結腸癌組織DPD和Ki-67蛋白的表達和臨床意義

艾曉晴，賈喜花

（1.承德醫學院，河北承德 067000；2.保定市第一中心醫院）

結腸癌組織DPD和Ki-67蛋白的表達和臨床意義

艾曉晴1，賈喜花2△

（1.承德醫學院，河北承德 067000；2.保定市第一中心醫院）

目的：探討結腸癌組織二氫嘧啶脫氫酶（DPD）、細胞增殖核抗原Ki-67的表達及臨床意義。方法：采用免疫組織化學法檢測70例結腸癌組織和30例癌旁正常組織DPD、Ki-67蛋白的表達情況，并分析二者與結腸癌臨床病理特征的關系。結果：結腸癌組織DPD、Ki-67的陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05）。結腸癌組織DPD、Ki-67表達與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無關（P＞0.05），與pTNM分期和浸潤深度有關（P＜0.05）。結腸癌組織DPD、Ki-67的表達呈正相關關系（r=0.283，P＜0.05）。結論：DPD、Ki-67可能共同參與了結腸癌的發生發展過程，二者表達升高可能與結腸癌的不良預后有關。

二氫嘧啶脫氫酶；Ki-67；結腸癌

結腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，發病率呈逐年升高的趨勢。結腸癌患者早期常無特異性表現，確診時往往已屬中晚期，因此，積極尋找預測結腸癌生物學行為的標志物對結腸癌的治療和評價預后具有重要意義。二氫嘧啶脫氫酶（DPD）是5-FU分解代謝的限速酶，與核酸的合成和分解代謝相關，多項研究表明，腫瘤組織中DPD水平與5-FU的抗癌效應有密切關系，近年來成為消化道惡性腫瘤的研究熱點［1］。Ki-67是目前應用最廣泛的增殖細胞標志物之一，是檢測腫瘤增殖活性最可靠的指標。本研究旨在檢測DPD、Ki-67在結腸癌組織中的表達情況及二者的相關性，并探討二者在結腸癌發生發展中的意義。

1　材料與方法

1.1一般資料 2011年1月-2012年12月保定市第一中心醫院經外科手術切除并經病理診斷的原發性結腸癌患者70例，均為腺癌。男38例、女32例，年齡28-83歲、中位年齡60歲；術前均未行放、化療及生物靶向治療等；按2010年美國聯合癌癥分類委員會（AJCC）制定的標準，患者TNM病理分期，Ⅰ-Ⅱ期49例，Ⅲ-Ⅳ期21例；高分化29例，中分化31例，低分化10例。取癌旁正常組織標本30例（距腫瘤邊緣＞5cm的正常組織）作為對照。

1.2試劑 鼠抗人DPD單克隆抗體（1：150稀釋）、兔抗人Ki-67單克隆抗體（1：50稀釋），美國Abcam公司；通用免疫組織化學SP試劑盒和DAB顯色試劑，福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3免疫組化染色 應用免疫組織化學染色SP二步法。DPD陽性染色呈棕黃色顆粒，主要位于細胞質；Ki-67陽性染色呈棕黃色顆粒，主要位于細胞核。

1.4結果判定 染色切片在雙盲情況下由兩名病理科資深醫師觀察并評價結果。①每例每個指標隨機觀察5個400倍高倍視野，計數陽性細胞數，根據陽性細胞百分率＜5%、5%-25%、26%-50%、51%-75%、＞75%分別計0、1、2、3、4分。②根據顯色強度，未著色、淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計0、1、2、3分。根據①×②判定最終結果：0-1分為（-）、2-4分為（+）、5-8分為（++）、9分以上為（+++），以（-）為陰性表達，（+）、（++）、（+++）為陽性表達。

1.5統計分析 采用SPSS 19.0軟件進行統計分析，計數資料采用卡方檢驗，相關性行Spearman等級相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1結腸癌和癌旁組織DPD、Ki-67的表達情況 結腸癌組織DPD、Ki-67的陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織（P＜0.05）。見表1：

表1　結腸癌和癌旁組織DPD、Ki-67的表達

2.2DPD、Ki-67表達與結腸癌臨床病理特征的關系 結腸癌組織DPD、Ki-67表達與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無關（P＞0.05）；與pTNM分期和浸潤深度有關（P＜0.05）：Ⅲ-Ⅳ期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期，T3、T4明顯高于T1、T2。見表2：

表2　DPD、Ki-67表達與結腸癌臨床病理特征的關系

2.3結腸癌組織DPD、Ki-67表達的相關性 結腸癌組織DPD、Ki-67的表達呈正相關關系（r=0.283，P＜0.05）。見

表3：

表3　結腸癌組織DPD、Ki-67表達的相關性

3　討論

二氫嘧啶脫氫酶（DPD）是5-FU分解代謝起始階段的降解酶，在輔基NADPH的參與下，將5-FU還原為二氫氟尿嘧啶（FUH2），再經二氫嘧啶酶打開環狀結構，產生5-氟-β-酰脲丙酸（FUPA），最后在β-丙氨酸合成酶催化下，形成5-氟-β-丙氨酸（FBAL）經腎臟排出體外［2］。5-FU進入體內后，80%以上在肝臟和其他組織中分解，而決定5-FU細胞毒性的合成代謝只占極少比例，作為5-FU分解過程的關鍵酶，DPD活性高低直接決定了5-FU進入合成代謝和產生核苷酸類似物的量［3-5］。Ki-67是目前應用最廣泛的增殖細胞標志物之一，大量實驗研究表明，Ki-67的表達主要定位于增殖期細胞核，可見于細胞周期的所有活動階段（G1期、S期、G2期），它的表達與細胞周期及細胞生長分數密切相關，是檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標［6］。本研究采用免疫組化法檢測了結腸癌組織DPD、Ki-67的表達情況，結果顯示結腸癌組織DPD、Ki-67的陽性表達率均明顯高于癌旁正常組織，TNM分期越晚、浸潤深度越深，DPD、Ki-67的陽性表達率越高；并且，結腸癌組織DPD、Ki-67的表達呈正相關關系，表明二者的陽性表達與結腸癌的惡性程度和疾病進展有著密切關系。

綜上所述，本研究提示，DPD、Ki-67可能與結腸癌組織核酸代謝亢進以及結腸癌的不良預后有密切關系，聯合檢測結腸癌DPD、Ki-67蛋白的表達水平可能會有助于結腸癌的臨床診斷和預后判斷。

［1］Zhu AX， Puchalski TA， Stanton VP Jr， et al. Dihydropyrimidine dehydrogenase and thymidylate synthase polymorphisms and their association with 5-fl uorouracil/leucovorin chemotherapy in colorectal cancer［J］.Clin Colorectal Cancer，2004，3（4）:225-234.

［2］Mattison LK，Soong R，Diasio RB.Implications of dihydropyrimidine dehydrogenase on 5-fluorouracil pharmacogenetics and pharmacogenomics［J］.Pharmacogenomics，2002，3（4）:485- 492.

［3］Maring JG，van Kuilenburg AB，Haasjes J，et al.Reduced 5-FU clearance in a patient with low DPD activity due to heterozygosity for a mutant allele of the DPYD gene［J］.Br J Cancer， 2002，86（7）: 1028-1033.

［4］Etienne MC，Chatelut E，Pivot X，et al.Co-variables influencing 5-fluorouracil clearance during continuous venous infusion.A NONMEM analysis［J］.Eur J Cancer，1998，34（1）:92-97.

［5］Diasio RB， Beavers TL， Carpenter JT. Familial deficiency of dihydropyrimidine dehydrogenase. Biochemical basis for familial pyrimidinemia and severe 5-fluorour acil-induced toxicity［J］. J Clin Invest，1988，81（1）:47-51.

［6］Bruno S，Darzynkiewicz Z.Cell cycle dependent expression and stability of the nuclear protein detected by Ki-67 antibody in HL-60ceHs［J］.Cell Prolif，1992，25（1）:31-40.

EXPRESSIONS AND CLINICAL SIGNIFICANCE OF DPD AND KI-67 IN COLON CANCER

AI Xiao-qing， JIA Xi-hua
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To investigate the expression and clinical signifi cance of dihydropyrimidine dehydrogenase（DPD） and Ki-67 in colon cancer. Methods: Immunohistochemical stain was used to detect the expression of DPD and Ki-67 in 70 cases colon cancer and 30 cases adjacent normal tissues， and the relationship between DPD， Ki-67 and clinicopathologic features of colon cancer was also analyzed. Results: The positive expression rate of DPD and Ki-67 in colon cancer were obviously higher than adjacent normal tissues （P＜0.05）. In colon cancer， the expression of DPD and Ki-67 was irrelevant to sex， age， size of tumour and differentiation degree （P＞0.05）； but related to pTNM stage and infi ltration depth（P＜0.05）. In colon cancer， the Ki-67 expression was positively related to DPD expression （r=0.283， P＜0.05）. Conclusions: DPD and Ki-67 maybe involve the development of colon cancer together， and their higher expression maybe concerned with poor prognosis of colon cancer.

DPD； Ki-67； Colon cancer

R735.3

A

1004-6879（2016）01-010-03

2015-07-28）