王樹森(天津市第一中心醫院移植中心細胞移植科,衛生部危重病急救醫學重點實驗室,天津 300192)
胰腺在低溫低壓下原位灌注UW器官保存液后0~4℃保存,在最短的時間內轉移至GMP實驗室,胰腺經過消毒、修剪后插管灌入膠原酶,緩慢逐漸加壓灌注直至胰腺組織充分膨脹。將灌注好的胰腺組織切成8~12塊后轉移至450 ml或600 ml的Ricordi消化罐中,迅速升溫至37℃后機械震蕩同時每分鐘抽取組織,進行雙硫腙染色,顯微鏡下觀察胰島分離情況,當胰島與外分泌組織充分分離時,終止消化,迅速灌入4℃1640溶液,并將組織液收集至自配的緩沖溶液中。組織液離心洗滌2~3次后,依據IEQ計數(一個直徑150 μm的胰島為一個胰島當量)。將消化后的胰島置于UW液中靜止30分鐘以上,然后在COBE2991血細胞淘洗機上以連續密度梯度離心法純化胰島,根據每管中胰島細胞的純度將其分為高純度、中等純度和低純度。離心后,進行雙人計數,對胰島大小、碎片、密度及形態進行量化評分,估算培養瓶數量,并置于5% CO2培養箱22℃培養移植。