肝細胞癌CD15s和PTEN的表達及其意義

李永慶，王志湖，尚培中，裴樹俊，趙一潔，李慶春，馬躍燕，谷化平

(1.中國人民解放軍第251醫院普通外科，河北 張家口 075000； 2.河北省涿鹿縣人民醫院外科，河北 涿鹿075600;3.河北北方學院圖書館，河北 張家口 075000)

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肝細胞癌CD15s和PTEN的表達及其意義

李永慶1，王志湖2，尚培中1，裴樹俊1，趙一潔3，李慶春1，馬躍燕1，谷化平1

(1.中國人民解放軍第251醫院普通外科，河北 張家口 075000； 2.河北省涿鹿縣人民醫院外科，河北 涿鹿075600;3.河北北方學院圖書館，河北 張家口 075000)

目的 探討肝細胞癌CD15s和PTEN的表達及其意義。方法 應用免疫組化染色EliVisionTM plus兩步法檢測140例肝細胞癌組織中CD15s和PTEN的表達，分析其與肝細胞癌轉移率、分化程度及患者5年生存率的關系。結果 CD15s和PTEN在肝細胞癌中陽性表達率分別為39.3%和33.6%。PTEN陽性表達的肝細胞癌轉移率低(P<0.05)，分化程度及患者5年生存率高(P<0.05)；CD15s陽性表達的肝細胞癌轉移率高(P<0.05)，分化程度及患者5年生存率低(P<0.05)。CD15s的表達與PTEN的表達呈負相關(r=-0.41)。結論 CD15s和PTEN的表達與肝細胞癌分化程度、浸潤轉移和患者生存期密切相關，聯合檢測CD15s和PTEN的表達可作為評估肝細胞癌預后的參考指標。

肝細胞性肝癌；CD15s；PTEN；腫瘤轉移

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)發病隱匿，惡性度高，侵襲力強，細胞與細胞或細胞與基質之間黏附特性的異常在浸潤和轉移過程中發揮了重要作用[1-2]。我們采用免疫組化染色EliVisionTMplus兩步法檢測140例HCC組織中CD15s(sialyl Lewis X，唾液酸化Lewis X)和PTEN(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten，張力蛋白同源基因蛋白)的表達，探討其表達與HCC浸潤、轉移和患者預后的關系及其之間相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2000-11—2011-02月于中國人民解放軍第251醫院手術切除的原發性HCC標本140例，所有患者術前均未接受過放療、化療、免疫或生物治療；按照Edmondson分級標準Ⅰ～Ⅱ級為高分化癌56例，Ⅲ～Ⅳ級為低分化癌84例；伴有淋巴結、肝內、肝外轉移者63例，無轉移者77例。其中男90例，女50例；年齡27～73歲，平均(48.6±8.8)歲；肉眼形態：巨塊型63例，結節型54例，彌漫型23例；腫瘤≤5 cm 48例，>5cm 92例。140例HCC患者中隨訪滿5年者84例，其中死亡62例，存活22例。選取距癌灶2 cm的癌旁肝組織30例和尸檢正常肝組織10例作為對照。研究方案通過醫院倫理委員會批準，所有患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 免疫組化染色方法

鼠抗CD15s單克隆抗體和兔抗PTEN多克隆抗體、EliVision試劑盒和二氨基聯苯胺顯色劑購自福州邁新生物技術開發有限公司。

標本行常規HE染色，取相鄰切片行免疫組化染色，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，常規制備4 μm厚連續切片，65 ℃烘烤備用。采用EliVisionTMplus兩步法，主要操作步驟：①石蠟切片脫蠟至水，微波5檔(輸出功率90 W，下同)，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗1 min×3；②微波-枸櫞酸鈉緩沖液(0.01 mol·L-1,pH=6.0)修復抗原，微波3檔(輸出功率150 W)2 min，微波5檔5 min×2，自然冷卻至近室溫時自來水沖洗，PBS沖洗1 min×3；③微波5檔，甲醇-雙氧水中封閉內源性過氧化物酶2 min，PBS沖洗1 min×3；④加一抗，4 ℃冰箱過夜，從冰箱取出后，微波5檔5 min，PBS沖洗2 min×3；⑤加聚合物增強劑，室溫下孵育20 min，PBS洗2 min×3；⑥加生物素化鼠抗人IgG(1∶300)，37 ℃、30 min，微波5檔5 min，PBS沖洗2 min×3；⑦3,3′-二氨基聯苯胺(diaminobenzidine,DAB-H2O2)顯色10 min，自來水終止顯色；⑧蘇木素復染0.5～1.0 min；⑨常規酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

福州邁新生物技術開發有限公司提供的已知CD15s和PTEN陽性染色切片為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替一抗為陰性對照。

1.3 判定標準

由2位有經驗的病理醫師在光學顯微鏡下進行雙盲觀察。陽性顆粒呈棕黃色或棕褐色，按染色深淺強度評分：無染色0分，棕黃色1分，棕褐色2分。按染色癌細胞所占比例評分：≤30% 1分，31%～70% 2分，≥71% 3分。每例按2項評分之和定性：0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+)，4～6分為強陽性(++)。弱陽性和強陽性均計為陽性。

1.4 統計學方法

應用SPSS 17.0統計軟件處理數據，計數資料行χ2檢驗，檢驗水準α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HCC組織、癌旁肝組織和正常肝組織中CD15s和PTEN的表達

HCC組織中CD15s和PTEN陽性染色主要見于細胞質，陽性率分別為39.3%(55/140)和33.6%(47/140)；30例癌旁肝組織中CD15s弱陽性表達3例(陽性率10%)，PTEN均呈不同程度的陽性表達(陽性率100%)；10例正常肝組織中CD15s均陰性(陽性率0%)，PTEN均呈不同程度的陽性表達(陽性率100%)。HCC中CD15s陽性率顯著高于癌旁肝組織和正常肝組織(χ2=9.427，χ2=6.203，P<0.05)，HCC中PTEN陽性率顯著低于癌旁肝組織和正常肝組織(χ2=43.998，χ2=17.481，P<0.05)。

2.2 HCC臨床病理特征與CD15s和PTEN表達的關系

不同性別、年齡、腫瘤肉眼形態及大小間CD15s和PTEN的表達差異無統計學意義(P>0.05)，不同分化程度及有無轉移之間的表達差異有統計學意義(表1)。

2.3 HCC預后與CD15s和PTEN表達的關系

隨訪滿5年患者中，CD15s陽性者死亡率高，生存率低；PTEN陽性者死亡率低，生存率高(表1)。

表1 HCC臨床病理特征與CD15s和PTEN表達的關系(n)

注：與高分化組比較*P<0.05；與無轉移組比較△P<0.05；與生存組比較#P<0.05。

2.4 CD15s和PTEN表達的關系

CD15s陽性表達的55例中，PTEN陽性表達4例(7.3%)；CD15s陰性表達的85例中，PTEN陽性表達43例(50.6%)。CD15s與PTEN表達呈負相關(P<0.05，r=-0.41)。

3 討 論

惡性腫瘤發生發展的各個時期至少有兩種或兩種以上功能不同、異常激活的基因發揮不同作用，協同促進細胞癌變。局部浸潤和遠處轉移是影響HCC患者生存的重要因素，與多種基因及其蛋白產物的表達異常相關。近年發現不少與HCC發生發展、浸潤轉移相關的腫瘤標志物，如甲胎蛋白(AFP)等，其應用價值在臨床診療中不斷獲得肯定。

CD15s屬于Lewis血型決定簇Ⅱ型抗原，是一種含有四糖碳水化合物的糖蛋白，其合成由巖藻糖轉移酶介導，通過調節性T細胞等參與機體免疫反應[3]，Lewis血型決定簇抗原與配體分子選擇素(selectin)與白細胞透出血管和腫瘤細胞轉移時逸出血管密切相關。研究表明，CD15s與選擇素結合，通過Lewis-selectin轉移途徑，參與介導癌細胞與血管內皮細胞的黏附作用，是癌細胞浸潤及轉移過程中的重要途徑之一[4-5]。CD15s在良、惡性肝細胞中的表達分布存在明顯差異，在HCC組織中，CD15s高表達者具有較高轉移潛能[6]。肝內衛星灶、門靜脈癌栓及肝外轉移的患者CD15s陽性表達率較高，CD15s與選擇素同時陽性者，常首先發生肝內復發轉移[7-8]。

PTEN是一種抑癌基因蛋白，與細胞骨架蛋白和張力蛋白高度同源，具有多種重要功能，可通過三磷酸磷脂酰肌醇途徑、蛋白激酶途徑、黏著斑激酶途徑3種方式參與細胞的信號傳導，是細胞生長主要調控通路的關鍵因素之一，影響細胞分化、骨架重組及遷移能力[9]。PTEN的突變和失活存在于多種腫瘤中，在癌細胞中的功能缺失可促進腫瘤發展，其多態性與HCC易感性有關[10-11]。有研究表明PTEN可能在HCC發生發展過程中調控hTERT的活化，其陽性表達率隨HCC組織分化降低及侵襲力增強而明顯下降，提示PTEN突變或雜合性缺失可能與癌組織浸潤和癌細胞轉移密切相關[12-13]。

本研究表明，HCC組織中CD15s陽性表達率顯著高于癌旁肝組織和正常肝組織，PTEN陽性表達率顯著低于癌旁肝組織和正常肝組織，CD15s和PTEN的表達與HCC分化程度、浸潤轉移及患者生存期密切相關；HCC組織中兩者表達呈顯著負相關，提示在HCC惡性發展過程中可能具有協同調節作用。聯合檢測CD15s和PTEN有助于了解其臨床病理進程，提高對其生物學特性，尤其是浸潤能力和轉移潛能的判斷水平。深入研究其在HCC中的作用機制，對評估患者預后、探索靶向治療新途徑具有一定指導意義[14-15]。

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[責任編輯：李薊龍 英文編輯：劉彥哲]

Expression and Significance of CD15s and PTEN in Hepatocellular Carcinoma

LI Yong-qing1,WANG Zhi-hu2,SHANG Pei-zhong1,PEI Shu-jun1, ZHAO Yi-jie3,LI Qing-chun1,MA Yue-yan1,GU Hua-ping1

(1.Department of General Surgery,251st Hospital of PLA,Zhangjiakou,Hebei 075000,China; 2.Department of Surgery,People's Hospital of Zhuolu County,Zhuolu,Hebei 075400,China; 3.Library of Hebei North University,Zhangjiakou,Hebei 075000,China)

Objective To investigate the expression and significance of CD15s and PTEN in hepatocellular carcinoma(HCC).Methods EliVisionTMplus two-step immunohistochemical method was used to detect the expression of CD15s and PTEN in 140 cases of HCC.The relationship between the expression and hepatocell metastatic rate,differentiation degree and 5-year survival rate was analyzed.These expressions were analyzed in combination with the follow-up information.Results Positive expression rates of CD15s and PTEN in HCC were 39.3% and 33.6%,respectively.HCC with positive expression of CD15s had a higher metastatic rate(P<0.05)and a lower 5-year survival rate(P<0.05)；HCC with positive PTEN expression had a lower metastatic rate(P<0.05)and a higher 5-year survival rate(P<0.05).The expression of CD15s was negatively correlated with PTEN expression in HCC(r=-0.41).Conclusion These results showed that the expression of CD15s and PTEN were closely correlated with differentiation degree,invasion metastasis and patient survival peried in HCC.Expression of CD15s and PTEN may be clinically used as indicators for assessing HCC prognosis.

hepatocellular carcinoma;CD15s;PTEN;neoplasm metastasis

李永慶(1963-)，男，內蒙古錫林浩特人，副主任醫師，研究方向：普通外科。

尚培中(1964-)，男，河南商丘人，醫學碩士，主任醫師，研究方向：普通外科。

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2017.08.002

來稿日期：2017-06-26