銀丹心腦通軟膠囊定量質量控制提升研究△

宋軍妹，惠權斌，呂文英，成龍

(1.陜西寶雞市人民醫院，陜西 寶雞 721000；2.北京市東城區朝陽門社區衛生服務中心，北京 100061；3.中國醫學科學院 藥用植物研究所，北京 100093)

·中藥工業·

銀丹心腦通軟膠囊定量質量控制提升研究△

宋軍妹1，惠權斌1，呂文英2，成龍3*

(1.陜西寶雞市人民醫院，陜西 寶雞 721000；2.北京市東城區朝陽門社區衛生服務中心，北京 100061；3.中國醫學科學院 藥用植物研究所，北京 100093)

目的探索中藥復方多指標成分質控方法，以銀丹心腦通軟膠囊為研究對象，進行中藥質量標準提升研究。方法采用HPLC、UPLC-PDA方法，多波長檢測，同時完成了多指標成分的定量測定。結果該方法簡單、快捷靈敏，可作為銀丹心腦通軟膠囊質量控制方法。結論HPLC多波長同時測定中藥復方多指標成分具有可行性和應用價值。

中藥質量評價；銀丹心腦通軟膠囊；高效液相色譜；質量標準

藥品的質量控制是一個綜合體系，但其模式不外乎感官評價、生物評價和化學評價。對于目前我國中藥的質量控制而言，主流還是化學評價和感官評價，生物評價近年來得到了業界的高度重視。中藥復方有效成分和指標成分的含量測定是中藥復方質量控制和評價的有效手段之一，其有助于提高質量評價的科學性和合理性。銀丹心腦通軟膠囊是治療冠心病心絞痛、高脂血癥和動脈粥樣硬化、中風后遺癥等心腦血管疾病的中藥大品種，具有一定臨床治療價值和優勢[1-4]。探索與其功能、主治直接相關的有效成分化學質量控制和生物活性評價對于有效地進行全過程質量控制系統，提升質量標準，確保臨床療效的一致性十分重要，并且需求迫切。銀丹心腦通軟膠囊指紋圖譜研究表明，蘆丁、野黃芩苷和丹酚酸B含量較高[5-6]，蘆丁主要來源于銀杏葉，野黃芩苷和丹酚酸B分別來源于燈盞細辛和丹參，因此本實驗采用UPLC-PDA對多批銀丹心腦通軟膠囊中蘆丁、野黃芩苷和丹酚酸B進行測定，以此作為銀丹心腦通軟膠囊質量控制的企業內控標準。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

ACQUITY UPLC(美國Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower2色譜工作站)；Millipore超濾儀；TU-1901紫外分光光度計(北京普析通用儀器公司，UV Win5工作站)；METTLER TOLEVO十萬分之一電子天秤；HT-300型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TGL-16G高速離心機(湖南恒諾儀器有限公司)。

1.2 試劑

蘆丁(成都克洛瑪生物科技有限公司，批號：130915)；丹酚酸B(成都克洛瑪生物科技有限公司，批號：131112)；野黃芩苷(上海源葉生物科技有限公司，批號：YY20110513)；甲酸為分析級；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水；其余試劑為分析純。

銀丹心腦通軟膠囊貴州百靈企業集團制藥股份有限公司生產，樣品批次見表1。

表1 銀丹心腦通軟膠囊樣品批次

2 方法

2.1 供試品溶液制備

銀丹心腦通軟膠囊分別去外殼，稱取內囊物0.2 g，置于50 mL具塞錐形瓶，加75%甲醇25 mL，超聲提取(90 W，40 KHz，30 ℃)30 min，8000 r·min-1離心10 min，取上清液，定容至25 mL容量瓶中，過0.22 μm尼龍濾膜(津騰)即為供試品溶液。

2.2 對照品溶液制備

分別精密稱取蘆丁、野黃芩苷2.0、5.0 mg置于10 mL容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解后用甲醇定容至刻度；精密稱取丹酚酸B 2.0 mg置于10 mL容量瓶中，加少量75%甲醇超聲溶解后用75%甲醇定容。

2.3 色譜方法

ACQUITY BEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；流動相0.5%甲酸水(A)-0.5%甲酸乙腈(B)，梯度洗脫，見表2。流速：0.49 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測波長：255 nm、333 nm、286 nm，色譜圖見圖1。

表2 梯度洗脫表

注：1.蘆??；2.野黃芩苷；3.丹酚酸B；A.蘆丁對照品(255 nm)；B.野黃芩苷對照品(333 nm)；C.丹酚酸B對照品(286 nm)；D.供試品。圖1 超高液相色譜圖

3 結果與討論

3.1 線性關系考察

取蘆丁、野黃芩苷對照品溶液，分別稀釋6、8、10、15、20倍；取丹酚酸B對照品溶液稀釋4、6、8、10、20倍。按照上述色譜條件進樣，進樣5 μL。以峰面積積分(Y)對濃度(X)進行線性回歸，得到3種化合物的回歸方程、相關系數見表3。

表3 蘆丁、野黃芩苷、丹酚酸B三種成分的線性回歸方程

3.2 精密度試驗

精密稱取供試品S1 0.2 g，制備供試品溶液，連續進樣6次，每次進樣體積為5 μL，計算峰面積的相對標準偏差。結果顯示，供試品溶液各指標成分的RSD分別為2.61%、3.11%、4.98%，均小于5%，表明精密度良好。

3.3 穩定性試驗

精密稱取供試品S1 0.2 g，制備供試品溶液，按照上述條件，分別在0、2、4、8、12、24 h時進樣5 μL，計算峰面積的相對標準偏差。結果顯示，供試品溶液各指標成分的RSD分別為2.88%、3.46%、3.31%，均小于5%，表明供試品在24 h內各成分均穩定。

3.4 重復性試驗

分別精密稱取6份供試品S1，每份0.2 g，制備6份供試品溶液，按照上述條件進樣，每次進樣體積為5 μL，計算峰面積的相對標準偏差。結果顯示，供試品溶液各指標成分的RSD分別為3.78%、4.66%、1.97%，表明重復性良好。

3.5 加樣回收率試驗

稱取已知含量的同一批次樣品S1 6份，每份0.1 g，精密稱定，每份樣品加入蘆丁、野黃芩苷和丹酚酸B對照品溶液，加入與待測樣品中三種成分量比為1∶1。然后按照供試品制備方法制備供試品溶液，按照色譜方法進樣，進樣量為5 μL，計算加樣回收率，結果見表4。

表4 不同化合物的回收率試驗(n=6)

3.6 樣品測定結果

分別精密稱取不同批次的銀丹心腦通軟膠囊內囊液0.2 g，制備待測樣品，測定待測樣品中各成分的含量，結果見表5。

表5 銀丹心腦通軟膠囊多成分含量測定結果 mg·g-1

3.7 結論與討論

十二五以來，我國力推的國家藥品標準提高行動計劃，旨在加強中藥標準化建設，完善技術標準體系，努力將我國中醫藥優勢技術提升為國際標準。銀丹心腦通軟膠囊源于苗族治療心腦血管病的經驗方，由銀杏葉、丹參、燈盞細辛、絞股藍、山楂、大蒜、三七、艾片等藥物組成。因其最早是地方藥品標準上升為國家藥品標準的，標準編號為國家藥品標準(試行)[WS-11332(ZD-1332)-2002]，研究基礎較為薄弱，含量測定項下僅有丹參水溶性成分丹參素的定量質控[7]。在2011年標準轉正研究過程中，參照銀杏葉的定量質控經驗和標準，國家藥品標準[WS-11332(ZD-1332)-2002-2011Z]中增加了對銀杏葉總黃酮醇苷的定量測定[8-9]，目前銀丹心腦通軟膠囊質量標準已被《中華人民共和國藥典》2015版一部收載。

在完成銀丹心腦通軟膠囊主要活性組分的體內過程研究后，針對含量較高的主要心血管活性成分進行了定量質控研究。本研究采用UPLC建立了銀丹心腦通軟膠囊中蘆丁、野黃芩苷、丹酚酸B三種成分的含量測定方法，該種方法準確、快速、靈敏，對10批不同生產日期的樣品進行了測定，結果穩定可靠。本方法既提供了一種快速、準確、重復性好、分離度高的方法，又可為全面控制銀丹心腦通軟膠囊質量提供參考，確保其臨床療效的可靠性與一致性。該質控方法納入企業內控質量體系，確保產品安全、有效和質量可控，對促進大中藥產業的良性互動式發展具有積極的示范意義。

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StudyonMultipleActiveIngredientsQuantitativeControlofYindanxinaotongCapsule

SONG Junmei1，HUI Quanbin1，LYU Wenying2，CHENG Long*

(1.TheHospitalofBaojipeople，BaojiShanxi721000，China；2.CommunityhealthcentralofChaoyanmen，Beijing100061，China；3.TheInstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege，Beijing100093，China)

Objective：To explore the quality control method of multi-index active ingredients of traditional Chinese medicine compound，and improve quality control standard of Yindanxinnaotong capsule.MethodsUPLC、UPLC-PDA with multi-wavelength detection method was used to analyze the multi-compounds.Rutin，scutellarin and phenolic acid B was determined simultaneously.ResultsThe method was simple and rapid，and it could be used as one of the methods for quality control of Yindanxinnaotong capsule.ConclusionThe method is simple，accurate and reliable and not only enables the simultaneous determination of the content of the rutin，scutellarin and phenolic acid B in Yindanxinnaotong capsule，but also provides a simple and feasible quality evaluation method for traditional Chinese medicine compound.

Quality evaluation of the traditional Chinese medicine compound；Yindanxinnaotong capsule；HPLC；quality standard

重大新藥創制子課題(2012ZX09201201-003)

*

成龍，高級工程師，研究方向：中藥藥代動力學及新藥開發；E-mail：13581972102@139.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.10.023

2017-05-09)