CBX7在喉鱗狀細胞癌組織中的表達及意義

張行，李巍，季文樾

(中國醫科大學附屬盛京醫院，沈陽110004)

CBX7在喉鱗狀細胞癌組織中的表達及意義

張行，李巍，季文樾

(中國醫科大學附屬盛京醫院，沈陽110004)

目的 觀察喉鱗狀細胞癌(LSCC)組織中CBX7 mRNA和蛋白的表達，探討其在LSCC發生發展中的作用。方法 收集手術切除的LSCC組織及對應的癌旁正常黏膜組織60例，采用real-time PCR法檢測CBX7 mRNA表達，Western blot法檢測CBX7蛋白表達，分析CBX7 mRNA和蛋白表達與LSCC患者臨床病理特征的關系。結果 LSCC組織和癌旁正常黏膜組織中CBX7 mRNA的相對表達量分別為6.79±2.36、1.04±0.51，LSCC組織和癌旁正常黏膜組織中CBX7蛋白的相對表達量分別為0.51±0.16、0.15±0.08，LSCC組織中CBX7 mRNA和蛋白的表達均高于癌旁正常黏膜組織(P均<0.01)。臨床分期高、合并頸部淋巴結轉移、組織分化程度低者CBX7 mRNA和蛋白表達高于臨床分期低、無頸部淋巴結轉移、組織分化程度高者(P均<0.01)。結論 LSCC組織中CBX7表達升高，CBX7參與了腫瘤形成和轉移過程，可能成為LSCC治療的新靶點和預后評價指標。

喉鱗狀細胞癌；喉癌；CBX7蛋白；CBX7 mRNA；細胞增殖

喉鱗狀細胞癌(LSCC)是喉惡性腫瘤的主要類型，占所有喉癌患者的95%[1]。目前喉癌的治療以手術為中心的綜合治療為主，但中晚期喉癌由于復發及轉移的原因致死率仍較高，而且使多數患者失去語言功能[2，3]。T3、T4期喉癌5年生存率只達到50%，因此，對于喉癌分子生物學機制的研究十分重要，其對確定喉癌治療的新靶點也有著重要意義。PcG蛋白家族可以作用于染色體的不同位點，導致染色體變構，從而調控細胞增殖、衰老及腫瘤形成[4]。CBX7蛋白是多梳蛋白家族(PcG)成員[5，6]。最近研究表明，CBX7在腫瘤形成過程中具有重要作用，其主要通過經典的Rb及p53信號通路發揮抑制細胞衰老及延長細胞壽命的作用。Zhang等[7]報道，CbX7在胃癌中發揮著原癌基因的作用。目前關于CBX7在LSCC發病中作用的報道較少。2014年11月～2016年1月，我們通過檢測LSCC組織中CBX7 mRNA及其蛋白表達，分析其與LSCC臨床病理特征的關系，為CBX7在LSCC的靶向治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2011～2014年在我院行手術切除治療的60例LSCC患者，均經病理檢查確診，術前未接受放化療。行部分喉切除術41例，全喉切除術19例。臨床分期Ⅱ期26例，Ⅲ期24例，Ⅳ期10例。合并頸部淋巴結轉移24例，無頸部淋巴結轉36例。取手術切除的癌組織標本作為觀察組，19例全喉切除患者距腫瘤邊緣2 cm以上的喉旁黏膜組織作為對照組，置液氮中-80 ℃保存。

1.2 CBX7 mRNA檢測 采用real-time PCR法。用TRIzol通用型RNA快速提取試劑盒提取組織標本中的總RNA，使用反轉錄酶進行反轉錄，2×Ex TaqMix試劑盒進行擴增。以GAPDH作為內參。根據GenBank提供的CBX7序列，應用Primer Premier5.0軟件進行引物設計。CBX7引物序列：上游5′-CATGGAGCTGTCAGCCATC-3′，下游5′-CTGTACTT-TGGGGGCCATC-3′。PCR反應條件：95 ℃預變性5 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，40個循環。以2-ΔΔCt表示目的基因相對表達量，>1為表達上調，<1為表達下調。

1.3 CBX7蛋白檢測 采用Western blot法。取凍存的組織樣本，用RIPA裂解液提取樣本總蛋白，分別取相同質量的蛋白樣品上樣10% SDS-PAGE電泳后轉印至PVDF膜。經5%脫脂奶粉室溫封閉1.5 h，加入CBX7(1∶1 000)一抗以及GAPDH(1∶1 000)一抗4 ℃孵育過夜。TBST洗膜3次，加入辣根過氧化物酶標記的二抗(1∶1 000)室溫孵育1.5 h。TBST洗膜3次，ECL顯影。以目的條帶與內參CAPDH的OD值的比值表示目的蛋白的相對表達量。

2 結果

2.1 兩組CBX7 mRNA和蛋白表達比較 觀察組CBX7 mRNA陽性表達率為100%，對照組為65.0%，兩組陽性表達率比較，P<0.01。兩組CBX7 mRNA相對表達量分別為6.79±2.36、1.04±0.51，CBX7蛋白相對表達量分別為0.51±0.16、0.15±0.08，觀察組CBX7 mRNA和蛋白表達均高于對照組(P均<0.01)。

2.2 CBX7 mRNA和蛋白表達與LSCC臨床病理特征的關系 見表1。臨床分期高、合并頸部淋巴結轉移、組織分化程度低者CBX7 mRNA和蛋白表達分別高于臨床分期低、無頸部淋巴結轉移、組織分化程度高者(P均<0.01)。

表1 CBX7 mRNA及蛋白表達與臨床病理參數的關系

3 討論

CBX7在腫瘤形成過程發揮重要作用，其在胃癌[7]、前列腺癌[8]、膀胱癌[9]、甲狀腺癌[10]、大腸癌[11]等惡性腫瘤中均有異常表達。但目前關于CBX7與LSCC關系的報道較少。作為PcG的一員，CBX7具有和家族其他成員相似的功能和分子機制，包括抑制細胞衰老和延長正常細胞壽命，其作用主要通過下調INK4a/ARF腫瘤抑制因子的表達來實現[8，12，13]。CBX7過量表達可導致T細胞淋巴瘤形成，與c-Myc協作產生具有高度侵略性的B細胞淋巴瘤已經在轉基因鼠上得以證實[14]。還有研究表明，CBX7過表達可促進小鼠胚胎成纖維細胞的存活[13]。以上研究表明，CBX7作為原癌基因參與了腫瘤的形成過程。然而也有研究顯示，CBX7可能具有潛在的腫瘤抑制作用，在一些更有浸潤性的胰腺、甲狀腺、結直腸腫瘤[10，11，15]中發現CBX7表達下調或缺失。在不同研究中CBX7的兩種截然相反的表達水平可能歸結于不同的腫瘤類型。CBX7在腫瘤形成過程中的作用和機制也遠未明確。其在不同的癌癥包括喉癌和病理學類型中的作用需要更深入的研究。

本研究發現，LSCC組織中CBX7 mRNA相對表達量明顯高于其相應的癌旁組織，且CBX7的表達與組織分化程度、臨床分期、淋巴結轉移有關，表現為組織分化程度越低、臨床分期越晚、出現淋巴結轉移，CBX7表達增高更明顯，而與患者年齡、性別無明顯關聯。因此認為，CBX7在食管鱗癌組織中表達上調，可能引起某種促癌機制活化，導致食管鱗癌發生、發展、侵襲和轉移。但其發生機制尚不清楚，有待進一步研究。

綜上所述，CBX7在喉癌的形成過程中發揮了原癌基因的作用，對了解喉癌的發生機制和實施預后評價有重要意義。然而，對CBX7的抑制功能及機制也需要更加深入研究，包括明確它作用的直接受體等，進而期待其在CBX7過表達的LSCC及其他惡性腫瘤的免疫治療領域發揮一定作用。

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季文樾(E-mail: ebhzzy3@sj-hospital.org)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.025

R739.6

B

1002-266X(2017)06-0073-03

2016-10-12)