北美冬青“奧斯特”的組織培養和快速繁殖研究

王 濤

（新疆林科院園林綠化研究所，新疆 烏魯木齊 830063）

1 北美冬青‘奧斯特’的組織培養

植物組織培養又叫離體培養，是利用從植物體分離出符合需要的組織、器官或細胞，原生質體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進行培養以獲得再生的完整植株或生產具有經濟價值的其他產品的技術，也指在培養過程中從各器官上產生愈傷組織的培養，愈傷組織再經過再分化形成再生植物的技術。利用組織培養進行冬青植物的離體培養和快繁已有一定成效。

1.1 選擇合適的外植體

選擇本研究所自行種植的地栽苗優質雌株，并選擇當年生的、健壯的、沒有病蟲害的枝條，去掉葉片，保留2cm左右的葉柄，利用濕潤的報紙包裹保濕，保存在4℃的冰箱中。

1.2 外植體的處理和誘芽培養

將保存的枝條截開成莖段，保證每個莖段帶有芽節，使用飽和的洗衣粉溶液浸泡90min，并置于攪拌器上旋轉30min，用流水沖洗20min，使用75%的酒精溶液浸泡1min，并用汞溶液消毒，使用無菌水清洗5次，然后放在接種盤中風干，之后將每個莖段兩端各自切去0.5cm，形成1.0～1.5cm長的帶有0.5～1.0cm葉柄的莖段，接種到誘芽培養基上。

1.3 增殖培養

將誘芽培養基上生長出的無菌苗切割成0.5～1.0cm的單芽或頂芽，然后接種到不同生長物質配比的增值培養基中，每次培養10瓶，每瓶接種5個莖段或頂芽，重復進行3次，培養25d后，觀察試管苗的生長狀況，選出最適合的生長物質配比。

1.4 生根培養

將增殖培養基中收獲的生長狀況最好的芽苗移植到生根培養基中，選擇標準是生長健壯、長勢一致、長度在1.5～2.0cm的組培苗嫩莖，接種到不同生長物質配比的生根培養基中，每個處理10瓶，每瓶接種10個嫩莖，重復培養3次。培養結果判定培養30d后觀察生根數，出現2條以上視為有效根，計算生根率。

所有外植體誘芽培養、繼代增殖培養和生根培養均設置不加生長物質的對照試驗，并在25℃左右，光照強度40μmol·m-2·s-1的條件下培養，并每天保證12h的光照。

2 無菌快繁體系的建立

沒有被污染且成功成活的外植株，接種1周后也并逐漸出現松動，最終脫落，腋芽出現膨脹，10d后可看到冒出的嫩芽，25d后腋芽伸長并且長出葉片，并以單芽生長為主，培養40d后嫩莖逐漸生長到3～4cm。將長成的嫩莖切割成小部分，接種在同樣的誘芽培養基上，經過連續2～3次的繼代培養，腋芽逐漸分化出叢生芽，叢生芽的繁殖能力很強，因此，無菌無性體系群體會逐漸擴大，形成無菌快繁體系。

另外，在培養外植體時，誘芽培養基上除了嫩莖之外，還形成了愈傷組織，在切割嫩莖進行繼代培養時，將這些愈傷組織切除干凈，轉入到芽誘導培養基中繼續培養，30d后會同樣收獲3～4cm高度的嫩莖，嫩莖部依然會出現致密的愈傷組織，再次重復上述操作，也會有同樣收獲。反復培養6次后，統共收獲嫩莖7次，時間持續多半年。而在第4次收獲后，嫩莖顏色逐漸變黃，而且愈傷組織也逐漸變小，最后一次收獲后，嫩莖細小，葉片泛黃，愈傷組織呈黃褐色，再次轉接培養不再生長嫩莖，而是死亡。

3 不同植物生長物質配比對北美冬青繼代增殖的影響

繼代增殖選擇的是莖段切割的方式，選擇經過2～3次芽誘導培養基培養的擴大群體中長勢較好的莖段進行接種。根據觀察不同生長物質配比條件下莖段的生長形勢，發現接種在WPM+6-BA1.50mg/L+0.10NAA mg/L+蔗糖20g/L的培養基上的增值系數最大，即培養后獲得的芽數與接種時的芽數的比值最大，長勢最好。但是此配比條件下，繼代培養的組培苗有玻璃化現象出現。此時如果將6-BA的濃度降低到1.000mg/L時，莖段的增值系數不變，但玻璃化現象消失。所以，最適合的增值培養基的生長物質配比為WPM+6-BA1.00mg/L+0.10NAA mg/L+蔗糖20g/L，此時增值系數最大，且芽苗健壯，顏色濃綠，生機勃勃。

4 結語

‘奧斯特’是北美冬青適合在我國地理環境條件下生長的優勢品種，有較高的經濟價值和觀賞價值，因此，研究其組織培養技術，和無菌快繁體系的建立，并尋找最適合繼代增值培養的生長物質配比條件，從而為‘奧斯特’的大量繁殖創造條件。