液相色譜－串聯質譜法測定洋蔥中滅多威和殺線威殘留量

倪永付，朱 濤，閆秋成

（濟寧出入境檢驗檢疫局，濟寧272000）

滅多威、殺線威均屬于氨基甲酸酯類殺蟲劑，其結構式見圖1。目前已報道的關于這兩種農藥的測定方法有 氣 相 色 譜 法［1－2］、液 相 色 譜 法［3－4］、氣 相 色譜－質譜 法［5］、液 相 色 譜－串 聯 質 譜 法［6－8］，國家標準GB 2763－2014《食品安全國家標準 食品中農藥最大殘留限量》［9］中關于蔬菜、水果中滅多威的測定方法為 NY／T 761－2008［10］，殺線威的測定方法為NT／T 1453［11］和 SN／T 0134－2010［12］。NY／T 761－2008使用乙腈提取，氨基固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜法測定；NT／T 1453使用乙酸乙酯提取，硅膠固相萃取柱凈化，采用液相色譜－串聯質譜法測定；SN／T 0134－2010使用乙腈提取，活性炭柱和弗羅里硅土固相萃取柱凈化，采用液相色譜－串聯質譜法測定。固相萃取法雖然能達到滿意的凈化效果，但操作較為繁瑣，分散固相萃取技術因其具有使用成本低、操作簡便、快速等特點，在農藥殘留檢測中比固相萃取技術更受青睞。液相色譜串聯質譜技術由于其檢測速度快、靈敏度高，在分析領域得到越來越廣泛地應用。石墨烯是一種二維碳材料，比表面積大，與常規的吸附劑C18、N－丙基乙二胺（PSA）、碳黑（GCB）相比，具有更強的吸附能力。目前關于使用石墨烯作為分散固相萃取吸附劑測定洋蔥中滅多威、殺線威殘留的研究鮮見報道。本工作采用石墨烯作為分散固相吸附劑，提出了石墨烯分散固相萃取結合液相色譜－串聯質譜法測定洋蔥中滅多威、殺線威殘留量的分析方法。

圖1 滅多威和殺線威的結構式Fig．1 Structural formulae of methomyl and oxamyl

1 試驗部分

1．1 儀器與試劑

Agilent 1290－6460型液相色譜－串聯質譜儀，配電噴霧離子源；IKA GM 200型高速均質機；MMV－1000W型振蕩器；CR 22GⅢ型高速冷凍離心機；IKA MS 3型渦旋混勻器。

滅多威標準溶液：100．0mg·L－1。

殺線威標準溶液：100．0mg·L－1。

滅多威、殺線威混合標準儲備溶液：將100．0mg·L－1的滅多威、殺線威標 準 溶 液 各1．00mL轉移至100mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻備用。

甲醇、乙腈、丙酮、乙酸乙酯、甲酸均為色譜純；無水硫酸鈉為分析純，于650℃灼燒4h，冷卻后貯存于干燥器中，備用；試驗用水為超純水。

1．2 儀器工作條件

1）色譜條件 Agilent Poroshell 120EC－C18色譜柱（3．0mm×100mm，2．7μm），柱溫30℃；進樣體積5μL；流量0．35mL·min－1；流動相A為水，B為甲醇。梯度洗脫程序：0～1．0min時，B為10%；1．0～2．0min時，B由10%升至90%，保持3min；5．0～7．1min時，B由90%降至10%，保持0．9min。

2）質譜條件 噴射流離子聚焦電噴霧離子源，正離子掃描模式；多反應監測（MRM）模式；干燥氣溫度325℃，干燥氣流量10L·min－1；霧化氣壓力310．3kPa；鞘氣溫度350℃，鞘氣流量11L·min－1；毛細管電壓4 000V；碰撞氣為高純氮（純度不小于99．999%）；各離子對駐留時間均為100ms。其他質譜參數見表1。

表1 質譜參數Tab．1 MS parameters

1．3 試驗方法

稱取試樣5．000 0g于離心管中，加入乙腈10mL，均質1min，加入無水硫酸鈉5g，渦旋混勻，振蕩提取30min后，于6℃以9 000r·min－1轉速離心5min，取乙腈層2mL至15mL離心管中，加入石墨烯14mg，渦旋30s，離心，取上清液經0．22μm有機相濾膜過濾后，按儀器工作條件進行測定。

2 結果與討論

2．1 色譜行為

在優化的色譜及質譜條件下對滅多威、殺線威的混合標準溶液進行測定，其色譜圖見圖2。

2．2 樣品前處理條件的選擇

2．2．1 提取劑

根據國家標準GB 2763－2014推薦的測定方法，比較了乙腈、乙酸乙酯、丙酮等常用的農藥殘留提取劑對滅多威和殺線威回收率的影響。試驗結果表明：3種提取劑的提取效率接近；使用乙酸乙酯提取，需要轉溶后再進行分散固相萃取，后續處理操作較繁瑣；而使用丙酮提取，提取雜質較多，不利于后續凈化；使用乙腈不僅能夠滿足回收率要求，而且分散固相萃取凈化后直接上機檢測，無需轉溶操作，能夠節約時間，提高效率。試驗采用乙腈為提取劑。

圖2 混合標準溶液的MRM色譜圖Fig．2 MRM chromatograms of mixed standard solution

2．2．2 分散固相萃取凈化劑

分散固相萃取吸附材料需要滿足對雜質吸附而對目標物不產生吸附或者雖產生吸附但能滿足檢測回收率的要求。試驗采用空白洋蔥基質提取液配制10μg·L－1的基質標準溶液，考察了 C18、PSA、GCB、石墨烯作為分散固相萃取吸附劑對基質的凈化效果。結果表明：4種凈化劑均對基質有較好的凈化作用，但達到相同的凈化效果時，石墨烯的用量更少，更符合經濟、環保的要求。試驗選擇石墨烯作為分散固相萃取凈化劑。

2．2．3 分散固相萃取凈化劑用量

分散固相萃取凈化劑的用量是影響凈化效果的一個重要因素。試驗考察了石墨烯用量分別為1，2，8，14，20mg時對凈化效果（峰面積為指標）的影響。結果表明：石墨烯用量在1～14mg之間時，滅多威、殺線威的峰面積呈上升趨勢；當石墨烯的用量為14mg時，兩種化合物的峰面積均達到最大；繼續增加石墨烯用量，兩種化合物的峰面積無明顯變化。試驗選擇石墨烯用量為14mg。

2．2．4 溶液酸度

溶液的酸度能夠影響分散固相萃取劑和目標化合物性質及其結合方式。由于滅多威、殺線威在堿性條件下會迅速分解，根據農藥大典［13］介紹，殺線威的半衰期在pH為5時大于31d，在pH為7時是8d，在pH為9時是3h。試驗根據實際情況考察了酸度在pH 4～7范圍內變化時對分散固相萃取效率的影響，結果表明：目標物隨酸度變化無明顯變化。試驗在實際操作中不對酸度進行調整。

2．2．5 離子強度

溶液中加鹽可以降低待測物的溶解度，進而影響目標物在吸附劑和樣品溶液之間的分配系數，但高含量的鹽會產生粘滯阻力，從而降低萃取效率。試驗在溶液中加入氯化鈉來調節離子強度，分別配制氯化鈉質量分數為0，5%，10%，15%，20%，25%的樣品溶液，考察離子強度對萃取效率的影響。結果表明：溶液的離子強度對目標物的峰面積影響不大。試驗不對離子強度進行調節。

2．3 流動相的選擇

使用10μg·L－1的滅多威、殺線威混合標準溶液進樣，分別考察了甲醇－0．1%（體積分數，下同）甲酸溶液、乙腈－0．1%甲酸溶液、甲醇－水、乙腈－水為流動相體系時對滅多威、殺線威的峰形和響應值的影響。結果表明：4種流動相體系，滅多威、殺線威的峰形均能達到滿意效果，但響應值有較大的差別。甲醇－水為流動相時，兩種化合物的響應值明顯高于乙腈－水為流動相時的響應值；相對于甲醇－水流動相體系，在甲醇－0．1%甲酸溶液流動相體系下，滅多威響應值變化不大，而殺線威的響應值下降，峰面積減小。通過調節甲醇、水的比例及流量發現，在梯度洗脫條件下能夠獲得快速分析的色譜條件，優化的色譜條件見1．2節。

2．4 質譜條件的選擇

根據兩種化合物的結構特征，選擇電噴霧正離子源（ESI＋）作為電離模式。首先進行一級質譜分析，得到每種化合物的分子離子峰，選取相應的母離子峰對其碎裂電壓進行優化，然后在最佳碎裂電壓下對其進行二級質譜分析、優化，得到碎片離子、碰撞能量等信息。將優化得到的母離子、子離子、碎裂電壓、碰撞能量建立滅多威、殺線威檢測的多反應監測（MRM）參數，見表1。

2．5 標準曲線及檢出限

配制質量濃度分別為5．00，10．0，20．0，50．0，100，200μg·L－1的空白洋蔥基質標準溶液系列，按儀器工作條件進行測定。以化合物的質量濃度為橫坐標，對應的定量離子峰面積為縱坐標繪制標準曲線，其線性參數見表2。以3倍信噪比計算方法的檢出限（3S／N），以10倍信噪比計算方法的測定下 限（10S／N），結果見表2。

表2 線性參數、檢出限與測定下限Tab．2 Linearity parameters，detection limits and lower limits of determination

2．6 精密度和回收試驗

稱取空白試樣 5．000 0g，在 10．0，20．0，50．0μg·kg－1等3個濃度水平下按試驗方法進行加標回收試驗，每個添加水平平行測定6次，其結果見表3。

表3 精密度和回收試驗結果（n＝6）Tab．3 Results of tests for precision and recovery（n＝6）

由表3可知：加標回收率在66．5%～94．0%之間，相對標準偏差（RSD）在7．4%～11%之間。

2．7 樣品分析

按試驗方法對送檢的10份洋蔥樣品進行測定，結果表明，均未檢出滅多威、殺線威。

本工作以石墨烯作為分散固相萃取吸附劑，建立了石墨烯分散固相萃?。合嗌V－串聯質譜法測定洋蔥中滅多威、殺線威殘留量的方法，并對提取劑、凈化劑及其用量、溶液酸度、離子強度、色譜條件和質譜條件等影響因素進行了優化。結果表明，石墨烯作為分散固相萃取吸附劑具有用量少的優點，方法具有較高的精密度，回收率、檢出限和測定下限均能滿足測定要求，適用于洋蔥中滅多威、殺線威殘留量的測定。

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