過敏性紫癜患者血清IL-34水平的變化及意義

王 娟 夏海龍

(安徽醫科大學第一附屬醫院血液科,合肥230022)

過敏性紫癜患者血清IL-34水平的變化及意義

王 娟 夏海龍

(安徽醫科大學第一附屬醫院血液科,合肥230022)

目的：探討過敏性紫癜(Henoch-Schoenlein purpura,HSP)患者急性期血清中IL-34的表達及意義。方法：選取HSP患者38例，同期匹配的健康人21例作為對照組，采用酶聯免疫吸附法(ELISA)及化學發光法檢測血清中IL-34、IL-6、TNF-α表達水平；采用相關分析法分析IL-34與患者臨床資料指標的關系以及與IL-6、TNF-α表達的相關性。結果：HSP患者急性期血清IL-34、IL-6、TNF-α水平均較正常對照組增高，差異具有統計學意義(P<0.001)；血清IL-34和超敏C反應蛋白(hs-CRP)、IL-6水平之間呈正相關(分別是r=0.453,P=0.004；r=0.469,P=0.003)。結論：IL-34可能參與過敏性紫癜的致病過程；可能與過敏性紫癜促炎因子的異常表達有關，促進血管炎癥的發生發展。

紫癜，過敏性;白細胞介素-34;細胞因子類

過敏性紫癜(Henoch-Schoenlein purpura,HSP)是一種較常見的以小血管壞死性炎癥為主要特征的疾病，常累及皮膚、胃腸道、關節、腎臟，病程可呈自限性，易反復發作[1]。近年來發病率呈上升趨勢，確切病因及發病機制仍不清楚[2]。Yang等[3]研究提示HSP患者急性期的血清可刺激人臍靜脈內皮細胞分泌合成IL-8、TNF-α等炎癥因子，另有研究發現HSP患者急性期IL-6、TNF-α、IL-17等促炎因子及趨化因子表達異常[4,5]；以上提示細胞因子和白介素炎癥介質在HSP發病中發揮重要作用。

IL-34是近年來新發現的細胞因子，其生物學功能主要是刺激單核細胞-巨噬細胞的增殖與分化、誘導多種細胞因子和趨化因子生成和釋放，具有促炎、促進破骨細胞形成的作用[6,7]；同時還具有誘導免疫耐受的潛能[8,9]?？梢?，IL-34是一種多功能性細胞因子。IL-34是否參與HSP血管損傷過程、在HSP疾病發病中的作用以及與其他炎癥因子在HSP發病中的相互關系，目前尚無定論。本研究通過檢測HSP患者急性期血清IL-34、IL-6、TNF-α水平，并分析IL-34與患者臨床資料指標、IL-6、TNF-α的關系，旨在探討IL-34在HSP發病中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2015年11月至2016年3月我院兒科及血液科收治的過敏性紫癜急性期患者38例(包括單純型16例、腹型7例、關節型4例、腎型11例)，其中男18例，女20例，年齡4～19歲，平均(10.66±4.04)歲；所有病例組均符合2006 年歐洲抗風濕聯盟及美國風濕病學會共同制定的HSP診斷標準，急性期為發病2 周內未使用糖皮質激素、抗組胺藥及其他免疫抑制劑。隨機選擇同期在本院健康體檢者(均排除過敏及自身免疫性疾病、近期感染病史)21例作為對照組，其中男11例，女10例，年齡5～19歲，平均(10.33±3.86)歲。納入的受試對象在性別、年齡一般資料方面差異無統計學意義(χ2=0.136，P=0.712；F=0.058，P= 0.765)，具有可比性。本研究獲得本院醫學倫理委員會批準，所有入選實驗對象及家屬均已簽訂知情同意書。

1.2 標本采集和實驗方法 采集受試對象晨起空腹靜脈血5 ml,其中3 ml立刻置枸櫞酸鈉抗凝試管中混勻，以3 000 r/min，離心15 min，分離后收集血漿，于EP管分裝后置于-80℃冰箱待檢；另2 ml置于普通生化管。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定血漿IL-34、TNF-α表達水平，ELISA試劑盒購于武漢Elabscience公司，操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。血漿IL-6水平檢測采用化學發光法檢測，試劑盒由德國西門子公司提供，血清hs-CRP水平檢測采用顆粒增強免疫透射比濁法，試劑盒由德國德賽公司提供。血清IgA、IgG、IgE、IgM水平檢測均采用免疫散射比濁法測定，試劑盒由德國羅氏公司提供。檢測儀器為羅氏Modular全自動化生化儀。

2 結果

2.1 IL-34、TNF-α、IL-6的水平測定結果及比較 IL-34 、TNF-α、IL-6三種細胞因子在過敏性紫癜患者急性期血清中表達較正常對照組顯著增高，差異均有統計學意義(P<0.001)見表1；同時，按照臨床表現將HSP病例組進行分組比較，發現不同組間IL-34水平的差異無統計學意義(P=0.105,表中未列出)。

2.2 HSP患者急性期IL-34水平和臨床各指標相關性分析 將HSP患者急性期血清IL-34水平和臨床病例資料進行相關性分析，發現IL-34和炎癥參數超敏C反應蛋白(hs-CRP)存在顯著的相關性(r=0.453,P=0.004)，與血沉ESR未見明顯相關性見圖1、表2；與年齡、補體及4種免疫球蛋白未見明顯相關性(見表2)；同時將HSP病例組按照性別將其分成2組，2組患者外周血清IL-34表達水平無統計學差異(P=0.231，表中未列出)。

2.3 HSP患者急性期IL-34水平與TNF-α、IL-6相關性分析 HSP患者急性期血清IL-34水平與TNF-α、IL-6相關性分析，我們發現IL-34與IL-6表達水平具有一定的相關性(r=0.469,P=0.003)，見圖1與TNF-α水平均無顯著相關性(r=0.123，P>0.05)未列出。

圖1 IL-34表達水平與hs-CRP、IL-6的相關性Fig.1 Correlation between expression level of IL-34 and hs-CRP,IL-6 in acute HSP

表1 HSP病例組和對照組血清中IL-34、IL-6、TNF-α表達水平的比較

Tab.1 Detection of serum levels of IL-34,IL-6 and TNF-α in patients with acute HSP and in healthy controls

GroupsnIL-34(pg/ml)IL-6(pg/ml)TNF-α(pg/ml)HSPgroup38174.96(84.01-416.70)1)16.70(7.93-23.35)1)248.84(157.32-360.25)1)Controlgroup2159.11(42.79-104.45)3.41(3.11-5.54)103.76(60.95-161.15)Zvalue-4.195-5.763-2.713Pvalue<0.001<0.0010.007

Note：1)vs control group.

表2 HSP病例組中IL-34表達與臨床病例資料的相關性

Tab.2 Correlation analysis for serum IL-34 and clinical data in patients with acute HSP

CharacteristicValueCorrelationwithIL-34Correlationcoefficient(r)PAge10.66±4.04-0.0800.635Gender(F/M)20/18--hs-CRP(mg/L)3.31(1.33-7.18)0.4530.004ESR(mm/h)14(10-25)0.2550.209C31.26(1.12-1.48)0.0310.891C40.24(0.21-0.33)-0.1000.649IgA(g/L)3.28±0.230.1150.553IgM(g/L)1.49±0.49-0.2930.138IgE(mU/ml)18(8-221)-0.2460.216IgG(g/L)10.32±2.250.0860.668

Note：C3 means complement 3;C4 means complement 4.

3 討論

研究表明細胞因子異常表達、補體異常激活、IgA1分子異常糖基化、遺傳易感性因素、外界環境因素等參與了HSP血管炎的發病過程，多種細胞因子表達異常在HSP血管壁損傷機制中起重要作用[10]。

IL-34是一種新型的細胞因子，由241個氨基酸組成二聚體蛋白，巨噬細胞、內皮細胞、成纖維細胞、神經、肝臟、上皮細胞及Treg細胞在特定的條件下均可分泌IL-34。在心、肝、腦、脾等多種組織中均可表達，尤其在脾臟中呈高表達[6,9]。IL-34與巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)相似，通過與集落刺激因子1受體(CSF-1R)結合，使細胞外信號調節激酶-1及激酶-2磷酸化，刺激單核-巨噬細胞系統增殖與分化，但二者無氨基酸序列同源性，信號激活途徑和生物活性也不盡相同[11]。近年來研究表明IL-34和多種自身免疫性疾病以及炎癥性疾病密切相關，如類風濕關節炎、潰瘍性結腸炎、干燥綜合征、冠狀動脈炎等[12-15]。尤其在類風濕關節炎中研究較為深入。Tian等[12]研究表明在類風濕關節炎患者血清IL-34的表達水平明顯增高；且和類風濕因子以及自身抗體—抗環狀瓜氨酸(CCP)抗體表達量呈正相關，提示IL-34可能類風濕關節炎中自身抗體生成有關。過敏性紫癜是常見的微血管炎之一，本研究結果顯示HSP患者急性期血清IL-34水平明顯高于健康對照組(P<0.001)，故推測IL-34可能參與過敏性紫癜的致病過程。我們推測IL-34在HSP中可能通過誘導單核巨噬細胞增殖與分化；同時促進多種細胞因子如IL-6、IL-8和單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)等的生成和分泌[16]，參與HSP微血管炎癥反應的發生發展。值得注意的是，既往研究表明在HSP急性期調節性CD4+CD25+T 細胞亞群(Treg細胞)比例明顯降低[5]。IL-34具有誘導人巨噬細胞向調節T細胞分化的潛能[9]，IL-34是否與HSP急性期CD4+T細胞亞群失調有關，還有待于進一步研究。

促炎性細胞因子TNF-α和IL-6，在機體炎癥與免疫應答反應發揮重要的作用。既往有研究表明在HSP患者皮膚病損處可見TNF-α、IL-6均呈細顆粒狀浸潤[17]；HSP患者急性期血清中TNF-α、IL-6水平較異常增高的現象[18]，同本研究結果一致?？梢?，二者參與過敏性紫癜中血管炎的病理損傷過程已明確。TNF-α可促進IL-1、TGF-β等炎癥因子的生成,促進炎癥反應，加重組織損傷；可誘導血管內皮細胞間黏附分子表達上調,誘導及加重炎癥反應；同時結合Tian等[12]研究表明類風濕性關節炎行TNF-α抑制劑治療后IL-34表達水平明顯降低；Eda等[19]研究表明在破骨細胞中TNF-α通過JNK和NF-κB信號通路促進IL-34 的表達，推測在HSP中IL-34可能是作為TNF-α的下游效應器介導組織炎癥的發生與發展。IL-6可促進B細胞增殖分化和分泌抗體，形成免疫復合物沉積于血管壁，激活補體級聯反應，破壞血管壁的完整性；促進IL-17、IL-8等促炎因子的表達[20]；刺激肝臟合成一種急性時相蛋白—hs-CRP，參與血管內皮損傷及炎癥反應[21]。Eda等[16]研究表明IL-34誘導大量細胞因子IL-6的生成和釋放，參與炎癥反應。這一點 Franzè等[22]在潰瘍性結腸炎疾病中也得出相同結論。結合本研究結果提示HSP急性期血清IL-34與hs-CRP、 IL-6水平均呈直線關系，并呈正相關(r分別為0.453、 0.469,P均<0.05)，與TNF-α水平未見明顯相關性(r=0.123，P=0.510)。我們推測在HSP急性期IL-34可能通過體內復雜的體液免疫或細胞免疫網絡促進促炎因子IL-6、hs-CRP表達上調，促進HSP血管炎癥的發生發展。目前其確切調控機制尚不清楚，有待于進一步研究。

綜上所述，HSP患者可能存在IL-34、IL-6、TNF-α的高表達，且IL-34的表達水平和IL-6、hs-CRP呈正相關，提示IL-34在HSP免疫應答中發揮促炎的重要作用；可能是促進HSP系統性血管炎發生的關鍵性細胞因子。本研究為尋求治療HSP新策略打下良好的基礎，為臨床治療尋找新的突破點。由于本研究樣本量偏小，未能根據臨床類型分組進行組間比較以及尚未研究組織中IL-34表達情況，有待擴大樣本量及進行相關基礎實驗，以進一步研究IL-34在HSP發病機制中的作用。

[1] 張 琴,鹿 玲,林 達.兒童過敏性紫癜血清IgA1和皮膚小血管IgA1的沉積及意義[J].中華皮膚科雜志,2008,41(1):55-56.

[2] Yang YH,Hung CF,Hsu CR,etal.A nationwide survey on epidemiological characteristics of childhood Henoch-Sch?nlein purpura in Taiwan[J].Rheumatology (Oxford),2005,44(5):618-622.

[3] Yang YH,Lai HJ,Huang CM,etal.Sera from children with active Henoch-Sch?nlein purpura can enhance the production of interleukin 8 by human umbilical venous endothelial cells[J].Ann Rheum Dis,2004,63(11):1511-1513.

[4] Jen HY,Chuang YH,Lin SC,etal.Increased serum interleukin-17 and peripheral Th17 cells in children with acute Henoch-Sch?nlein purpura[J].Pediatr Allergy Immunol,2011,22(8):862-868.

[5] 張 玲.過敏性紫癜患兒外周血Th17細胞與Treg細胞失衡的研究[J].中國免疫學雜志,2015,31(10):1404-1406.

[6] Lin H,Lee E,Hestir K,etal.Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome[J].Science,2008,320(5877):807-811.

[7] Chen Z,Buki K,V??r?niemi J,etal.The critical role of IL-34 in osteoclastogenesis[J].PLoS One,2011,6(4):e18689.

[8] Foucher ED,Blanchard S,Preisser L,etal.IL-34 induces the differentiation of human monocytes into immunosuppressive macrophages.antagonistic effects of GM-CSF and IFNγ[J].PLoS One,2013,8(2):e56045.

[9] Bézie S,Picarda E,Ossart J,etal.IL-34 is a Treg-specific cytokine and mediates transplant tolerance[J].J Clin Invest,2015,125(10):3952-3964.

[10] Park SJ,Suh JS,Lee JH,etal.Advances in our understanding of the pathogenesis of Henoch-Sch?nlein purpura and the implications for improving its diagnosis[J].Expert Rev Clin Immunol,2013,9(12):1223-1238.

[11] Chihara T,Suzu S,Hassan R,etal.IL-34 and M-CSF share the receptor Fms but are not identical in biological activity and signal activation[J].Cell Death Differ,2010,17(12):1917-1927.

[12] Tian Y,Shen H,Xia L,etal.Elevated serum and synovial fluid levels of interleukin-34 in rheumatoid arthritis:possible association with disease progression via interleukin-17 production[J].J Interferon Cytokine Res,2013,33(7):398-401.

[13] Zwicker S,Martinez GL,Bosma M,etal.Interleukin 34:a new modulator of human and experimental inflammatory bowel disease[J].Clin Sci (Lond),2015,129(3):281-290.

[14] Ciccia F,Alessandro R,Rodolico V,etal.IL-34 is overexpressed in the inflamed salivary glands of patients with Sjogren's syndrome and is associated with the local expansion of pro-inflammatory CD14(bright)CD16+ monocytes[J].Rheumatology (Oxford),2013,52(6):1009-1017.

[15] Li Z,Jin D,Wu Y,etal.Increased serum interleukin-34 in patients with coronary artery disease[J].J Int Med Res,2012,40(5):1866-1870.

[16] Eda H,Zhang J,Keith RH,etal.Macrophage-colony stimulating factor and interleukin-34 induce chemokines in human whole blood[J].Cytokine,2010,52(3):215-220.

[17] Besbas N,Saatci U,Ruacan S,etal.The role of cytokines in Henoch Schonlein purpura[J].Scand J Rheumatol,1997,26(6):456-460.

[18] Kimura S,Takeuchi S,Soma Y,etal.Raised serum levels of interleukins 6 and 8 and antiphospholipid antibodies in an adult patient with Henoch-Sch?nlein purpura[J].Clin Exp Dermatol,2013,38(7):730-736.

[19] Eda H,Shimada H,Beidler DR,etal.Proinflammatory cytokines,IL-1β and TNF-α,induce expression of interleukin-34 mRNA via JNK-and p44/42 MAPK-NF-κB pathway but not p38 pathway in osteoblasts[J].Rheumatol Int,2011,31(11):1525-1530.

[20] Camporeale A,Poli V.IL-6,IL-17 and STAT3:a holy trinity in auto-immunity[J].Front Biosci (Landmark Ed),2012,17:2306-2326.

[21] Howren MB,Lamkin DM,Suls J.Associations of depression with C-reactive protein,IL-1,and IL-6:a meta-analysis[J].Psychosom Med,2009,71(2):171-186.

[22] Franzè E,Monteleone I,Cupi ML,etal.Interleukin-34 sustains inflammatory pathways in the gut[J].Clin Sci (Lond),2015,129(3):271-280.

[收稿2016-06-14 修回2016-10-10]

(編輯 張曉舟)

Expression and significance of interleukin-34 level in patients with Henoch-Schoenlein purpura

WANGJuan,XIAHai-Long.

DepartmentofHematology，theFirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230022,China

Objective:To investigate the serum level of IL-34 in patients with acute phase Henoch-Schoenlein purpura (HSP) and its potential significance.Methods: 38 HSP patients were recruited,together with 21 healthy volunteers as control.The serum level of IL-34,IL-6 and TNF-α were determined using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or chemiluminescence.The correlation analysis was performed to explore the correlation of IL-34 with clinical parameters and the serum level of IL-6,TNF-α.Results: The serum levels of IL-34,IL-6 and TNF-α in HSP patients were significantly higher as compared to the control group (P<0.001).The serum level of IL-34 was positively correlated with that of high sensitive C-reactive protein (hs-CRP) and IL-6 (r=0.453,P=0.004 andr=0.469,P=0.003,respectively).Conclusion: IL-34 might be involved in the pathogenesis of HSP,and the potential mechanisms of action is associated with the aberrant expression of pro-inflammatory factors in HSP,which promote the development of inflammation in the vascular system.

Purpura，Henoch-Schoenlein;Interleukin-34;Cytokines

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.03.025

王 娟(1990年-)，女，碩士，主要從事過敏性紫癜免疫紊亂發病機制的研究，E-mail：879997378@qq.com。

及指導教師：夏海龍(1964年-)，男，博士，主任醫師，碩士生導師，主要從事過敏性紫癜發病機制的研究，E-mail：xhl1999cn@163.com。

R554.6

A

1000-484X(2017)03-0433-04