磷酸甘油酸變位酶-1在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達及臨床意義

黃敏玉， 黃 群， 吳 軍， 孟冬冬， 覃天資， 龍 毅

(右江民族醫學院附屬醫院泌尿外科， 廣西 百色 533000)

磷酸甘油酸變位酶-1在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達及臨床意義

黃敏玉， 黃 群， 吳 軍， 孟冬冬， 覃天資， 龍 毅

(右江民族醫學院附屬醫院泌尿外科， 廣西 百色 533000)

目的：觀察磷酸甘油酸變位酶-1(PGAM1)在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達差異，并分析PGAM1表達檢測的臨床意義。方法：收集Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者和健康體檢人群的睪丸組織標本，采用免疫組化檢測PGAM1表達水平，分析不同分型前列腺炎患者PGAM1表達差異，并分析PGAM1表達與生精功能指標卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮水平的關系。結果：Ⅰ型前列腺炎患者睪丸組織標本PGAM1表達與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睪丸組織標本PGAM1表達與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)；Ⅰ型前列腺炎患者中PGAM1低表達者的卵泡刺激素、黃體生成素、T激素水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中PGAM1低表達者的卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)。結論：除Ⅰ型前列腺炎患者外，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者PGAM1呈異常的低表達，而PGAM1呈異常的低表達對患者睪丸組織生精功能產生影響，因此PGAM1檢測在前列腺炎患者病情及生精功能障礙診斷中具有一定的臨床價值。

磷酸甘油酸變位酶-1； 前列腺炎； 生精功能

磷酸甘油酸變位酶-1(PGAM1)作為變位酶家族的一種關鍵酶，在機體糖酵解反應中起到關鍵性的作用[1]。當前已有研究證實PGAM1在人體腦、肝、腎、睪丸等組織內可正常表達，而其異常表達可誘導這些人體組織發生癌變[2～4]。另外學者張守波[5]研究發現PGAM1異常低表達與人體睪丸老化密切相關，且參與人體睪丸的支持細胞糖酵解反應，從而對睪丸組織生精功能產生影響。鑒于前列腺炎是男性生殖系統常見疾病，且與男性睪丸組織生精功能激素分泌密切相關，因此本研究收集我院收集Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者和健康體檢人群的睪丸組織標本，觀察磷酸甘油酸變位酶-1(PGAM1)在不同分型前列腺炎患者睪丸組織中的表達差異，并分析PGAM1表達檢測的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：經醫院倫委會同意，收集我院近1年期間(2016年1～12月)前列腺炎患者和健康體檢人群的睪丸組織標本。納入標準：①入院后患者均經病理診斷為前列腺炎；②患者同意參與研究，且簽定知情同意書；③患者均行性激素六項檢查，且資料完整；④患者患前列腺炎前無性功能障礙、無精子癥或少精子癥。按上述標準共入選123例前列腺炎患者和40例健康體檢人群的睪丸組織標本。參照美國國立衛生研究院的相關前列腺炎分型標準[6]，將123例前列腺炎患者分為Ⅰ型(急性前列腺炎)、Ⅱ型(慢性細菌性前列腺炎)、Ⅲ型(慢性盆腔疼痛性前列腺炎)、Ⅳ型(無癥狀性前列腺炎)前列腺炎患者，其中Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者分別為40例、42例、38例、43例，上述五組一般資料比較無顯著差異性(P>0.05)。

1.2 研究方法：以入選睪丸組織標本PGAM1表達水平以及患者生精功能指標(卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮)作為觀察指標。生精功能指標來自患者就診時性激素六項檢查，采用免疫組化檢測PGAM1表達水平。分析不同分型前列腺炎患者PGAM1表達差異，并分析PGAM1表達與生精功能指標卵泡刺激素、黃體生成素、T激素水平的關系。

1.3 PGAM1檢測及判定標準：免疫組化PGAM1表達檢測：所有入選睪丸組織標本均經常規脫水、組織包埋、切片等處理后，置于PGAM1抗體(1:200)以室溫孵育2h，再進一步洗片后加入二抗再室溫孵育1h。以DAB顯色5min，然后以蘇木素復染1min，然后中性樹膠封片。免疫組化結果判定[7]：參照美國國立衛生研究院制定的標準，以免疫組化PGAM1檢測陽性強度與陽性細胞百分比兩項評分乘積值來判定，健康人群正常PGAM1表達評分值為7分，低于7分為低表達，高于7分為高表達。①陽性強度評分：按細胞染色強度判定，無色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別計為0分、1分、2分、3分。②陽性細胞百分比評分：百分比≤25%、25%<百分比≤50%、50%<百分比≤75%、百分比>75%分別計為0分、1分、2分、3分。

1.4 統計學方法：采用SPSS20.0進行數據分析。卵泡刺激素、黃體生成素、T激素等計量資料以均數±標準差表示，采用組間t檢驗分析差異。PGAM1表達例數等計數資料采用百分比表示，采用組間χ2檢驗分析差異。若P<0.05，則表示組間比較差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達差異比較：免疫組化檢測結果可知，不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達主要存在于睪丸組織生精小管中(圖1A)，而在睪丸組織間質細胞中無明顯高表達。同時不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達主要存在于生精小管精原細胞(圖1B)，精母細胞(圖1C)和細胞胞質(圖1D)中。Ⅰ型前列腺炎患者睪丸組織標本PGAM1表達與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睪丸組織標本PGAM1表達與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見表1。

表1 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達差異比較n(%)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

圖1 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達的免疫檢測結果(×40)

注：A：前列腺炎患者生精小管中的PGAM1表達的免疫檢測結果；B：前列腺炎患者精原細胞中的PGAM1表達的免疫檢測結果；C：前列腺炎患者精母細胞中的PGAM1表達的免疫檢測結果；D：前列腺炎患者細胞胞質中的PGAM1表達的免疫檢測結果

2.2 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達與卵泡刺激素水平的關系分析：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1高表達者的卵泡刺激素水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)。Ⅰ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1低表達者的卵泡刺激素水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1表達者的卵泡刺激素水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見表2。

表2 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達與卵泡刺激素水平的關系±s)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

表3 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達與黃體生成素水平的關系±s)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

表4 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達與睪酮水平的關系±s)

注：與健康體檢人群比較，*P<0.05

2.3 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達與黃體生成素水平的關系分析：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1高表達者的黃體生成素水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)。Ⅰ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1低表達者的黃體生成素水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1表達者的黃體生成素水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見表3。

2.4 不同分型前列腺炎患者PGAM1表達與睪酮水平的關系分析：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1高表達者的睪酮水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)。Ⅰ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1低表達者的睪酮水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中的睪丸組織標本PGAM1表達者的睪酮與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)，見表4。

3 討 論

在男性不育因素中，生精功能障礙是其中最重要的因素，約占全部男性不育因素的50%左右[8]。而男性生精功能障礙除與生殖器內分泌、生殖器創傷、生殖器發育等因素相關外，亦與前列腺炎對患者睪丸組織生精功能激素分泌相關[9]。國外研究，在Ⅰ型(急性前列腺炎)、Ⅱ型(慢性細菌性前列腺炎)、Ⅲ型(慢性盆腔疼痛性前列腺炎)、Ⅳ型(無癥狀性前列腺炎)前列腺炎患者的多次重復睪丸取精術中，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者的取精成功率明顯低于Ⅰ型前列腺炎患者和健康人群，其原因在于Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎為慢性或無癥狀前列腺炎癥，作用時間較長，從而對患者生精功能相關基因PGAM1表達產生影響[10～12]。

本研究不同分型前列腺炎患者睪丸組織PGAM1表達免疫組化檢測結果表明，Ⅰ型前列腺炎患者睪丸組織標本PGAM1表達與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者睪丸組織標本PGAM1表達與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)。提示，PGAM1異常表達異常與前列腺炎病密切相關。且不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達主要存在于睪丸組織生精小管中，而在睪丸組織間質細胞中無明顯高表達，同時不同分型前列腺炎患者PGAM1高表達主要存在于生精小管精原細胞，精母細胞和細胞胞質中，提示PGAM1高表達與男性睪丸組織生精過程密切相關。上述研究結果證實了學者John.A[13]的研究結果：PGAM1參與男性睪丸組織生精細胞分化、形成過程。Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎導致PGAM1呈異常的低表達，可能與Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎均是慢性或無癥狀前列腺炎癥，作用時間較長，從而對患者生精功能相關基因PGAM1表達產生影響有關，而PGAM1低表達抑制慢性前列腺患者的糖代謝活動，從而對睪丸組織內生精細胞分化、形成過程產生影響[14,15]。

相關研究證實，睪丸組織一些激素水平與睪丸組織的生精功能密切相關，劉柳等[16]研究顯示，生精功能障礙男性的卵泡刺激素和黃體生成素表達水平顯著高于正常健康男性，而睪酮水平則顯著低于正常健康男性。江凡等[17]發現，無精癥生精功能障礙男性的卵泡刺激素和黃體生成素表達水平也高于正常健康男性，同時睪酮水平也顯著低于正常健康男性。同時亦有國外研究發現，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者的卵泡刺激素和黃體生成素表達水平低于正常健康男性，睪酮水平顯著低于正常健康男性[18]。綜合上述學者研究結果，本研究嘗試分析了不同分型前列腺患者PGAM1表達異常與生精功相關激素的相關性。結果證實，Ⅰ型前列腺炎患者中PGAM1低表達者的卵泡刺激素、黃體生成素、T激素水平與健康體檢人群比較無顯著差異性(P>0.05)，但Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者中PGAM1低表達者的卵泡刺激素、黃體生成素、睪酮水平與健康體檢人群比較有顯著差異性(P<0.05)。提示，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者生精功能障礙與患者PGAM1低表達導致卵泡刺激素、黃體生成素、T激素等生精功能激素表達異常密切相關[19,20]。因此，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎PGAM1表達檢測在診斷前列腺炎患者生精功能障礙中有一定的臨床價值。

綜上所述，除Ⅰ型前列腺炎患者外，Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型前列腺炎患者PGAM1呈異常的低表達，而PGAM1呈異常的低表達對患者睪丸組織生精功能產生影響，因此PGAM1檢測在前列腺炎患者病情及生精功能障礙診斷中具有一定的臨床價值。

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The Clinical Significance and Expression of Phosphoglycerate Mutase-1 in the Testis Tissues of Patients with Different Types of Prostatitis

HUANGMinyu,HUANGQun,WUJun,etal

(TheAffiliatedHospitalofYoujiangMedicalCollege,GuangxiZhuangAutonomousRegion,GuangxiBaise533000,China)

Objective:To observe the phosphoglycerate mutase (PGAM1)-1 expression in testicular tissue of patients with different types of prostatitis, to analyze the clinical significance of detecting PGAM1 expression. Methods: Type I,II,III and IV prostatitis patients and healthy population of the testicular tissue specimens were collected. The level of PGAM1 expression was detected by immunohistochemical. The difference of PGAM1 expression in patients with different types of prostatitis was analyzed. The relationship between the expression of PGAM1 and the levels of follicle stimulating hormone, luteinizing hormone and testosterone was analyzed. Results: There was no significant difference in the expression of PGAM1 in the testis tissue of patients with typeⅠ(P>0.05). The expression of PGAM1 in testis tissues of patients with type II, III and IV prostatitis was significantly different from that in healthy people (P<0.05). There was no significant difference in the levels of follicle stimulating hormone, luteinizing hormone (LH) and T hormone (P>0.05) in patients with type Ⅰ prostatitis (PGAM1). However, there were significant differences in the levels of follicle stimulating hormone, luteinizing hormone and testosterone in patients with type PGAM1, type III and type IV prostatitis (P<0.05). Conclusion: In addition to the patients with type Ⅰ prostatitis, the expression of PGAM1 of patients with type II, III and IV prostatitis was lower. The abnormal expression of PGAM1 had an effect on spermatogenesis in patients with testicular tissue. Therefore, the detection of PGAM1 has a certain clinical value in the diagnosis of patients with prostatitis.

Phosphoglyceromutase-1; Prostatitis; Spermatogenic function

1006-6233(2017)05-0719-05

廣西壯族自治區百色市科學研究與技術開發計劃項目，(編號：20160615)；廣西壯族自治區衛生廳重點科研課題，(編號：重2012082)

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.05.005