新兵(學員)預防接種20 μg重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母)的免疫效果分析①

唐 玥 楊 益 孫走南 李瑾慧 蘇文莉 張 潔 黃留玉 常國輝

(軍事醫學科學院疾病預防控制所免疫規劃中心，北京100071)

新兵(學員)預防接種20 μg重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母)的免疫效果分析①

唐 玥 楊 益 孫走南 李瑾慧 蘇文莉 張 潔 黃留玉②常國輝②

(軍事醫學科學院疾病預防控制所免疫規劃中心，北京100071)

目的：分析評價軍隊某部乙型肝炎表面抗體(Antibody to hepatitis B virus surface antigen,抗-HBs)陰性/弱陽性的新入伍人員，接種劑型為20 μg/ml的釀酒酵母重組乙型肝炎疫苗(Recombinant hepatitis B vaccine derived Saccharomyces Cerevisiae Yest,HepB-SCY)后的免疫效果。方法：利用酶聯免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)，篩選抗-HBs為陰性的3 251名和弱陽性的1 090名新兵(學員)為實驗觀察對象，按照0、1和6的接種程序，接種20 μg/ml劑型的HepB-SCY，分別在每針接種后第28天采血，用化學粒子發光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay,CLIA)檢測血清抗體的幾何平均濃度(Geometric mean titer,GMT)。結果：觀察對象全程免疫后，在弱陽性新兵(學員)中，第1、2和3針接種后陽轉率分別為90.24%、97.82%和99.52%，第2針免疫后的陽轉率明顯優于1針免疫后陽轉率(χ2=25.65，P<0.01)，而第2與3針免疫后的陽轉率之間無統計學差異(χ2=4.66，P>0.01)；第1和第2針免疫后乙肝表面抗體的GMT值分別為1 575.92 mU/ml(374.94～4 606.45)和2 144.592 mU/ml(757.078～6 089.4)，二者的GMT水平存在統計學差異(Z=-2.372，P<0.01)。在陰性人群中，第2和第3針接種后陽轉率分別為86.13%和98.72%，其中，高應答反應陽轉率分別為56.43%和87.53%，第3針免疫后的陽轉率明顯優于第2針(χ2=118.5，P<0.05)，第3針免疫后的高應答反應率也明顯高于第2針(χ2=231.07，P<0.05)；第1、2和3針免疫后的GMT值分別為101.352 mU/ml(2.11～409.23)、155.812 mU/ml(26.76～840.78)和747.312 mU/ml(228.60～1893.6)，第2和3針的GMT水平之間差異存在統計學意義(Z=-23.042,P<0.01)，第1和2針的GMT水平之間差異也存在統計學意義(Z=-3.099,P<0.01)。結論：接種20 μg/ml劑型的HepB-SCY可激發機體產生較高水平的抗-HBs，并可有效提高群體的陽轉率和高應答反應率。

新兵(新學員)；重組乙肝疫苗；免疫效果

目前，接種乙肝疫苗是國際上公認的有效降低乙肝病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染率的手段之一[1]。全世界有近180個國家將乙型肝炎疫苗加入計劃免疫之列，其中有些國家已經向全年齡人群實施乙型肝炎疫苗計劃免疫。我國自1992年實施新生兒乙型肝炎疫苗計劃免疫以來，乙肝報告發病率呈下降趨勢，但是，2014年中國疾病預防控制中心的統計數字顯示，我國仍有9 000萬乙肝病毒攜帶者，其中有2 800萬是慢性乙肝患者，幾乎占全國人口的7%，每年因慢性乙肝導致的癌癥相關死亡病例高達33萬多例，乙肝仍然是一個重要的公共衛生問題[2]。我軍自2006年開始實施新兵(學員)接種10 μg/ml乙型肝炎疫苗的免疫措施[3]，近10年來，軍隊乙型肝炎發病率在全軍報告傳染病的發病序位，一直高居前3位，成為嚴重危害軍隊人群健康的主要傳染病之一。本研究通過對抗-HBs陰性和弱陽性的新兵全程接種20 μg/ml劑量的重組乙型肝炎疫苗，監測每針接種后的抗體陽轉率和抗體濃度，為進一步制定適合軍隊的乙型肝炎疫苗免疫策略提供重要數據參考。

1 材料與方法

1.1 觀察對象 2013年某軍校入學新學員和某集團軍入伍新兵，年齡分布在16～20歲間的健康人群，無乙型肝炎感染史，在觀察期間和觀察前2周內無接種其他生物預防制品及免疫球蛋白，對疫苗成分無過敏史，無肌肉注射禁忌，腋下體溫≤37.0℃，本人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 篩選與分組 首先，利用酶聯免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELSIA)檢測并剔除抗-HBs陽性的對象，并采用放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)測定乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)和抗-HBs，剔除HBsAg陽性或抗-HBs 幾何平均濃度(Geometric mean titer,GMT)≥100 mU/ml的對象,再用化學粒子發光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay,CLIA)篩選出HBsAg陰性、抗-HBs<100 mU/ml者為實驗觀察對象。其中，10 mU/ml≤抗-HBs<100 mU/ml為抗-HBsAg弱陽性監測對象組；抗-HBs<10 mU/ml為抗-HBs陰性監測對象組。全部觀察對象均按照3針免疫程序，每人單次接種1 ml重組乙型肝炎疫苗(20 μg/ml),監測對象分別在接種第1針、第2針和第3針后28 d，采血3 ml進行抗-HBs檢測。

1.2.2 疫苗與接種 重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母)，由北京天壇生物股份有限公司研制生產，經中國食品藥品檢定研究院檢定，符合《重組乙型肝炎疫苗(酵母)制造及檢定規程》要求。規格為每支20 μg/ml，在2～8℃冷藏條件下保存和運輸。免疫程序為0、1、6個月進行接種，于上臂三角肌肌內注射。

1.2.3 抗體檢測和判定標準 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)、放射免疫法(RIA)初篩和化學微粒子發光免疫分析法(CLIA法，試劑為美國雅培公司生產，檢測方法依據試劑說明書)復檢相結合的方式，分別檢測新兵和新學員入伍前血清抗-HBs和接種不同針次疫苗后的血清抗-HBs?？贵w水平的判斷標準如下：觀察對象抗-HBs<10 mU/ml，為陰性；10 mU/ml≤抗-HBs<100 mU/ml，為弱陽性；抗-HBs≥100 mU/ml，為陽性。觀察對象免疫前抗-HBs<10 mU/ml，免后抗-HBs≥10 mU/ml，或免前10 mU/ml≤抗-HBs<100 mU/ml，免后抗-HBs≥100 mU/ml視為陽轉；觀察對象免前抗-HBs<10 mU/ml，免后抗-HBs≥100 mU/ml，視為抗體高應答反應。

1.2.4 質量與安全 嚴格按照《預防接種工作規范》的有關要求進行操作，所有研究者均具有相應崗位資質證書。在接種疫苗后30 min和6、24、48、72 h，研究人員對觀察對象進行系統的不良反應觀察。從接種疫苗后第4天～第4周，采取主動報告與定期隨訪相結合的方式觀察疫苗接種后的不良反應。

1.3 統計學分析 采用Excel和SAS軟件，對調查數據和實驗結果進行統計學處理，抗體陽轉率比較采用χ2檢驗；抗體幾何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)的組間比較采用獨立樣本的非參數秩和檢驗(Mann-Whitney秩和檢驗)。

2 結果

2.1 乙肝疫苗免疫前抗-HBs水平檢測 通過 ELISA法初篩和CLIA法復檢，對10 102份血清標本進行抗-HBs水平的篩查，有4 341名觀察對象符合試驗要求。其中，陰性觀察對象共有3 251名，抗-HBs<10 mU/ml；弱陽性觀察對象共有1 090名，10 mU/ml≤抗-HBs<100 mU/ml，結果見表1。

2.2 乙肝疫苗免疫后監測對象的陽轉率 弱陽性人群第1針接種后共采血779份，抗-HBs陽轉人數為703人，陽轉率為90.24%；第2針接種后共采血459份，陽轉人數為449人，陽轉率為97.82%；第3針接種后共采血417份，陽轉人數為415人，陽轉率為99.52%。統計分析顯示：抗-HBs弱陽性觀察對象中，乙型肝炎疫苗2針免疫后的陽轉率明顯優于1針免疫后陽轉率(χ2=25.65，P<0.01)，而3針免疫后與2針免疫后陽轉率無統計學差異(χ2=4.66，P>0.01)，結果見表2。

陰性人群第2針接種后共采血2 293份，抗-HBs陽轉人數為1 975人，陽轉率為86.13%，其中，高應答人數為1 294人，高應答反應陽轉率為56.43%。第3針接種后共采血1 868份，陽轉人數為1 844人，陽轉率為98.72%，其中高應答人數為1 635人，高應答反應陽轉率為87.53%。統計分析顯示：抗-HBs陰性觀察對象中，乙型肝炎疫苗3針免疫后的陽轉率明顯優于2針免疫后的陽轉率(χ2=118.5，P<0.05)，結果見表3；乙型肝炎疫苗3針免疫后的高應答反應陽轉率也明顯優于2針免疫后的高應答反應陽轉率(χ2=231.07，P<0.05)，結果見表4。

表1 乙型肝炎表面抗體水平統計

Tab.1 Statistics of hepatitis B surface antibody level

ObservedparticipantsPositive(%)Weaklypositive(%)Negative(%)101025761(57.03)1090(10.79)3251(32.18)

2.3 乙肝疫苗免疫后監測對象的抗-HBs滴度 弱陽性觀察對象中，乙肝疫苗第1針免疫后抗-HBs的GMT值為1 575.92 mU/ml(374.94～4 606.45)，第2針免疫后抗-HBs的GMT值為2 144.59 mU/ml(757.078～6 089.4)，采用Mann-Whitney秩和檢驗(Median，QR，即中位數，四分位間距)方法統計分析顯示:乙型肝炎疫苗第2針免疫后GMT水平與第1針免疫后GMT水平差異存在統計學意義(Z=-2.372，P<0.01)，同時，與第1針免疫后GMT的數據分布相比，第2針免疫后的GMT數據較集中于高數值區間，表明其具有更好的群體免疫效果，結果見表5。

陰性觀察對象中，乙肝疫苗1針、2針和3針免疫后的GMT值分別為101.35 mU/ml(2.11～409.23)、155.81 mU/ml(26.76～840.78)和747.31 (228.60～1 893.6)，分析顯示：乙肝疫苗第3針免疫后GMT水平與第2針免疫后GMT水平存在統計學差異(Z=-23.042,P<0.01)，第2針免疫后GMT水平與第1針免疫后GMT水平存在統計學差異(Z=-3.099,P<0.01)，其中，第3針接種后GMT數據分布更集中于高值區間，表明其群體免疫效果明顯優于第2針接種和第1針接種，結果見表6。

表2 弱陽性人群乙肝疫苗免疫后陽轉率分析

Tab.2 Seroconversion rates after 20 μg dosages of HepB-SCY in weakly positive recruits

InoculationtimesObservedparticipantsSeroconversion(%)95%CIχ2P3rd417415(99.52)98.95%-100.13%4.66>0.012nd459449(97.82)96.48%-99.16%25.65<0.011st779703(90.24)87.74%-92.23%

表3 陰性人群乙肝疫苗免疫后陽轉率分析

Tab.3 Seroconversion rates after 20 μg dosages of HepB-SCY in negative recruits

InoculationtimesObservedparticipantsSeroconversion(%)95%CIχ2P3rd18681844(98.72%)98.20%-99.23%118.50<0.00012nd22931975(86.13%)84.72%-87.55%

表4 陰性人群乙肝疫苗免疫后高應答反應陽轉率分析

Tab.4 High-responding seroconversion rates after 20 μg dosages of HepB-SCY in negative recruits

InoculationtimesObservedparticipantsSeroconversion(%)95%CIχ2P3rd18681635(87.53%)86.03%-89.03%231.07<0.00012nd22931294(56.43%)54.36%-58.42%

表5 弱陽性人群乙肝疫苗免疫后的GMT分析(mU/ml)

Tab.5 GMT after 20 μg dosages of HepB-SCY in weak positive recruits(mU/ml)

InoculationtimesGMT(MedianQR)ZP2nd2144.59(757.078-6089.4)-2.372<0.011st1575.92(374.94-4606.45)

表6 陰性人群乙肝疫苗免疫后的GMT分析(mU/ml)

Tab.6 GMT after 20 μg dosages of HepB-SCY in negative recruits(mU/ml)

InoculationtimesGMT(MedianQR)ZP3rd747.31(228.60-1893.60)-23.042<0.012nd155.81(26.76-840.78)1st101.35(2.11-409.23)-3.099<0.01

2.4 安全性觀察結果 本次試驗期間，疫苗的總體不良反應發生率為1.97%(95%CI，1.17%～2.89%),未收到三級(含)及以上不良反應報告。

3 討論

我國從1992年開始實施以新生兒為主的乙肝免疫策略，目前已有20多年的預防接種史。2014年最新的調查成果顯示，全國1～4歲兒童的乙肝表面抗原的流行率降至0.32%，與2006年(0.96%)相比下降了66%，5～14歲的青少年乙肝表面抗原流行率降至0.94%，與2006年相比下降了61%，提前實現了世界衛生組織關于西太平洋地區乙肝控制的目標。但是，我國目前仍有9 000萬乙肝表面抗原攜帶者，流行率為6.95%，與2006年(7.18%)相比下降了3.2%，因此，整個人群的發病率并未出現明顯下降，乙型肝炎防治仍然不容樂觀，尤其是成人免疫策略急需加強[4-8]。

研究中涉及的10 102名觀察對象多為乙肝疫苗新生兒計劃免疫實行后出生的新兵(學員)。實驗室血清抗-HBs結果檢測顯示，部分地區新兵(學員)入伍前抗-HBs陽性率達到71.89%，平均為57.07%，弱陽性率為10.79%，說明通過基礎免疫獲得乙肝抗體的成功率已達到50%以上，有一半以上的入伍新兵已無需再進行乙肝疫苗接種。然而仍有32.18%的新兵(學員)尚未接種乙型肝炎疫苗或接種不成功。研究表明，健康人群中乙肝疫苗的無應答率為2%～15%[9],這是導致無法建立高效群體免疫屏障的重要不利因素，這種現象可能與疫苗接種的劑量偏低有關，因此，適當增加乙型肝炎疫苗的劑量可有效提高應答率[10，11]。我軍實施10 μg/ml 劑型的乙型肝炎疫苗接種已近10年，全程免疫后群體抗-HBs的陽轉率在70%～85%之間，而本次接種的疫苗為20 μg/ml劑型的重組乙型肝炎疫苗，在抗-HBs弱陽性的新兵(學員)中，第1針接種后的陽轉率90.24%,第2針接種后的陽轉率為97.82%，第2針接種后的陽轉率統計學上明顯優于第1接種后的陽轉率(χ2=25.65，P<0.01)；在抗-HBs陰性的新兵(學員)中，第2針接種后的陽轉率為86.13%,第3針接種后的陽轉率為98.72%，三針接種后的陽轉率統計學上明顯優于二針接種后的陽轉率(χ2=118.50，P<0.000 1)，其中，在抗-HBs陰性的新兵(學員)中，第2針接種后高應答反應率為56.43%，第3針接種后的高應答反應率為87.53%。免疫效果明顯優于10 μg/ml劑型的乙型肝炎疫苗。同時，實驗結果也顯示：抗-HBs陰性的新兵(學員)，第2針免疫后GMT為155.81 mU/ml，第3針免疫后GMT為747.31 mU/ml，與第2針免疫后GMT的數據分布相比，第3針免疫后的GMT數據較集中于高數值區間；抗-HBs弱陽性的新兵(學員)，第1針免疫后GMT為1 575.92 mU/ml,第2針免疫后GMT為2 144.59 mU/ml，表明20 μg劑型的乙型肝炎疫苗可以在接種人群中產生更高的抗體水平和更優群體免疫效果。因此，在條件允許情況下，接種20 μg/ml劑型的乙型肝炎疫苗，部隊官兵可以獲得更加高效和持久的免疫保護。

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[收稿2016-04-18 修回2016-07-14]

(編輯 倪 鵬)

Immune effect of 20 μg dosages of recombinant hepatitis B vaccine derived Saccharomyces Cerevisiae Yest in recruits

TANGYue,YANGYi,SUNZou-Nan,LIJin-Hui,SUWen-Li,ZHANGJie,HUANGLiu-Yu，CHANGGuo-Hui.

InstituteofDiseaseControlandPrevention,AcademyofMilitaryMedicalSciences,Beijing100071,China

Objective:To evaluate the immune effect of 20 microgram dosages of recombinant hepatitis B vaccine derived Saccharomyces Cerevisiae Yest (HepB-SCY) in recruits.Methods: A total of 4 341 subjects whose antibody to hepatitis B virus surface antigen(anti-HBs) was weak positive or negative tested by Enzyme-linked Immunosorbent Assay(ELISA) and Radioimmunoassay(RIA) were received a HepB-SCY vaccine intramuscularly at 0,1,and 6 months.Anti-HBs concentrations were evaluated by a Chemiluminescence Immunoassay (CLIA) at 28 days after every injection.Results: After the first,second and third dose,the 20 microgram dosages of HepB-SCY increased the seroconversion (anti-hepatitis B surface antigen) rate to 90.24%,97.82% and 99.52% in weak positive recruits,respectively.There were significant differences between the second dose and the first one (χ2=25.65，P<0.01),but there were no significant differences between the third dose and the second one(χ2=4.66，P>0.01).Geometric mean titer(GMT) of anti-hepatitis B surface antigen(anti-HBs) were more than 1 575.92 mU/ml(374.94-4 606.45) after the first dose and up to 2 144.59 mU/ml(757.078-6 089.4) after the second dose in weak positive recruits,showing significant difference between them(Z=-2.372，P<0.01).After the second dose and the third one,seroconversion rates in the negative recruits were 86.13% and 98.72%,respectively.And the high-responding seroconversion rates were 56.43% and 87.53%,respectively.Both of them indicating significant difference between the second dose and the third one(χ2=118.5，P<0.05),(χ2=231.07，P<0.05).The GMT in the negative recruits were 101.35 mU/ml(2.11-409.23),155.81 mU/ml(26.76-840.78) and 747.31 mU/ml(228.60-1893.6) after the first dose ,the second and the third one,respectively.There were significant different between the second dose and the third one(Z=-23.042,P<0.01),the same results between the first dose and the second one(Z=-3.099,P<0.01).Conclusion: No serious allergic reactions were observed.The 20 microgram dosages of HepB-SCY could induce higher level of anti-HBs,and increase the high-responding seroconversion rates.

Recruit(Newly enrolled cadets);Recombinant hepatitis B vaccine;Immune effect

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.03.008

唐 玥(1988年-)，女，碩士，護師，主要從事感染與免疫方面的研究。

R186.3 R183.7

A

1000-484X(2017)03-0356-05

①本文為國家新藥創制重大專項課題(2012ZX09J12106-01B)。

②通訊作者，E-mail：huangliuyuly@163.com;E-mail：changgh7@qq.com。