乙型病毒性肝炎患者血清炎癥因子及趨化因子表達及意義

趙小麗,高鵬，劉俊華,周鳳蕊,王佳樂,李廣明

（鄭州市第六人民醫院肝病五科，鄭州450061）

乙型肝炎的發生，可以顯著促進肝臟細胞代謝功能的損傷，加劇肝臟纖維化或者肝癌的發生風險。流行病學研究顯示，急性乙型肝炎或者慢性乙型肝炎的發病率可達375～456/10萬人以上[1]，特別是在部分經濟欠發達地區，乙型肝炎的發病率更高。在探討乙型肝炎的發病機制的過程中發現，細胞炎癥因子或者趨化因子的高表達可以通過加劇肝臟細胞的炎癥損傷、促進細胞膜完整性的破壞，并通過加劇肝臟細胞間質細胞的纖維化，進而促進乙型肝炎的病情進展[2-3]。趨化因子（CXCL16和CXCL11）及血清炎癥因子（IL-6、IL-10、IL-12）等在影響肝臟細胞線粒體損傷或者代償功能障礙的過程中發揮了重要的作用[4-5]。本研究選取93例乙型肝炎患者，進一步探討炎癥因子及趨化因子在乙肝患者外周靜脈血中的異常表達及意義。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2015年2月-2017年2月在我院治療的慢性乙型肝炎患者93例，其中輕度患者37例，中度患者30例，重度患者26例。納入標準：（1）診斷符合中華醫學會制定的標準[5]；（2）入院前未接受免疫調節和抗病毒治療；（3）患者知情同意并簽署同意書。排除標準：（1）合并甲肝、丙肝等病毒性感染以及酒精性肝炎、脂肪肝、自身免疫性肝炎等其他肝炎；（2）合并有惡性腫瘤、自身免疫性疾病等疾病。同時選取40例健康志愿者作為對照組，3組受試者性別、年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05），見表 1。

表1　4組一般資料比較Tab 1　Comparison of general data of patients in the 4 groups

1.2檢測方法所有患者均于入院24 h內采集空腹靜脈血約5 mL并分作2份，1份自然抗凝后以3 000 r/min離心10 min，取上清液采用酶聯免疫吸附法測定血清中CXCL16、CXCL11水平，檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物有限公司，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作；另一份置于枸櫞酸鈉抗凝管內，加入IL-6、IL-10和IL-12檢測試劑盒后，利用膠體金法檢測IL-6、IL-10和IL-12水平，試劑盒購自上海奧普生物醫藥有限公司，具體檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3統計學處理統計分析采用SPSS19.0軟件，計量資料采用±s表示，多組間比較使用方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗；計數資料比較使用χ2檢驗；相關性采用Pearson相關分析,以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2　結果

2.1各組血清炎癥因子及趨化因子比較輕度、中度和重度組CXCL16、CXCL11明顯高于對照組（P＜0.05）；重度組IL-6、IL-10和IL-12明顯高于輕度組、中度組和對照組（P＜0.05）；中度組 IL-6、IL-10和IL-12明顯高于輕度組和對照組（P＜0.05）。見表2。

表2　各組血清炎癥因子及趨化因子比較Tab 2 Comparison of serum inflammatory factors and chemokines in each group

2.2各組生化指標比較輕度、中度和重度組AST、ALT和 DBIL 明顯高于對照組（P＜0.05），而 TC明顯低于對照組（P＜0.05）；3組TG比較差異無統計學意義（P ＞0.05），見表 3。

表3　各組生化指標比較Tab 3 Comparison of biochemical indexes of patients of each group

2.3各組HBV DNA比較重度組HBV DNA明顯高于中度和輕度組（P＜0.05）；中度組HBV DNA明顯高于輕度組（P＜0.05），見表 4。

表4　各組HBV DNA比較Tab 4 Comparison of HBV DNA in each group

2.4相關性分析將乙肝患者炎癥因子與生化指標進行相關分析：IL-6和IL-12與ALT成正相關（r=0.404和0.434，P＜0.05），而 IL-10與 ALT成負相關（r=-0.341，P ＜0.05）；將趨化因子與生化指標進行相關分析：CXCL16與生化指標無相關性（P＞0.05）；將炎癥因子與趨化因子進行相關分析：IL-6、IL-12和 IL-10與 CXCL16、CXCL11無相關性（P＞0.05）；將HBV DNA與生化指標、趨化因子、炎癥因子進行相關分析：HBV DNA 與 ALT、AST、CXCL16呈正相關（r=0.302、0.305 和 0.413，P＜0.05）。

3　討論

乙型肝炎的發生，主要與乙型肝炎病毒感染導致的肝細胞損傷有關[6-7]。同時乙型肝炎治療后患者的肝臟細胞功能損傷仍然較為明顯[8-9]。而通過對乙型肝炎發病過程中炎癥因子或者趨化因子的變化研究，可以為臨床上乙型肝炎的生物學治療提供理論基礎，也可以為乙型肝炎的臨床病情預后評估提供參考。

炎癥因子（IL-6、IL-10和IL-12）等的高表達，可以通過下游炎癥信號通路ROCH的激活，加劇單核細胞或者巨噬細胞的上調，促進乙型肝炎患者的炎癥性損傷和氧化應激損傷[10]；IL-6、IL-10和IL-12等的高表達，也在促進肝臟細胞的線粒體能量利用障礙或者加劇呼吸鏈氧化損傷等方面發揮了重要作用，影響肝臟細胞膜的完整性；CXCL16和CXCL11等趨化因子的表達，能夠在誘導炎癥因子或者免疫因子及補體成分激活的同時，促進不同炎癥信號通路的交叉式激活導致的病情進展[11-12]。已有的研究探討了細胞炎癥因子在乙肝患者中的異常表達，認為高表達的IL-6或者其他類型的細胞炎癥因子，可以顯著促進肝臟細胞膜的氧化應激損傷，促進肝臟細胞膜的損傷，加劇肝功能障礙的形成；另外部分研究探討了趨化因子的血清學異常表達，認為異常表達的趨化因子能夠抑制肝臟細胞膜的修復，促進代謝性相關損傷的發生，加劇病情的進展。

在本研究中可以發現，急性乙肝組和慢性乙肝組CXCL16、CXCL11明顯高于對照組，差異具有統計學意義，提示相關趨化因子的異常表達可能參與了疾病的發生發展過程，趨化因子的表達可以通過影響到免疫因子補體成分的激活，促進炎癥因子如腫瘤壞死因子的激活等，促進肝臟細胞的損傷，加劇乙型肝炎病情的進展。鄧玉奎等[13-14]在探討重度乙型肝炎患者的發病機制的過程中發現，趨化因子如CXCL16表達濃度超過55%時，其可以顯著促進肝功能的損傷，加劇肝功能失代償的風險，且患者的病情越為嚴重，相關血清學趨化因子的異常表達越為明顯，這些均提示了趨化因子或者細胞炎癥因子的異常表達在乙肝發生發展過程中的作用。對于IL-6、IL-10和IL-12等炎癥因子的表達關系分析可見，在急性組及慢性組患者血清中，均存在明顯的IL-6、IL-10和IL-12的高表達，高于正常對照組，差異具有統計學意義，特別是在慢性乙型肝炎患者血清中，相關炎癥因子的指標變化較為明顯，IL-6、IL-10和IL-12等的高表達，可以通過下列幾個方面影響到肝炎患者的病情：（1）IL-6可以促進單核細胞及中性粒細胞對于肝臟間質細胞的浸潤，促進肝臟小葉結構的重塑；（2）IL-12等的上升，促進了肝臟上皮細胞功能代償的異常，影響了細胞膜的完整性。在乙型肝炎組患者中，AST、ALT和DBIL明顯高于對照組，提示肝炎患者體內存在明顯的干細胞功能損傷或者膽汁酸代謝障礙，同時甘油三酯等指標同樣存在一定的異常表達，這主要考慮與短時間內肝臟細胞的生化代償功能的異常有關。HBV DNA的表達在中度或者重度病情的患者中的表達明顯上升，特別是重度組患者的血清中相關指標的表達可進一步上升，提示了HBV DNA的表達與患者的病情嚴重程度的關系，這主要考慮與HBV DNA的表達能夠影響到肝臟細胞的破壞、假小葉的形成及代償性肝臟纖維化損傷等過程有關。相關關系分析可見，CXCL11與AIL成正相關，同時IL-6和IL-12與ALT成正相關，而IL-10與ALT成負相關，這些均提示了炎癥因子或者趨化因子與乙型肝炎患者病情的關系。從機制上考慮，趨化因子與細胞炎癥因子的內在相關關系，可能與下列幾個方面的因素有關：（1）趨化因子如CXCL11的上升，可以促進單核細胞或者巨噬細胞的激活，促進下游細胞炎癥因子的激活，加劇肝臟細胞膜的損傷；（2）趨化因子及細胞炎癥因子如IL-6或者IL-12的結合，能夠在干擾肝臟細胞代謝、蛋白合成等方面發揮作用，影響到乙肝患者病毒顆粒對于肝臟細胞的破壞及損傷。相關性分析也可見，HBV DNA的表達與患者的血清學炎癥因子指標或者趨化因子指標具有密切的關系，進一步提示了HBV DNA的表達與肝炎患者的病情關系。本次研究的創新性在于探討了趨化因子在急性及慢性乙型肝炎患者血清中的異常表達，同時揭示了細胞炎癥因子及趨化因子的內在相關關系。

綜上所述，乙肝患者IL-6、IL-10、IL-12以及CXCL16和CXCL11表達上調，其中IL-6、IL-10、IL-12和CXCL11可一定程度反映肝功能損害程度。后續研究可以增加樣本量進行多中心研究，進一步探討不同的細胞炎癥因子或者趨化因子在乙肝患者中的異常表達及其與患者臨床預后的關系。

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