文冠果組培快繁體系的建立

盧影影+金華+郭建磊+白鑫磊

摘 要：為了建立高效穩定的文冠果無性快繁體系，以4周苗齡的文冠果實生苗嫩莖為外植體分別進行了外植體的消毒、不定芽誘導和生根誘導試驗。結果表明：70%酒精振蕩消毒30 s后用0.1%HgCl2振蕩消毒7 min時，消毒效果最佳，莖段染菌率為6.67%，而且莖段無死亡；WPM+6-BA1.0 mg·L-1+IBA1.0 mg·L-1+IAA2.0 mg·L-1最適于芽的誘導，出芽率為94.44%，經生根誘導可產生健壯的根系。本研究對文冠果的規?；焖俜敝秤兄匾膮⒖家饬x。

關鍵詞：文冠果；嫩莖；快繁；不定芽

中圖分類號： S565.9 文獻標識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2018.01.001

Abstract：To establish a stable and efficient rapid propagation system of the Xanthoceras sorbifolia， 4 weeks seedling tender stem of Xanthoceras sorbifolia were used as explants， the experiment of explants disinfection， adventitious bud induction， and rooting induction were conducted. The results showed that： reelingly disinfect 30 s with 70% alcohol， and then reelingly disinfect 7 min with 0.1% HgCl2 had the best disinfection effect， the contamination rate was 6.67%， and there was no stem death； WPM+6-BA1.0 mg·L-1+IBA1.0 mg·L-1+IAA2.0 mg·L-1 medium was the most suitable for adventitious bud induction， the induction rate was 94.44%. The root induction could produce strong root system. The study had important referenced values for mass rapid reproduction of the Xanthoceras sorbifolia.

key words：Xanthoceras sorbifolia Bunge； tender stem； rapid propagation； adventitious bud

文冠果（Xanthoceras sorbifolia）為無患子科（Sapindaceae）文冠果屬（Xanthoceras） [1]，主要分布在中國北部，具有較強的適應性和抗逆能力，壽命長，在黃土高原、沙地和石質山區等瘠薄多石且干旱的地方均能生長，是我國水土保持和防沙、改造環境的重要優良樹種。文冠果種子含油率高達30%～60%，種仁含油率高達55%～66%，被譽為“北方油茶”，果油脂肪酸含有豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞油酸、亞麻油酸等，可以用來生產生物柴油，也是重要的生物質能源樹種[2]。文冠果含有豐富的蛋白質和氨基酸，枝條、葉子、果殼等部位的提取物有抗病毒、防治心血管疾病和增強記憶力等功效[3]，可應用在食品、醫藥和化工等領域。由于近些年來石油資源日益枯竭，文冠果作為含油量非常高的生物柴油原料而備受重視，但文冠果幼樹落花十分嚴重，種源嚴重不足[4]。文冠果快繁體系的建立可以實現文冠果高效快速繁殖，是解決種源不足問題的有效途徑。本研究采用文冠果實生苗的嫩莖為外植體，通過確定消毒方法、篩選誘導不定芽和誘導生根的最適培養基，建立一個穩定且高效的文冠果快繁體系，為文冠果的規?；焖俜敝程峁├碚摵图夹g支持。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

文冠果種子由新疆奇臺縣文冠果種植基地提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 文冠果幼苗的培養 選擇籽粒飽滿、無病蟲害的文冠果種子，80 ℃水浴燙種10 min后進行沙培種植，當長至4周苗齡時取莖段作為本試驗的外植體。

1.2.2 外植體的消毒 將花盆中的文冠果苗剪下，將嫩莖切成長度為2.5 cm的莖段作為外植體，每個莖段上帶有兩個腋芽，在水中加洗潔精用流水沖洗5～24 h，清洗好的莖段用75%酒精消毒30 s，無菌水沖洗3次，再用0.1%的HgCl2分別消毒3，5，7，9，11，13，15 min，無菌水清洗5次。將消毒后的莖段接種至芽誘導培養基：WPM+蔗糖30 g·L-1 +瓊脂8.5 g·L-1。每瓶接種5個莖段，3次重復，25±2 ℃光照12 h·d-1培養，1周后統計染菌情況。

1.2.3 文冠果不定芽的誘導 將消毒后的莖段接種至芽誘導培養基中，芽誘導培養基為：WPM+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA2.0 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂8.5 g·L-1，其中6-BA濃度為0，1.0，2.0 mg·L-1；IBA濃度為0，1.0，2.0 mg·L-1；IAA濃度為0，1.0，2.0 mg·L-1，3次重復，25±2 ℃光照12 h培養，10 d后統計腋芽誘導率。出芽率=發芽的節點數/接種的莖段節點數×100%。

1.2.4 文冠果的生根誘導 待芽長至3 cm左右時轉入生根培養基：1/2WPM+IBA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+Gln300 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+瓊脂8.5 g·L-1，25±2℃光照12 h·d-1培養20 d，當根系發出側根時取出組培苗，用清水洗去根部培養基，移入蛭石和草炭為基質的營養缽中，最后移栽至花盆。endprint

1.3 數據處理方法

試驗數據用Microsoft Excel軟件整理后，采用SPSS 22.0進行單因素方差分析（ANOVA）。

2 結果與分析

2.1 0.1%HgCl2消毒時間對文冠果外植體消毒效果的影響

從表1可以看出，當0.1%HgCl2消毒時間低于5 min時，莖段染菌個數和染菌率顯著高于其他時間處理，其他時間處理間差異不顯著；當0.1%HgCl2消毒時間高于9 min時，莖段染菌率為零，但是莖段死亡數隨著消毒時間延長而增多；只有當0.1%HgCl2消毒時間為7 min時，莖段染菌率低，且莖段無死亡。因此，70%酒精消毒30 s，0.1%HgCl2消毒7 min為最佳消毒處理。

2.2 不同激素組合對文冠果不定芽誘導的影響

外植體接種到芽誘導培養基上培養到第10天時不定芽生長狀況出現顯著差異。從表2可以看出，不同激素組合對外植體不定芽的誘導差異較大，處理4的芽誘導效果最好，顯著高于對照組和處理1，且不定芽的生長狀態最好，芽體粗壯，平均長度為1.8 cm；處理2和處理3出芽率較高，與處理4差異未達顯著水平，但不定芽的狀態較差，芽體纖細，芽較短。因此，最佳芽誘導培養基為WPM+6-BA1.0 mg·L-1+IBA1.0 mg·L-1 +IAA2.0 mg·L-1。

2.3 文冠果生根及移栽

將長度為3 cm左右芽切下轉接到生根培養基，15 d時莖段大部分基部膨大、出現愈傷組織，30 d后可長出根系，挑選根系健壯的組培苗進行煉苗移栽，3 d后移栽至濕沙子為基質的花盆中，移栽后長勢良好，葉色濃綠。

3 結論與討論

植物外植體表皮攜帶大量微生物且體內有內生菌，消毒難度大[5]。酒精、HgCl2、次氯酸鈉、氯氣、抗生素等均有滅菌消毒的作用[6]，常用作消毒試驗消毒劑，這些消毒劑如果消毒時間太長會導致外植體發生褐化，在消毒試驗中一定要權衡消毒效果和外植體損傷程度這兩個方面，選出最佳的消毒劑和消毒時間組合。本研究中在花盆播種文冠果種子，長出的文冠果幼苗不接觸攜帶大量微生物的外界開放環境，有助于降低污染，本試驗使用的消毒劑是70%的酒精和0.1%的HgCl2組合，通過消毒試驗篩選出最佳的消毒時間，從而確定最佳的消毒方案。

激素是影響不定芽誘導效果的最重要因素，大量研究表明，在有些植物中，生長素與細胞分裂素的合理配比能夠達到非常好的誘導效果。程冉[7]篩選出了文冠果芽誘導的最佳培養基和激素配比是MS+BA1.0 mg·L-1+NAA0.2 mg·L-1。柳金鳳等[8]提出當6-BA濃度一定時，IAA比NAA更會有利于誘導文冠果的萌芽，IAA濃度為 0.8 mg·L-1時，萌芽的誘導率達到了最高。本研究采用文冠果實生苗的嫩莖作為外植體，生長狀態旺盛，更有利于芽誘導，研究結果表明細胞分裂素6-BA和生長素IBA、IAA配合作用可以誘導出不定芽，且在6-BA1.0 mg·L-1、IBA1.0 mg·L-1、IAA2.0 mg·L-1的激素組合時出芽率最高，芽長勢最好。

生根誘導是組織培養過程中一個非常關鍵的環節，它直接關系到組培苗移栽的成活率，更關系到組織培養試驗的成敗[9]。以往的研究表明，文冠果的組培苗生根特別困難[10]。本試驗結果表明，采用低鹽培養基添加氨基酸，并配合不同激素配比最終成功誘導文冠果組培苗生根，煉苗移栽后長勢良好。本研究采用4周苗齡的文冠果實生苗嫩莖作為外植體，成功建立了文冠果無性快繁體系，對文冠果的工廠化育苗有一定參考意義。

參考文獻：

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[5]潘娟，李先源，李名楊.植物組織培養過程中常見問題及解決辦法[J].安徽農業科學，2009，37（6）：2392-2394.

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[7]程冉.文冠果的引種、快繁及優質豐產栽培技術體系研究[D].泰安：山東農業大學，2004：31-32.

[8]柳金鳳，吳建華，閔麗霞.文冠果組培快繁技術研究[J].江蘇農業科學，2010（2）：52-54.

[9]黃永偉，賈明仁，王洪波，等.影響文冠果組織培養苗離體生根的因素[J].北方果樹，2010（4）：7-9.

[10]李朝暉，史紹林，王全玉，等.文冠果組培苗生根與移栽試驗[J].防護林科技，2011（6）：36-37.endprint