體液與細胞免疫檢測應用在膿毒癥患者診斷中的臨床效果

欒赤兵

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.11.004

[摘要] 目的 探討細胞與體液免疫檢測診斷膿毒癥患者的臨床效果。方法 方便選取該院2015年7月—2016年7月收治的膿毒癥患者68例，其中膿毒癥37例，膿毒癥休克31例；另選取同期于該院體檢的健康人40名，檢測3組CD4、CD8、CD4/ CD8細胞與IgG、IgA及IgM體液免疫水平。結果 膿毒癥組CD4CD25Treg水平為（1.70±0.43）%，休克組為（3.55±0.82）%，明顯高于健康組（P<0.05）；膿毒癥休克組CD3水平為（35.48±3.69）%，明顯低于膿毒癥組（71.83±8.03）%與健康組（64.21±6.93）%（P<0.05），膿毒癥組與休克組對比差異無統計學意義（P>0.05）；膿毒癥組與休克組CD4水平分別為（45.13±2.5）%、（23.23±1.6）%，均低于健康組（P<0.05），休克組CD8為（11.91±1.3）%，低于健康組（29.23±2.6）%與膿毒癥組（29.14±2.7）%（P<0.05），膿毒癥組CD4/CD8為（1.55±0.06），低于健康組（1.93±0.12）與休克組（1.95±0.04）（P<0.05）；膿毒癥IgA為（2.37±0.52）mg/dL，IgG為（1 073.8±27.5）mg/dL，IgM水平為（2.03±0.25）mg/dL；休克組IgA為（2.31±0.41）mg/dL，IgG為（1 093.4±29.4）mg/dL，IgM水平為（1.98±0.21）mg/dL，均低于健康組（P<0.05）。結論 檢測膿毒癥患者細胞與體液免疫水平可評估其預后。

[關鍵詞] 體液免疫；細胞免疫；膿毒癥

[中圖分類號] R459.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）04（b）-0004-03

Clinical Effect of Humor and Assays of Cellular Immunity in Diagnosis of Patients with Sepsis

LUAN Chi-bing

Department of Clinical Laboratory， Heze Hospital， Heze， Shandong Province， 274000 China

[Abstract] Objective To study the clinical effect of humor and assays of cellular immunity in diagnosis of patients with sepsis. Methods 68 cases of patients with sepsis admitted and treated in our hospital from July 2015 to July 2016 were conveniently selected including 37 cases with sepsis and 31 cases with sepsis shock， and 40 cases of healthy persons in our hospital for physical examination at the same period were selected， and the CD4， CD8， CD4/ CD8 cells and IgG， IgA and IgM humor immunity levels of the three groups were tested. Results The CD4CD25Treg level in the sepsis group and shock group was respectively（1.70±0.43）% and （3.55±0.82）%， which was obviously higher than that in the healthy group（P<0.05），and the CD3 level in the sepsis shock group was obviously lower than that in the sepsis group and healthy group， [（35.48±3.69）% vs （71.83±8.03）%， （64.21±6.93）%]（P<0.05）， and the difference between the sepsis group and the shock group was not obvious， P>0.05， and the CD4 level in the sepsis group and shock group was respectively（45.13±2.5）% and （23.23±1.6）%， which was lower than that in the healthy group（P<0.05）， and the CD8 in the shock group was lower than that in the healthy group and sepsis group， [（11.91±1.3）% vs （29.23±2.6）%， （29.14±2.7）%]（P<0.05）， and the CD4/CD8 in the sepsis group was lower than that in the healthy group and shock group， [（1.55±0.06）vs（1.93±0.12），（1.95±0.04）]（P<0.05）， and the IgA， IgG and IgM levels in the sepsis group and shock group were respectively （2.37±0.52）， （1 073.8±27.5）， （2.03±0.25）mg/dL and （2.31±0.41），（1 093.4±29.4），（1.98±0.21）mg/dL， which were lower than those in the healthy group（P<0.05）. Conclusion Testing the immunity levels of cell and humor of patients with sepsis can evaluate the prognosis.

[Key words] Humor immunity； Cellular immunity； Sepsis

膿毒癥為臨床常見疾病之一，發生發展的主要原因在于機體免疫功能紊亂，主要死因為多器官障礙綜合征，據統計[1]其死亡率約為30%～50%。適應性與固有免疫反應在促炎性反應中均有所參與，CARS期宿主會將炎性介質與體液因子釋放出來，影響血管滲透性與張力后誘發微循環障礙，導致促炎/抗炎反應動態失衡，此為膿毒癥向嚴重膿毒癥、多器官功能不全及膿毒癥休克等嚴重后果進展的主要原因之一[2-3]。當前臨床意識到膿毒癥患者主要致死因素之一為嚴重免疫功能紊亂，若能對其發展趨勢予以了解，于免疫紊亂關鍵點實行免疫介入[4-6]，便于盡早將免疫穩態恢復阻礙疾病進展。為探討細胞與體液免疫檢測診斷膿毒癥患者的臨床效果，現選取該院2015年7月—2016年7月收治的患者68例與體檢的健康人40名，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該次研究對象來源于方便選取該院收治的膿毒癥患者68例，其中膿毒癥37例，膿毒癥休克31例，均與國際膿毒癥定義會議制定的診斷標準相符，且排除自身免疫系統疾病、病毒性肝炎、急性腦卒中、感染HIV及心肌梗死患者；入院前3個月應用免疫抑制劑或激素者。另選取同期于該院體檢的健康人40名。膿毒癥組中17例為男性，20例為女性，年齡為54～79歲，平均（63.7±5.4）歲；膿毒癥休克組中15例為男性，16例為女性，年齡為52～77歲，平均（62.4±5.1）歲；健康組中22名為男性，18名為女性，年齡為48～75歲，平均（60.2±4.5）歲。3組在一般資料上對比差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 檢測方法

膿毒癥組與膿毒癥休克組患者均于發病后采集外周靜脈血4 mL，添加20 U/mL肝素行抗凝處理，利用淋巴細胞分離液將淋巴細胞懸液分離出來，應用間接免疫熒光染色法對T細胞亞群予以檢測。將制備好的淋巴細胞懸液各100 μL取出，將1：100稀釋的100 μL抗CD3+、CD4+及CD8+單克隆抗體加入后孵育于室溫下，時間為0.5 h，而后加入1：200稀釋的100 μL二抗，同樣孵育于室溫下，時間為0.5 h，最后添加2 mL PBS液開始檢測。用流式細胞儀，每份標本檢測細胞數量為10 000個，在計算機上輸入檢測數據后用軟件處理，將CD3、CD4、CD8及CD4/CD8數據結果輸出。健康組常規收集靜脈血并處理，而后應用流式細胞儀測定CD4、CD8水平，再應用免疫比濁法測定兩組IgG、IgM及IgG水平。

1.3 統計方法

主要應用SPSS 21.0統計學軟件對上述數據開展分析和處理，計量資料表示方法為均數±標準差（x±s），組間用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組細胞免疫水平比較

膿毒癥組與休克組CD4CD25Treg水平明顯高于健康組（P<0.05）；膿毒癥休克組CD3水平明顯低于膿毒癥組與健康組（P<0.05）；膿毒癥組與休克組對比差異無統計學意義（P>0.05）；膿毒癥組與休克組CD4水平均低于健康組（P<0.05），休克組CD8低于健康組與膿毒癥組（P<0.05）；膿毒癥組CD4/CD8低于健康組與休克組（P<0.05），見表1。

2.2 3組體液免疫水平比較

膿毒癥及休克組體液免疫水平均明顯低于健康組，對比差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

注：#代表與健康組對比P<0.05。

3 討論

有研究稱膿毒癥進展后機體表現為免疫激活，隨后轉變后免疫抑制，亦可能從始至終均為免疫紊亂狀態[7]。CD4CD25Treg為人類主要免疫抑制細胞，在多種免疫調節機制中發揮參與作用。研究表明在膿毒癥患者免疫調節機制中CD4CD25Treg主要作用為抑制細胞免疫，可對機體獲得性與天然免疫產生影響。膿毒癥患者機體主要為Th2型免疫反應，Th2型細胞因子產生量增加后Th1型會明顯減少，導致細胞免疫功能受損明顯。Treg可對CD4/CD25T淋巴細胞功能予以抑制，對Th1型細胞產生介導作用，使其漂移至Th2反應，增加抗炎、促炎作用，將樹突狀細胞表面共刺激分子表達下調，對中性粒細胞、單核巨噬細胞等免疫細胞的增殖和凋亡產生影響，同時對T淋巴細胞凋亡產生誘導。諸多研究表明Treg細胞水平密切關聯于膿毒癥的發生發展，機體一旦患上膿毒癥Treg水平便會大幅度上升，而CD4CD25Treg水平多在因膿毒癥致死患者中上升，說明該免疫因子在一定程度上能夠將膿毒癥患者病情進展嚴重程度反映出來，便于臨床據此對預后進行預測。該組研究結果表明膿毒癥組與休克組CD4CD25Treg水平分別為（1.70±0.43）%、（3.55±0.82）%，明顯高于健康組（P<0.05），且休克組明顯高于膿毒癥組（P<0.05），與報道[8]一致。

在機體免疫細胞中T細胞為功能最強與數量最多的功能細胞，其可抗腫瘤與感染，成熟T細胞主要包括2個亞群，分別為CD4、CD8，前者主要在輔助T細胞上表達，對抗原信號轉導予以識別；后者主要在抑制性T細胞上表達，可殺傷癌細胞與被感染細胞。二者相互協調，維持機體免疫功能平衡。此外CD3細胞亞群亦可反映機體免疫功能狀態。報道[稱膿毒癥死亡者中淋巴細胞凋亡增加者占50%，CD4細胞數量降低明顯，進而使淋巴細胞更敏感于凋亡刺激信號，大量凋亡[9]。該組研究結果表明膿毒癥休克組CD3水平明顯低于膿毒癥組與健康組（P<0.05）；膿毒癥組與休克組CD4水平均低于健康組（P<0.05），休克組CD8低于健康組與膿毒癥組（P<0.05），膿毒癥組CD4/CD8低于健康組與休克組（P<0.05）。說明膿毒癥細胞早期免疫紊亂主要對CD4細胞產生影響，并未影響CD8細胞；而病情越嚴重CD8水平越低，故健康組CD4/CD8為（1.93±0.12），休克組為（1.95±0.04）（P>0.05）。體液免疫方面，對于感染者而言血漿免疫球蛋白降低明顯，該組主要檢測IgG、IgA及IgM，結果膿毒癥及休克組上述體液免疫指標水平均明顯低于健康組（P<0.05），與報道相近[10-12]，說明預后不良主要原因可能為嚴重感染者抗體滴度降低，體液免疫變化程度可提示疾病預后。

綜上所述，檢測細胞與體液免疫可有效診斷膿毒癥患者，未來臨床還需深入研究膿毒癥的發生機制，以有效治療，改善預后。

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（收稿日期：2017-01-15）