植物血凝素誘發凝集反應及對凝血系統的影響

賈睿奕，張　慶，丁曉旭，蘇艷娜

（承德醫學院附屬醫院呼吸科，河北承德 067000）

植物血凝素誘發凝集反應及對凝血系統的影響

賈睿奕，張慶△，丁曉旭，蘇艷娜

（承德醫學院附屬醫院呼吸科，河北承德 067000）

目的：探討植物血凝素（PHA）誘發紅細胞凝集反應及對凝血系統的影響。方法：12只Wistar大鼠隨機分為實驗組和對照組，分別經尾靜脈注射植物血凝素和生理鹽水，觀察紅細胞在體內外的凝集反應、溶血現象，大鼠的一般狀況以及大鼠凝血指標的變化情況。結果：植物血凝素在體內外均能誘發凝集反應。實驗組大鼠表現為豎毛、弓背、蜷縮、顫抖，而對照組大鼠無上述表現。實驗組大鼠纖維蛋白原顯著低于對照組，凝血酶原時間、凝血酶時間、活化的部分凝血活酶時間、國際標準化比值顯著高于對照組，組間比較差異有統計學意義（P＜0.01，P＜0.05）。結論：植物血凝素在體內外均能誘發凝集反應，并能激活凝血系統，在臨床應用時應注意其對凝血系統的影響。

植物血凝素；凝集反應；凝血系統；臨床應用

植物血凝素（PHA）是一種由低聚糖和蛋白質組成的高分子糖蛋白，能與人和動物的紅細胞受體相結合，引起凝集反應，故命名為植物血凝素［1］。植物血凝素可從植物的根、莖、種子等部位進行萃取、提純，有著較為廣泛的應用，如用于各種細菌、病毒性疾病的治療和預防，以及腫瘤性疾病的治療［2-5］。植物血凝素還具有一個特性，即在體外能夠引起紅細胞發生凝集反應，但在體內的凝集反應尚不明確。目前，國內外對植物血凝素的研究還不充分，臨床應用中也未注意到其體內的凝集現象。是否血凝素在體內也能誘發紅細胞發生凝集反應，并導致凝血系統及微循環的障礙，本研究對此進行了探討。

1　材料與方法

1.1實驗動物與試劑 SPF級Wistar大鼠12只，雌雄各半，體重150-200g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供（許可證號：SCXK（京）2012-0001）。實驗中按實驗動物使用的3R原則給予大鼠人道關懷。植物血凝素，購自上海生物實驗技術有限公司。

1.2方法

1.2.1動物分組：大鼠隨機分為血凝素實驗組和生理鹽水對照組，每組6只（雌雄各半），分別經尾靜脈注射血凝素和生理鹽水，劑量均為1.5ml/100g。

1.2.2觀察指標：經靜脈注射血凝素和生理鹽水4h后：①觀察大鼠的一般狀況；②經大鼠尾靜脈采血，采用玻片法在顯微鏡下觀察有無凝集現象；同時，應用試管法，將血液離心后觀察有無溶血現象。

1.2.3監測凝血指標：腹腔麻醉大鼠后，經下腔靜脈取血，檢測大鼠的凝血指標：纖維蛋白原（FIB）、凝血酶原時間（PT）、凝血酶時間（TT）、活化的部分凝血活酶時間（APTT）和國際標準化比值（INR）。

1.3統計分析 數據應用SPSS 17.0軟件包進行統計處理，組間比較采用兩獨立樣本的t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1大鼠一般狀況 實驗組大鼠主要表現為精神不振、弓背、蜷縮、豎毛、顫抖、反應差、活動少；對照組大鼠無上述表現。

2.2凝集及溶血現象 對照組無凝集及溶血現象；實驗組出現凝集現象，且離心后血液上清液呈橙紅色，出現溶血現象（圖1-2）。

圖1　顯微鏡下血涂片觀察（A.對照組，B.實驗組）

圖2　溶血實驗結果（左.對照組，右.實驗組）

2.3凝血指標 實驗組大鼠FIB顯著低于對照組，PT、TT、APTT、INR顯著高于對照組，組間比較差異有統計學意義（P＜0.01，P＜0.05）。見附表：

附表 兩組大鼠凝血指標檢測結果（，n=6）

附表 兩組大鼠凝血指標檢測結果（，n=6）

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3　討論

植物血凝素是一種具有較強免疫調節作用的高分子糖蛋白，對T淋巴細胞、B淋巴細胞、CIK細胞等多種免疫細胞的活性均有較強的促進作用，能夠刺激機體產生IFN-γ、IL-2、IL-4等多種細胞因子［6-7］。植物血凝素在臨床上用于各種細菌、病毒性疾病的治療和預防、也可用于腫瘤的治療。但目前對植物血凝素的研究還有不同觀點，有研究報道原發性腫瘤細胞的淋巴轉移、血行轉移等與體內血凝素結合位點的存在呈正相關關系；同時，植物血凝素也可誘發人體的過敏癥狀［8-9］。雖然植物血凝素在體外的凝集現象被廣泛熟知，但在體內可能由于血漿的稀釋作用，紅細胞的凝聚現象減弱，從而被忽視。但當血凝素在體內達到一定濃度后，紅細胞凝集能力加強，通過微血管時可能會使血管內皮受損，從而激活凝血系統，產生繼發凝血和纖溶失衡。

本研究將植物血凝素注入大鼠體內，當血凝素進入血液并達到一定濃度后，血液出現凝集反應，導致紅細胞凝集成團，阻塞毛細血管，從而造成組織缺血缺氧，大鼠出現相應的病理表現，如精神不振、弓背、蜷縮、豎毛、顫抖等；同時本研究發現，體內出現凝集反應后，在補體的作用下可發生溶血；并伴隨著纖維蛋白原的下降，凝血酶原時間、凝血酶時間、活化的部分凝血活酶時間等明顯升高，提示凝血系統被激活。

隨著相關研究的不斷深入，作為免疫學領域極其重要的藥物，植物血凝素不但具有巨大的應用前景，而且植物血凝素抗菌、抗病毒、抗腫瘤的作用也逐漸應用于臨床。但在臨床應用時應注意，植物血凝素在體內還具有誘發紅細胞凝集的作用，并且可引起凝血系統的改變。

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［2］van Asbeck EC，Hoepelman AI，Scharringa J，et al.Mannose binding lectin plays a crucial role in innate immunity against yeast by enhanced complement activation and enhanced uptake of polymorp honuc-lear cells［J］.BMC Microbiology，2008，8（1）:1-10.

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［5］Ang AS，Cheung RC，Dan X，et al.Purification and characterization of a glucosamine-binding antifungal lectin from Phaseolus vulgaris cv.Chinese pinto beans with antiproliferative activity towards nasopharyngeal carcinoma cells［J］.Appl Biochem Biotechnol，2014，172（2）: 672-686.

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AGGLUTINATION REACTION INDUCED BY PHYTOHEMAGGLUTININ AND ITS’ EFFECTS ON
COAGULATION SYSTEM

JIA Rui-yi， ZHANG Qing， DING Xiao-xu， et al
(Department of Respiratory Medicine, the Affiliated Hospital of Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective: To explore the agglutination reaction induced by phytohemagglutinin （PHA） and it's effects on coagulation system. Methods: 12 Wistar rats were randomly divided into experimental group and control group，which were injected PHA and 0.9% saline into caudal vein respectively. The agglutination of red blood cells in vitro and in vivo， hemolysis， the rats' general conditions and coagulation markers of rats were observed. Results: PHA could induce agglutination reaction and hemolysis in vitro and in vivo. The rats in experimental group showed the following performance: piloerection， arched， cured up and trembling； but the rats in control group did not show above performance. The fi brinogen of rats in experimental group was obviously lower than that of rats in control group （P＜0.01）； While the prothrombin time， thrombin time， thromboplastin time and international normalized ratio were obviously higher （P＜0.01， P＜0.05）. Conclusions: PHA can induce agglutination reaction in vivo and in vitro； it also can activate coagulation system. Clinical application should pay attention to its' effects on coagulation system.

Phytohemagglutinin （PHA）；Agglutination reaction；Coagulation system；Clinical application

R392-3

A

1004-6879（2016）01-012-03

2015-04-07）

（基礎醫學欄目編輯：陳志宏）