮細胞過快、過度增殖。究其原因，應與孕婦增加的脂肪組織及胎盤的旁分泌或內分泌產生大量Ob有關[4]。

目前研究認為，Ob與Ob-R特異性結合后主要通過Janus激酶/信號傳導及轉錄活化子(janus kinase/signal transducers and activators of transcription,JAK/STAT)途徑發揮促細胞增殖作用[12]。Ob-R本身無酪氨酸激酶活性，當Ob與其結合后，可活化JAK激酶，使受體胞內域的酪氨酸殘基磷酸化，Ob-R與蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用后，使STAT分子的酪氨酸被磷酸化，磷酸化的STAT分子可形成同源或者異源二聚體，后者被易位釋放到細胞后，與相應靶基因啟動子結合而激活相應基因轉綠與表達，并最終啟動細胞增殖過程[12]。

綜上所述，筆者認為妊娠期CA疣體的過快、過度增殖可能與Ob及Ob-R在表皮細胞內的過度表達有關，但其具體作用機制尚有待于進一步研究。

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Expression and implications of leptin and leptin receptor in the epidermis of pregnant women with condyloma acuminatum

JIA Yueqin,JIANG Xin,SHI Changzhu,ZHU Yingyu,XIE Zhenlan,LIU Ying

Department of Dermatology & STD，Tongling People′s Hospital,Tongling 244000,China

Objective： To investigate the expression and implications of leptin (Ob) and leptin receptor (Ob-R) in the epidermis of pregnant women with condyloma acuminatum(CA).Methods:Immunohistochemical technique was used to detect the Ob and Ob-R in the genital condylomata in 24 non-pregnant women and 16 pregnant women,respectively.Results:Ob and Ob-R were primarily expressed in the cytoplasm of keratinocytes,and present in positive expression or weak expression in the basal cell layer,prickle cell layer and stratum granulosum of warts in the non-pregnant women,whereas positive or strong expression in the epidermic warts in pregnant women.Pregnant women had higher expression of Ob and Ob-R than their counterparts(P<0.01),and Ob expression was positively correlated with that of Ob-R in CA tissues in pregnant women(r=0.714,P< 0.01).Conclusion:Ob and Ob-R expressed to a certain extent in basal cell layer,prickle cell layer and stratum granulosum of warts in both pregnant and non-pregnant women suggests that the two proteins are associated with the abnormal proliferation in the epidermic cells of CA,and over-expression of Ob and Ob-R in pregnant women may be attributable to the excessive proliferation of the epidermic cells in CA during pregnancy.

leptin;leptin receptor;condyloma Acuminatum;pregnancy

1002-0217(2016)05-0470-03

銅陵市臨床醫學實驗室科技計劃資助項目(銅科[2015]40號)；銅陵市衛計委科研立項項目(銅衛科[2015]2號)

2016-03-01

賈月琴(1975-)，女，副主任醫師，(電話)13655623108，(電子信箱)jyq1976@163.com.

.25;R 752.53

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2016.05.019