止痛祛風湯對急性痛風性關節炎大鼠血清IL—6、IL—8的影響

龐學豐++王思超　蒙宇華　李玉玲　劉歡　吳燕紅　黃海燕　馮玉青　唐麗萍　廖鍵僥　舒建龍　劉莎莎　杜永怡　林菊

【摘 要】目的：觀察止痛祛風湯對急性痛風性關節炎大鼠血清白細胞介素（IL）-6、IL-8的影響。方法：將60只健康雄性Wistar大鼠隨機分為空白對照組，模型對照組，秋水仙堿組，止痛祛風湯高、中、低劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M大鼠不限制飲水，自由進食；模型對照組大鼠給予生理鹽水0.135 mg·kg-1進行灌胃；秋水仙堿組大鼠給予秋水仙堿溶液0.135 mg·kg-1進行灌胃；止痛祛風湯高、中、低劑量組大鼠分別給予止痛祛風湯31.25 g·（100 g）-1、15 g·（100 g）-1、7.5 g·（100 g）-1進行灌胃。于第7天給藥后30 min，除空白對照組外，其余各組大鼠采用注射尿酸鈉方式誘導急性痛風性關節炎大鼠模型，分別檢測各組大鼠血清IL-6、IL-8水平的變化情況。結果：止痛祛風湯高、中劑量組以及秋水仙堿組大鼠血清中的IL-6、IL-8含量均明顯降低，3組分別與模型對照組進行比較，差異均有統計學意義（P < 0.05）；止痛祛風湯高、中劑量組與秋水仙堿組比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。結論：止痛祛風湯能通過降低IL-6、IL-8的水平而達到治療痛風性關節炎的作用。

【關鍵詞】 急性痛風性關節炎；止痛祛風湯；IL-6；IL-8；大鼠

Effect of Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風湯）on IL-6 and IL-8 in Serum of Rats with Acute Gouty Arthritis

PANG Xue-feng，WANG Si-chao，MENG Yu-hua，LI Yu-ling，LIU Huan，WU Yan-hong，HUANG Hai-yan，

FENG Yu-qing，TANG Li-ping，LIAO Jian-jiao，SHU Jian-long，LIU Sha-sha，DU Yong-yi，LIN Ju

【ABSTRACT】Objective：To observe the effect of Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風湯）on IL-6 and IL-8 in serum of rats with acute gouty arthritis.Methods：Sixty healthy male Wistar rats were randomly divided into a blank control group，a model control group，a colchicine group，and high moderate and low dose groups of Zhitong Qufeng Tang（H，M and L groups），10 rats in each group.The rats in the blank control group are allowed to drink and eat freely.The rats in the model control group were given 0.135 mg·kg-1 of normal saline by gavage.The rats in the colchicine group were given intragastric administration of 0.135 mg·kg-1 of colchicine solution.The H，M and L groups were respectively given intragastric administration of 31.25 g·（100 g）-1，15 g·（100 g）-1 and

7.5 g·（100 g）-1 of Zhitong Qufeng Tang.Thirty minutes after administration in the third day，rats in all the groups but the blank control group were induced by injecting sodium urate to establish modes with acute gouty arthritis.The changes of IL-6 and IL-8 levels in rats serum were detected respectively.Results：The levels of IL-6 and IL-8 in rats of the colchicine group and the H and M groups were significantly decreased.The differences between the H，M groups and the model control group were statistically significant（P < 0.05）.The differences between the H，M groups and the colchicine group were not statistically significant（P > 0.05）.Conclusion：Zhitong Qufeng Tang can treat gouty arthritis by reducing the levels of IL-6 and IL-8.

【Keywords】 acute gouty arthritis；

Zhitong Qufeng Tang（止痛祛風湯）；IL-6；

IL-8；rats

痛風是遺傳性和（或）獲得性引起的嘌呤代謝障礙和（或）尿酸排泄減少所導致的一組疾病，是臨床常見疾病之一，目前發病日益增多，本病最常見的表現形式為痛風性關節炎急性發作。研究資料表明，白細胞介素（IL）-6、IL-8在痛風性關節炎的發病中起到了重要的作用。本研究擬通過動物實驗，研究探討止痛祛風湯對大鼠血清IL-6、IL-8水平的影響。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠60只，體質量（200±20）g，購于廣西中醫藥大學實驗動物中心，動物合格證號：桂醫動字第11005號。

1.2 實驗試劑 IL-6、IL-8檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）；實驗用尿酸鈉晶體（北京化學試劑公司）。

1.3 實驗藥物 本實驗選擇秋水仙堿片（云南昊邦制藥有限公司，國藥準字H53021798）作為對照藥物；止痛祛風湯則由本院新藥研發中心按藥物劑量和比例進行制備提供；實驗時將2500 mg尿酸鈉晶體加入到100 mL生理鹽水中，不斷進行加溫攪拌，最后制成質量分數為25 mg·mL-1的尿酸鈉溶液，供實驗中造模時使用。

2 方 法

2.1 動物造模及分組給藥 60只大鼠均進行適應性飼養1周（置入鼠籠中），觀察大鼠無異常后，再隨機分為空白對照組，模型對照組，秋水仙堿組，止痛祛風湯高、中、低劑量組，每組10只?？瞻讓φ战M大鼠不限制飲水，自由進食；模型對照組大鼠給予生理鹽水0.135 mg·kg-1進行灌胃；秋水仙堿組大鼠給予秋水仙堿溶液0.135 mg·kg-1進行灌胃；止痛祛風湯高、中、低劑量組大鼠分別給予止痛祛風湯31.25 g·（100 g）-1、15 g·（100 g）-1、7.5 g·（100 g）-1進行灌胃。每日1次，連續7 d。于第7天給藥后30 min，將空白對照組之外的其余各組大鼠按照國外Coderre方法[1]進行造模：在大鼠右后足踝關節背側，采用6號注射針頭向右踝關節腔內注入0.2 mL的尿酸鈉溶液，制備急性痛風性關節炎的大鼠模型（實驗過程中所有大鼠造模均成功，無大鼠死亡）。

2.2 IL-6、IL-8的檢測 除空白對照組外，其余各組大鼠繼續給藥，3 d后采用腹腔注射水合氯醛對全部大鼠進行麻醉，然后用5 mL注射器從腹主動脈處取血，采用EDTA抗凝，置于4 ℃ 2000 r·min-1

離心機離心10 min，取上清液置于-20 ℃冰箱保存待測。最后采用雙抗體夾心ABC-ELISA法對各組大鼠血清IL-6、IL-8的含量進行檢測，具體步驟和方法則按照檢測試劑盒說明書進行。

2.3 統計學方法 采用SPSS 18.0軟件進行統計分析。計量資料以表示，采用方差分析及t檢驗。以P < 0.05為差異有統計學意義。

3 結 果

模型對照組大鼠血清IL-6、IL-8含量均顯著高于空白對照組，差異有統計學意義（P < 0.05）。止痛祛風湯高、中劑量組以及秋水仙堿組大鼠血清IL-6、IL-8含量均明顯降低，3組分別與模型對照組進行比較，差異均有統計學意義（P < 0.05）；止痛祛風湯高、中劑量組與秋水仙堿組比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。見表1。

4 討 論

痛風性關節炎的急性發作主要是由于體內的尿酸鹽沉積于關節部位而引起，常常突然發作。研究發現，由于關節局部溫度突然降低、血尿酸水平突然升高以及原有的尿酸結晶脫落等原因，導致大量尿酸鹽結晶進入關節腔，被白細胞吞噬后，促使趨化因子、激肽等很多物質不斷被釋放出來，進而引起局部的各種炎癥反應，釋放出多種不同的細胞因子，如白細胞介素（IL-1、IL-6、IL-8）和腫瘤壞死因子（TNF）等，促使炎癥范圍不斷擴大，溶解并侵蝕其組織，從而出現紅腫熱痛等典型的臨床癥狀[2]。

既往研究發現，在痛風性關節炎中，由于尿酸鈉晶體刺激產生大量的炎性細胞浸潤，導致關節出現明顯紅腫、劇烈疼痛以及功能障礙[3]。同時研究還發現，痛風的病理過程中存在趨化因子IL-8和其他單核因子及淋巴因子不同程度的參與[3-4]。Liu等[5]研究亦表明，采用尿酸鹽晶體注射誘導小鼠痛風模型后，發現分離于新鮮血的單核細胞在尿酸鹽晶體的刺激下，IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β等炎性細胞因子的分泌均有明顯增加。這些研究結果均提示IL-6和IL-8在痛風性關節炎的發病中起到了非常重要的促進作用。

目前，痛風性關節炎急性期主要使用抗炎鎮痛類藥物進行止痛對癥治療，以及運用藥物抑制尿酸生成或促進尿酸排泄；但長期服用此類藥物可產生肝腎系統以及胃腸道損害，患者難以堅持服用，至今尚無特效的根治藥物。中醫學將痛風性關節炎歸屬于“痹病”“歷節風”等范疇，認為是因飲食失調，恣食膏粱厚膩，釀生濕熱，痹阻于關節肌肉導致，因此清熱利濕止痛是急性期的首選療法。目前國內對中藥治療本病的研究不少，也取得了一定的效果，但對痛風性關節炎中IL-6、IL-8影響的研究報道尚不多。王曉璐等[6]研究發現，五藤痛風飲能明顯下調大鼠痛風性關節炎模型關節液中IL-8、TNF-α的水平而起到抗炎作用，是其治療痛風性關節炎的作用機制之一。謝人明等[7]研究發現，強筋健骨膠囊治療痛風性關節炎急性發作期的機制是通過顯著降低血清中IL-6、TNF-α、IL-1β及基質金屬蛋白酶-3的水平而實現的。

止痛祛風湯是課題負責人多年研究痛風性關節炎診治而總結出的有效方藥，由白虎加桂枝湯合芍藥甘草湯化裁而成，具有祛風除濕、清熱通絡止痛之功效。白虎加桂枝湯最早見于《金匱要略》，此方具有清熱通絡、調和營衛的作用，是療效確切的治療痹病的經典方；而芍藥甘草湯則具有緩急止痛的作用?，F代藥理研究發現，止痛祛風湯中的白芍具有抗炎、鎮痛、解痙、解熱作用，并且與桂枝配伍具有協同作用；忍冬藤、葛根、萆薢可以降低血脂；桂枝具有解熱、鎮痛的功效；甘草具有抗炎、鎮痛等作用；山慈菇則因含有秋水仙堿等成分而發揮止痛、降血尿酸作用[8]。臨床研究發現，止痛祛風湯能較快緩解患者的關節腫脹、疼痛等臨床癥狀，較好降低患者的血尿酸、C-反應蛋白水平，表明其具有消腫止痛好、副作用小等優點[9]。筆者前期已經完成的動物實驗結果表明，其能明顯抑制急性痛風性關節炎大鼠踝關節腫脹度，能顯著降低血清中TNF-α、IL-1β水平[10]。

本研究結果提示，止痛祛風湯治療痛風性關節炎是通過降低急性痛風性關節炎大鼠血清中IL-6、IL-8水平實現的。

5 參考文獻

[1] CoderreTJ，Wall PD.Ankle joint urate arthritis（AJUA）in rat：an alternative animal model of arthritis to that produced by Freund's adjuvant[J].Pain，1987，28（3）：379-393.

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[3] Pascual E，Pedraz T.Gout[J].Curr Opin Rheumatol，2004，16（3）：282-286.

[4] Weinberger A，Pinkhas J.A hypothesis on the possible role of interferon in the initiation of acute gouty arthritis attack[J].Med Hypotheses，1980，6（8）：781-784.

[5] Liu R，O'Connell M，Johnson K，et al.Extracellular signal-regulated kinase 1/extracellular signal-regulated kinase 2 mitogen-activated protein kinase signaling andactivation of activator protein 1 and nuclear factor κB transcription factors play central roles in interleukin-8 expression stimulated by monosodium urate monohydrate and calcium pyrophosphate crystals in monocytic cells[J].Arthritis Rheum，2000，43（5）：1145-1155.

[6] 王曉璐，徐靜，李慧，等.五藤痛風飲對大鼠急性痛風性關節炎模型的IL-8、TNF-α的影響[J].中國現代藥物應用，2013，7（13）：6-7.

[7] 謝人明，范引科，張紅，等.強筋健骨膠囊對急性痛風模型炎癥因子的影響[J].西北藥學雜志，2013，28（2）：165-167.

[8] 雷載權，張廷模.中華臨床中藥學[M].北京：人民衛生出版社，1998：490.

[9] 龐學豐.自擬止痛祛風湯治療痛風性關節炎療效觀察[J].廣西中醫藥，2006，29（6）：7-8.

[10] 龐學豐，唐麗萍，馮玉青，等.止痛祛風湯對大鼠急性痛風性關節炎影響的實驗研究[J].風濕病與關節炎，2012，1（3）：50-52.

收稿日期：2016-12-22；修回日期：2017-02-23