急性冠脈綜合征患者血清血小板衍生生長因子表達的臨床研究

龐斯斯 閔笑顏 周傳偉 王向明

血小板衍生生長因子（platelet-derived growth factor，PDGF）主要來源于血小板，也存在于損傷的內皮細胞及移行于內皮下的成纖維細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞、系膜細胞等中[1]。目前研究認為，PDGF與其受體結合后發揮生物學效應，參與多種病理生理過程。PDGF-BB通過趨化作用、促分裂效應及血管收縮效應參與動脈粥樣硬化發生發展過程，且可促進新生血管形成，在多種組織損傷修復及疾病過程中發揮重要作用[2]。

現已證實，PDGF在動脈粥樣硬化、血管內皮損傷等病理生理過程中起到重要的作用。但不同類型冠心病患者血漿PDGF濃度的變化情況，以及與冠狀動脈疾病嚴重程度之間的關系仍存在爭議。本研究通過探討急性冠脈綜合征患者外周血及冠狀動脈局部血清PDGF濃度與冠狀動脈疾病嚴重程度的關系，為冠心病相關細胞因子的研究及ACS疾病嚴重程度的判斷提供理論依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象 研究納入2012年9月至2013年12月在南京醫科大學第一附屬醫院心血管科住院并行冠狀動脈造影的急性冠脈綜合征患者，年齡≥18歲，依據冠狀動脈造影結果及臨床癥狀分組。排除標準：①既往行冠狀動脈旁路移植術（CABG）患者；②存在嚴重心功能不全（LVEF≤30%）患者；③嚴重合并癥，如肝衰竭、腎衰竭、結締組織病、腫瘤及感染性疾??；④合并急性出血性疾??；⑤急性腦卒中。最終入選ACS患者81例，其中包括急性心梗組（AMI group）患者61例，男性50例，女性11例，年齡31～84（60.4±11.5）歲；不穩定心絞痛組（UAP group）患者20例，男性14例，女性6例，年齡49～80（62.2±8.5）歲。另外選取在此期間因胸痛行冠脈造影術，術中未見冠脈狹窄者為非冠心病組，即對照組（non-CHD group，control）29例，男性16例，女性13例，年齡45～84（59.6±9.6）歲。

1.2 臨床資料收集 收集并獲取所有患者基本資料，包括性別、年齡、身高、體質量指數（BMI），高血壓、糖尿病等既往病史；測量收縮壓、舒張壓、心率；全自動生化分析儀檢測空腹血糖、總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯、血肌酐、尿酸、肝功能、腎功能等。

1.3 冠狀動脈造影術 每位研究對象均采用GE Innova3000型血管造影機行CAG檢查，橈動脈或股動脈穿刺，選擇JL、JR造影導管，分別送入左、右冠狀動脈開口處，多體位投照，記錄冠脈造影結果。非冠心病定義為造影血管的管腔直徑正?；颡M窄＜50%；冠心病定義為主要血管（左前降支、回旋支和右冠狀動脈及其主要分支）的狹窄程度≥50%。

1.4 SYNTAX積分計算 由兩名專業的長期從事冠狀動脈介入工作的醫生對造影結果進行評價，綜合評價左冠狀動脈主干、前降支、回旋支及右冠狀動脈的狹窄程度，利用在線SYNTAX評分系統（http：//www.syntax.score.com），根據病變位置、狹窄程度、是否分叉、鈣化程度、是否彌漫等解剖和病理特點逐一對每個病變進行評分，然后把分值相加得出患者的SYNTAX積分。1～22分為低危組，23～32分為中危組，≥33分為高危組。

1.5 樣本采集及處理

1.5.1 外周血采集 患者行冠脈造影前，穿刺成功植入動脈鞘管后，在鞘管內抽取橈動脈或股動脈血（外周血）5 ml。

1.5.2 冠脈內血液采集 穿刺橈動脈或股動脈成功后，置入6F鞘管，選擇指引導管，先以導絲通過病變部位，沿導絲將Diver血栓抽吸導管送至病變遠端，抽取冠狀動脈病變遠端（冠脈內）血5 ml。所有血液在室溫下以3000 r/min離心10 min，再取0.5 ml的血漿于-70℃凍存待檢。

1.6 血清PDGF測定方法 利用PDGF-BB ELISA試劑盒（美國R&D生物科技有限公司）測定血清PDGF水平。根據說明書，按照步驟測定每個血清樣本和標準品的OD值，繪制出標準曲線，依據各樣品的OD值計算出PDGF濃度，即待測樣品的實際濃度。

1.7 統計學方法 用SPSS 21.0軟件進行數據分析。計量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗，三組間比較采用ANOVA方差分析；計數資料以頻數表示，組間比較采用χ2檢驗；ACS患者冠脈內與外周血生長因子濃度比較采用配對t檢驗；ACS患者外周血與對照組外周血間比較采用單因素方差分析。單因素采用Pearson相關分析，采用Logistic回歸分析進行多因素間的相關性分析，并對性別、年齡、高血壓史、總膽固醇、低密度脂蛋白、空腹血糖等常見心血管病危險因素進行校正。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組臨床資料比較 與對照組比較，冠心病ACS組年齡、吸煙史及空腹血糖、LDL-C水平升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。ACS組間比較顯示，與不穩定型心絞痛組比較，患高血壓、吸煙的比例及LDL-C水平顯著升高（P＜0.05）。三組患者間其余指標兩兩比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 患者基本臨床資料［x±s，例數及百分率（%）］

2.2 各組患者PDGF濃度比較 與對照組比較，冠心病ACS組外周血PDGF濃度顯著升高，且差異有統計學意義［（723.29±679.53）pg/ml比（369.12.0± 292.39）pg/ml，P＜0.05］；冠心病ACS組中AMI組外周血PDGF濃度較UAP組顯著升高［（758.36± 714.56）pg/ml比（614.11±600.39）pg/ml，P＜0.05］。ACS組患者冠狀動脈內PDGF濃度較外周血PDG濃度升高［（911.89±735.41）pg/ml比（723.29 679.53）pg/ml，P＜0.01］；ACS組冠狀動脈內PDG濃度比較顯示，AMI組較UAP組升高［（1114.72 770.02）pg/ml比（788.93±611.99）pg/ml，P＜0.01］，差異具有統計學意義。見表2。

表2 各組患者PDGF濃度比較（x±s，pg/ml）

2.3 SYNTAX積分與外周血PDGF濃度的相關性分析 按照SYNTAX積分，將所有入組ACS患者分為低危組（1～22分）、中危組（23～32分）和高危組（≥33分）。冠心病ACS組中低危組、中危組及高危組患者外周血PDGF呈上升趨勢，同樣冠狀動脈內PDGF濃度也呈上升趨勢，但組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。ACS組內兩兩比較，高危組患者外周血PDGF濃度較低危組顯著升高（P＜0.05），但高危組與中危組比較無顯著差異（見圖1A、B）。高危組患者冠狀動脈內PDGF濃度也較低危組顯著升高（P＜0.05），而與中危組比較無顯著差異。中危組和低危組外周血PDGF濃度與冠狀動脈內PDG濃度均無顯著差異。Pearson相關分析顯示，外周血PDGF濃度與冠脈狹窄程度（SYNTAX評分）呈正相關（r=0.233，P＜0.05）。冠狀動脈內PDGF濃度與冠狀動脈病變嚴重程度同樣呈正相關（r=0.235，P＜0.05）（見圖2A、B）。

2.4 以PDGF水平四分位間距分組患者冠狀動脈嚴重程度比較 以PDGF水平的四分位將所有患者分為4組，分別為Q1組（＜191.35 pg/ml）、Q2組（191.35～461.45 ng/ml）、Q3組（461.45～750.33 pg/ml）、Q4組（≥750.33 pg/ml）。隨著血清PDGF濃度的逐漸增高，患者低密度脂蛋白、血小板計數逐步增高，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。比較不同血清PDGF水平患者冠狀動脈病變程度發現，Q4組的SYNTAX評分均顯著高于Q1和Q2組（P＜0.05）。見表3。

表3 PDGF水平四分位間距分組患者冠狀動脈嚴重程度比較（x±s）

3 討論

血小板衍生生長因子為24 Ku的陽離子糖蛋白，其主要來源是血小板，也存在于損傷的內皮細胞，以及移行于內皮下的成纖維細胞、平滑肌細胞、巨噬細胞、系膜細胞等中[1]。以上多種細胞以自分泌、旁分泌的形式合成及釋放PDGF，并介導多種組織中內皮與間質的相互作用[3-5]。

PDGF具有5種亞型：PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PDGF-CC和PDGF-DD。目前研究認為，PDGF-BB與其受體結合后通過多種機制發揮生物學效應，參與多種病理生理發展過程[2]。研究表明，PDGF主要生物學效應包括：①促細胞分裂效應[6]。②化學趨化性。PDGF對平滑肌細胞、中性粒細胞以及成纖維細胞有趨化作用[7]。③血管收縮效應。研究顯示，PDGF-BB誘導大鼠動脈收縮的反應呈濃度依賴性，并且通過抑制內皮衍生舒張因子的合成而促進血管收縮，其收縮血管作用強于血管緊張素[8]。PDGF的這三種作用在動脈粥樣硬化過程中同時存在，并從多方面參與動脈粥樣硬化過程。

現已證實，PDGF在動脈粥樣硬化、血管內皮損傷等病理生理過程中起到重要的作用，但不同類型冠心病患者血漿PDGF濃度的變化情況，以及與冠狀動脈疾病嚴重程度之間的關系仍存在爭議。

本研究測定了急性冠脈綜合征患者外周血及冠狀動脈局部血清PDGF濃度，并通過非冠心病組做對照，結果發現，ACS患者外周血血清PDGF濃度較非冠心病組顯著升高，且PDGF在ACS患者冠脈局部濃度顯著高于外周血濃度。我們分析原因可能與ACS患者內膜損傷以后的以下機制有關：①內膜損傷后，血小板激活，其在損傷局部黏附聚集，釋放PDGF-BB，以誘導中膜平滑肌細胞向內膜遷移并增生。②內皮損傷后，細胞功能激活，由此產生凝血酶；凝血酶可激活凝血瀑布的一系列反應，同時刺激血小板釋放PDGF-BB[9]。③ACS患者存在血管狹窄甚至閉塞，導致病變血管局部的血流動力學發生改變，承受剪切力的血小板和內皮細胞生成PDGF-BB增多，由此通過PDGF-BB/PDGFR-β途徑刺激內皮細胞增生?？偠灾?，血管損傷后在損傷局部會立即出現血小板聚集激活，激活的血小板及內皮細胞可釋放出大量血小板衍生生長因子。

而另有研究[10,11]指出，動脈粥樣硬化患者血漿PDGF-BB水平及白細胞介素IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7水平均顯著升高，提示可能與炎癥因子共同作用，影響動脈粥樣硬化進程。由于炎癥在動脈粥樣硬化性疾病的病程進展中起著顯著的作用，缺血心肌組織中的炎癥反應亦會激發炎癥因子及PDGF等細胞因子在局部的釋放，進一步使冠脈局部PDGF濃度升高。在ACS患者中，急性心肌梗死患者無論是外周血還是冠狀動脈局部血清PDGF濃度均顯著高于不穩定型心絞痛患者，考慮與AMI病理過程中血小板激活程度及炎癥反應程度較UAP更為激烈有關。

研究進一步探討了血清PDGF濃度與冠狀動脈病變嚴重程度的相關性。選用SYNTAX積分系統作為評價冠狀動脈病變嚴重程度的標準。SYNTAX評分系統是建立在冠狀動脈解剖基礎上的危險分層工具，全面評估了冠狀動脈解剖特點，是一種精確量化的客觀評價指標[12]。相關性分析顯示，外周血及冠狀動脈局部血清PDGF濃度與SYNTAX評分均呈正相關關系，且發現隨著血清PDGF濃度的逐漸增高，患者SYNTAX積分逐步增高，高濃度組平均SYNTAX積分顯著高于低濃度組。研究表明，血清PDGF濃度可以作為判斷冠心病患者血管病變嚴重程度及炎癥反應程度的重要指標，為ACS患者疾病風險識別提高了參考價值。

綜上所述，急性冠脈綜合征患者血清PDGF濃度顯著升高，尤其在冠狀動脈局部PDGF呈現濃聚，與冠狀動脈局部血小板激活和炎癥反應密切相關，血清PDGF濃度可反映冠狀動脈病變的嚴重程度。

（本文圖片見后插一）

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