多糖分析方法研究進展

邱博韜,張鴻宇,許志茹,劉長莉,王宏偉

(東北林業大學生命科學學院,黑龍江哈爾濱 150040)

多糖(polysaccharides)與核酸、蛋白質、脂類并稱為生命體四大基本物質,在許多生命活動中都扮演了重要的角色。隨著研究深入,其生物學活性越來越多被發現,如:免疫調節、抗腫瘤、降低血糖、降血脂、抗病毒、清除氧化自由基、延緩衰老等。多糖廣泛存在于自然界,多源于組織細胞,對細胞、機體的毒副作用小,故其是較為理想的藥物來源[13]。

1 多糖的提取

多糖通過氫鍵或離子鍵與細胞壁或胞間質鏈接,對于不同多糖可以使用不同的提取方法。通常以熱水、酸、堿、乙醇等作為溶劑,以微波或超聲輔助進行粗提。近年來常用的方法有超臨界流體萃取技術和復合酶輔助提取技術。其中,復合酶可以在較為溫和的條件中特異地降解細胞壁及胞內大分子溶出的屏障,加速多糖釋放,同時根據酶的特性,反應可以通過改變體系條件實現控制[4]。

但多糖提取效率不僅由提取方法決定,提取時諸如溫度、時間、次數等因素對其也有很大的影響,因此,對多因素進行優化便成為了提取環節的重中之重。從發展來看其研究方法,依次有單因素法、正交法和響應面法。目前,比較準確的也是被更多研究者采用的是響應面法。響應面法通過如Design expert的計算機軟件,可將提取率作為因變量,將提取因素作為自變量,建立多元函數,并給出直觀圖像,便于選擇最優提取方案[5]。

2 多糖的除雜

通常提取得到的粗多糖提取液,都含有如無機鹽、脂質、蛋白質以及低分子非極性物質等雜質。對于低分子量的小分子雜質可以使用透析法濾去,汪鐸[6]等使用納濾膜DKC和DLC,得到了純度為72.4%的靈芝多糖。而蛋白質通常用蛋白酶法、Sevag法、TCA法、三氟三氯乙烷法去除,于丹[7]等通過聯用分級醇沉和TCA法、Sevag法,處理天花粉多糖,使得除蛋白率達到了88.18%。脂肪可以用乙醇、乙醚、石油醚等有機溶劑除去。吸附、氧化是除去色素雜質的常用方法[8]。

3 多糖的分離純化

經過分離除雜可以得到混合多糖溶液,將其分離成各種單一多糖即是多糖的純化。實質上,分離與純化二者并沒有明顯的界限區分，分離的同時也進行純化,純化時進一步發生著分離。比較常用的方法有沉降法、色譜法、區帶電泳、超速離心等生化分析方法。通常來說,多糖的純化需要兩種及以上的方法結合使用才能得到理想的效果[9]。

4 多糖分析

多糖分析,有時需要將其降解為寡糖或是單糖才方便進行。多糖的降解方法分為物理降解、化學降解、生物降解三種。其中運用鹽酸、硫酸或是三氟乙酸來斷裂糖苷鍵的酸水解法,操作簡單、穩定性和重復性較好,是較為理想和常用的方法[10]?，F常用化學滴定法、比色法以及色譜法等對多糖進行定性、定量分析。

4.1 比色法

又稱化學法,通常先將多糖降解為單糖或者寡糖,再通過紫外可見光分光光度法和標準曲線進行定量分析。不同的單糖所制備的標準溶液在相同條件下的吸收值相差較大,故選用不同的單糖標準溶液所繪制的標準曲線也不同,進而導致測定結果有所差異。

表1 幾種常見單糖的校正系數Table 1 Correction coefficients for several common monosaccharides

4.1.1 苯酚硫酸法 多糖在濃硫酸的作用下,水解為單糖并迅速脫水形成糖醛,糖醛和苯酚發生縮合反應生成橙黃色化合物,一般可在490 nm處進行比色測定。此法操作簡單,反應迅速靈敏,生成的有色化合物顏色穩定性佳,是測定多糖溶液濃度的常用方法[13]。

但由于苯酚含有酚羥基,易與濃硫酸發生磺化反應,濃硫酸與糠醛衍生物競爭苯酚,使得經典苯酚硫酸法對各個顯色條件要求十分嚴格。所以此方法依舊存在著準確性低(在測定有色樣品時尤為明顯)、重現性不佳,操作費時,消耗樣品及試劑較多等問題。陰婉婷等[14]改變了經典方法反應順序:先向樣品中加入濃硫酸,使二者充分反應生成糠醛衍生物,再加入苯酚溶液,產物穩定、易于得到,準確度、重現性明顯提高。姜瓊等[15]通過預先配制顯色液然后統一加熱的方法,配合酶標儀的使用在一定程度上改善了上述問題。同時,由于減少了包括濃硫酸在內的試劑的消耗,使得實驗的安全性得到提高。

4.1.2 蒽酮硫酸法 多糖在濃硫酸的作用下,水解為單糖并迅速脫水形成糖醛,糖醛和蒽酮反應產生藍綠色化合物,通常在625 nm處有最大吸收值,與此進行比色測定[16]。以此法生成的藍綠色化合物顏色穩定性較差,同時,本反應的沸水浴時間對結果有著與糖量非線性關系的直接影響,故應避光、迅速測量,同時,色氨酸含量較高的蛋白質對顯色反應有一定的干擾,色氨酸含量較高的樣品不適用此法。劉桂茹[17]使用稀硫酸外加熱法:蒽酮試劑以稀硫酸加蒽酮配制,冰水浴中加入濃硫酸,在沸水浴中顯色的方法穩定性佳、經濟、易于操作,是最適合實驗應用的方法之一。

4.1.3 3,5二硝基水楊酸(DNS)法 DNS與還原糖在堿性環境中共熱可以產生氨基化合物:3氨基5硝基水楊酸,顯棕紅色,且顏色深淺在一定濃度范圍內與還原糖的量成正比,準確性高、重現性好,又因其能與低濃度糖樣發生反應,因而被廣泛使用[1819]。運用時需注意,吸收光譜的波長選擇、反應時間、顯色劑用量等因素對結果有直接影響,需嚴格控制。應用本法測得為還原糖含量,總糖和多糖含量可以通過:總糖(%)=(水解后還原糖×稀釋倍數/樣品)×0.9×100[20]和多糖=總糖還原糖[21]計算。一般DNS試劑可通過DNS、NaOH和丙三醇配制得到[22]。韓德權等[23]在測定普魯羅蘭多糖發酵液中糖含量時發現,不同濃度乙醇對DNS法測定糖含量沒有影響。但考慮到多糖種類的多樣性,不同濃度對不同多糖的影響還需要進行系統研究。

4.2 滴定法

4.2.1 菲林試劑滴定法

反應指示劑通常為亞甲基藍。亞甲藍是常用的氧化還原指示劑,其氧化型呈藍色,還原型呈無色。亞甲藍的氧化性弱于二價銅離子,故還原糖優先與斐林試劑發生反應,當二價銅離子都還原完后,微量的還原糖即可將亞甲藍還原,溶液藍色褪去變為無色,即是滴定終點。此滴定終點易受顏色干擾,故通常不使用此法測量具有較深顏色的樣品[26]。范作卿等[27]將色素含量豐富的桑葚酒進行稀釋,較為理想地排除了色素的干擾,并利用斐林氏法測得樣品中總糖含量。本法操作簡單、實際用量小、反應快速,但同時,受反應液堿度、熱源強度、煮沸時間和滴定速度等的影響較大,也使得其重現性、準確性較差。減瑾康等[28]對此法進行了改進,在甲液中不加入次甲基藍,而是用酒石酸根合銅絡合物自身轉變為K2CuFe(CN)6(淺黃色溶液)為滴定終點。此外,反應應嚴格在沸騰時進行,以在加快反應速度的同時去除溶解氧的干擾[29]。劉燁等[30]運用物理化學方法設計的無氧滴定裝置,可以很好地克服環境中氧化劑的干擾,使結果可以更真實地反映斐林試劑與還原糖的化學計量關系。另外,隨著技術的進步,斐林氏法也向著自動化方向發展,以此為原理設計的還原糖測定儀,可以自動控制反應條件,滴定迅速,且樣品回收率高,是當下最方便的測定還原糖的方法[31]。

4.2.1.2 高錳酸鉀法 高錳酸鉀滴定法又稱bertrand法,準確度高,重現性好,穩定性良好,可以用來測定斐林氏法所不能測定的有色樣液。將還原糖與斐林試劑共熱所得氧化亞銅沉淀進行抽濾,用溫水洗滌沉淀至濾液中性,并用過量Fe2(SO4)3溶液進行溶解,Cu2O被氧化為銅鹽,Fe2(SO4)3則被還原成亞鐵鹽。用KMnO4液(0.02 mol/L)滴定所得亞鐵溶液,通過1 mL KMnO4液=6.36 mg當量的銅和《相當于氧化亞銅質量時葡萄糖、果糖、乳糖、轉化糖的質量表》,即可求得還原糖量[32]。

4.2.1.3 薩氏法 薩氏法由Somogyi提出并以其名字命名，是一種測定還原糖的微量法,通常用于樣品量在0.015～3.000 mg的分析[33]。薩氏試劑與斐林試劑相似,區別在于薩氏試劑提供堿性環境的試劑為磷酸鈉,這使得薩氏試劑可以較長時間保存。將還原糖與薩氏試劑共熱,所產生的Cu+可與KIO3和KI析出的I2反應,以Na2S2O3標準溶液反應過量的I2,通過化學式便可求得還原糖含量,因此本法靈敏度高,重現性好,且不受有色樣品干擾。此過程中應避免搖動反應容器,以防引入溶解氧或是造成碘的揮發,造成誤差[34]。

4.2.2 氧化還原滴定法

4.2.2.1 碘量法 碘量法有直接碘量法和間接碘量法,直接碘量法是以淀粉溶液為指示劑,用標定過的碘溶液滴定還原糖溶液,溶液出現淡藍色即為滴定終點。因為碘單質性質不穩定,且間接碘量法相對于直接碘量法有著更明確的滴定終點,因而間接碘量法更為常用[35]。還原糖在堿性條件下與碘共熱可以得到碘離子和相應的酸,剩余的游離碘可以在堿性環境下歧化反應為碘離子和次碘酸根離子。此時加稍過量的酸即可產生I2,用Na2S2O3滴定,便可以得到參與反應的碘量。在一定范圍內,間接碘量法可以利用化學反應式直接進行定量計算,得出還原糖含量[36]。本反應需注意滴定速度,滴加過快或滴定時間過長都將造成誤差。B.曼努興[37]認為反應重現性不佳,是因為環境中有諸如Fe3+之類的污染存在而引起,建議用磷酸代替硫酸,以改善此問題。

4.2.2.2 鐵氰化鉀法 堿性環境下,還原糖和K4[Fe(CN)6]與堿共熱可生成K4[Fe(CN)]6。以次甲基藍為指示劑,在碘化鉀滴定反應體系中,由于次甲基藍氧化性低于三價鐵,故當體系藍色褪去為滴定終點,明確的終點,使得反應有很好的準確度和精密度[3839]。本法同斐林氏法一樣需要避免環境中氧化劑對結果的影響,一般通過保持體系微沸的方式解決;本法中鐵氰化鉀的氧化還原反應為可逆反應,傅海波[40]等,在體系中加入了適量硫酸鋅以沉淀亞鐵氰化鉀,進而減小誤差。

4.3 色譜法

色譜法相對于滴定法專一性更強,相較于比色法測定更具準確性,且隨著色譜技術的不斷發展,色譜法成為分離、分析多糖的主流方法。因為待測混合物中各組分有著不同的物理性質,導致其在固定相與流動相間的分配系數有所差別,當待測物經過層析柱時,樣品在兩相間反復進行分配,在吸附與解析的過程中產生速度差異,在流過一定的柱長后相互分離,最后進入檢測器中。各個組分所產生的離子流訊號經過放大,在記錄器上顯示出其相應的色譜峰,從而達到對樣品進行分析的目的[41]。

4.3.1 糖類樣品的預處理 將多糖裂解成小分子單糖,是進行色譜法分析的前提,現常使用酸解法、甲基化處理、smith降解、β消除(O糖苷鍵的稀堿水解)等方法對樣品進行降解。降解所得到的單糖通常不能直接用于色譜分析,需要先根據色譜性質、檢測要求等進行衍生,再進行檢測。

運用GC時需要把單糖衍生成易揮發且熱穩定性良好的物質才能進行,但由于糖類物質通常含有羥基、巰基等極性基團,其內氫鍵作用使得糖類本身并沒有足夠的揮發性,所以樣品在氣相色譜分析前必須進行預處理。氣相色譜分析中常見的糖類衍生物有兩類:一類是在吡啶或DMSO中與六甲基二硅烷、三甲基氯硅烷等試劑反應生成的三甲基硅醚衍生物。另一類是三氟醋酸鹽多羥基醇衍生物等醋酸衍生物,其中白娣斯[42]通過對多種標準單糖的測定,發現糖腈衍生法可以得到與多糖對應的單一的色譜峰且定量精確,是研究食品多糖較為合適的方法。

近年來,GC樣品前處理越發被人們重視,諸如吹掃捕集(P&T)、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)以及微波、超聲等輔助萃取技術得以發展[43]。其中,SPME集采集、萃取、富集和上樣于一身,且操作簡單、無需溶劑、功能多樣、方便快捷,因而被廣泛應用于分析等領域。SPME將固定相涂抹于石英玻璃纖維上作為介質,對樣品進行萃取和濃縮,并在GC進樣口中直接熱解吸(在HPLC中直接以流動相沖洗進入液相色譜柱)完成上樣。固定相決定著SPME對樣品的選擇性,相應的隨著溶膠凝膠(solgel)技術、離子液體、分子印跡技術(MIPs)等技術的發展,SPME技術的熱穩定性、選擇性和靈敏度都有著非常大的提升[44]。SPME-GC/MS多用于對樣品揮發物的成分檢測,紀亞楠[45]等人,分別運用蒽酮硫酸法和SPMEGC/MS對夏黑葡萄果粒進行分析,測得其總糖含量為15.33%±2.19%,以及其揮發性物質的主要16種物質類型。

在HPLC中,樣品糖的衍生物較樣品本身擁有更好地靈敏度、準確性,但衍生方法的選擇取決于檢測器的類型。綜上所述,在分析前需要對樣品進行一定的預處理即衍生反應。常見的衍生方法有:三甲基硅烷化,糖醇乙酸酯衍生化,紫外、熒光標記等[46]。

4.3.2 氣相色譜(GC)

4.3.2.1 氣相色譜(GC) GC以氣體為流動相,通過沖洗法進行沖刷的分離技術。通常根據固定相的選取而分類,其中選取固體的稱為“氣固色譜”,選取液體的稱為“氣液色譜”。其中固定相的極性分布很廣,可依據待測物質的性質進行選擇。近幾年來GC的固定相如:室溫離子液體、金屬有機框架和碳納米材料的研究都有所突破,為氣相色譜注入新的動力[47]。

氣相色譜儀通常有以下系統結構:載氣系統、進樣系統、層析柱、監測系統和記錄系統。載氣(多為惰性氣體或永久性氣體)由高壓鋼瓶經減壓閥調節流出,通過進樣裝置將待測樣品帶入層析柱進行分離,傳統層析柱一般有填充柱和毛細管柱兩種。近年來,得益于微機電系統(MEMS)技術的發展,色譜柱實現微型化,進而獲得更快的分析速度和更優異的分析性能[48],在糖類物質分析中較為常用的層析柱有:OV1701、XE60、XF1150、DB5 等。分離得到的不同組分經過依據混合氣體物化性質所選擇的檢測器進行分析、記錄[49]。目前最為常用的是氫火焰離子化檢測器(FID),是典型的質量型檢測器,其原理是使用氫火焰電離樣品,進而產生微電流用于檢測。FID普適性強,靈敏度高,操作方便,分析結果穩定,常用于定量分析。此外,光度檢測器、電子捕獲檢測器等也可用于糖類分析[50]。

4.3.2.2 裂解氣相色譜(PGC) 利用一定形式的能源熱裂解高聚物,將裂解后的產物進行氣相色譜檢測(必要時輔助以紅外光譜、質譜等儀器可增加分析的有效性和高速性),得到特征的裂解色譜圖,可以間接地分析高聚物。在PGC應用中,常選用石英毛細管色譜柱以及FID、MS等靈敏度、選擇性較好的檢測器組成色譜系統。PGC以其設備簡單、操作簡便、靈敏等優點,成為分析難揮發物質(如高聚物)的常用方法[51]。劉珊等[52]使用PGC/MS模擬香煙燃燒,測得龍須菜多糖的熱裂解產物主要是呋喃類、酮類和有機酸類化合物。

4.3.2.3 氣相色譜串聯其他檢測器 氣相色譜質譜聯用(GCMS):匯總了GC高效的分離能力和MS特意的鑒別能力。但由于一級質譜的靈敏度較低,所以在應用時通常將二級質譜(MS/MS)當做一級質譜使用[53]。GCMS/MS具有靈敏、快速、鑒別能力強等特點,常用于對混合物中未知組分的定性、定量分析和分子量、分子結構測定。

氣相色譜紅外光譜聯用(GCIR):有時僅MS自檢索結果很難確定樣品結構,而紅外光譜具有快速、非破壞性、多種成分同時分析等特點可以分析樣品結構,但IR只能分析純的化合物,同時,GC擁有高效的分離能力,故將GCIR聯用,使之成為高效測定混合物結構的分析手段[54]。

4.3.3 高效液相色譜(HPLC) 當樣品對熱不穩定、恢復性較差時,常使用液相色譜進行分析。HPLC根據分離機制可分為:分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和凝膠色譜四種基礎類型。HPLC是最常用的糖類分析方法之一。常用的固體色譜柱有:糖類專用色譜柱和氨基鍵合色譜柱,前者靈敏度高分離效果好,但通常價格較為昂貴,故后者更為常用。流動相常為緩沖液乙晴/甲醇的二元溶液。依據檢測器不同可分為以下幾類:

4.3.3.1 高效液相色譜示差折光法(HPLCRID) 示差折光法是國家標準GB/T222212008和GB/T222222008中檢測單糖的方法,該方法可通過色譜柱流出物光折射率的變化來連續測定樣品濃度,同時該法不需要衍生,可直接檢測多糖,操作簡便且相對安靜,但其對環境溫度及流動相流速十分敏感,靈敏度較低、不能進行梯度洗脫,使得其無法同時對多種糖分離檢測[55]。楊婧等[56]使用YMCpack NH3色譜柱,以乙腈水為流動相,柱溫25 ℃,RID檢測器,成功分離并檢測了刺糖中蔗果三糖的含量。

4.3.3.2 高效液相色譜熒光/紫外光法(HPLC-FLD/UV) 使用熒光檢測器/紫外檢測器,本法因其靈敏度高、穩定性佳而廣泛應用于HPLC,但該方法需要待測樣品具有熒光或紫外光特性,所以需要對待測樣品進行衍生處理,同時,本法還要求流動相不能在相應波長有所激發/吸收,使得其在可測定樣品范圍和流動相選擇上大打折扣。

4.3.3.3 高效液相色譜蒸發光散射法(HPLC-ELSD) 蒸發光散射法使用的是質量檢測器,通過不揮發物質的顆粒對光的散射程度與其質量成正比的原理,可以對有質量、難揮發的物質進行分析,不論其是否具有發光基團,同時該方法靈敏度高、穩定性好,可以進行梯度洗脫,在一定程度上彌補了其它高效液相色譜檢測器的不足。但由于要使流動相蒸發成為氣溶膠,所以回收率較低,對于高價值或者易揮發的樣品有一定的局限性[57]。林慧等[58]使用Grace Previl Carbohydrate ES色譜柱,蒸發光散射檢測器,以乙腈水為流動相進行梯度洗脫,同時測定了蔗糖、果糖、木糖醇等十種糖和糖醇的含量。

4.3.4 高效陰離子交換色譜脈沖安培檢測(HPAECPAD) 離子交換色譜本質上是HPLC的一種,是利用被分離物質在離子交換劑上的交換勢不同而進行分離的方法。常用于分離離子化合物、有機酸、堿等能電離或可與離子基團相互作用的物質。常見的離子交換劑有合成樹脂、纖維素和硅膠三大類,其中合成樹脂在糖類分析中最為常用。安培檢測是在一定施加電位下,對具有電化學活性的待測樣品發生氧化還原反應時所產生的電流變化的測定。當洗脫液進入檢測器后,可以通過外標峰高和峰的保留時間進行分析。而糖類物質在恒電位檢測時會在電極上積累并改變其性質,干擾檢測結果,脈沖安培檢測器通常為三電勢,分別應用于檢測、洗脫和再活化,克服了此問題。

糖類是多羥基醛或酮,常見的糖類都是偏酸性的,所以當pH≥12時,能夠以陰離子狀態存在。采用陰離子交換層析柱,以強堿性溶液作為流動相,攜帶著陰離子狀態的糖類物質,經過陰離子交換樹脂,糖類陰離子吸附于交換樹脂上,因糖類結構中有疏水基團,所以吸附力大小取決于糖類物質的負電荷、分子結構及大小。由于吸附力有所差異,因而可用強堿液進行梯度洗脫,進而分離樣品進行分析。本法不需要對樣品進行衍生,預處理簡單,有著靈敏、柱效高、檢測數量級跨度大等優勢,是分析糖含量及其組成成分的常用方法[5961]。徐穎等[62]運用此法檢測生物轉化物(麥芽糖和海藻糖合酶轉化)中海藻糖、麥芽糖和葡萄糖的含量,3種糖含量的相對標準偏差在0.93%～2.69%間,重現性良好。

4.3.5 凝膠滲透色譜(GPC) 凝膠滲透色譜又稱為分子篩色譜、體積排除色譜,通過分子篩效應對物質進行區分:凝膠顆?？讖捷^小,直徑較大的分子不易進入,所以洗脫時沿凝膠顆粒間隙流出,流速快,較先流出色譜柱;而小分子物質可以進入凝膠相,在洗脫時需反復地在凝膠顆粒間進入和擴散后才能流出色譜柱,洗脫速度較大分子物質慢,故分子量小的后流出,以達到分離目的。同時,用相應的多糖做標準品,也可以對樣品進行定量測定[63]。

4.3.6 毛細管電泳法(CE) 毛細管電泳法是利用帶電離子在高壓直流電場中遷移速率不同而分離的分析方法。單糖在強堿性溶液中現負電荷,硼砂作為緩沖液,可以使糖在較低的pH條件下帶電荷進而在復合電場中完成分離。常用的檢測方法有UV或LIF檢測法、MS、核磁共振檢測(NMR)等。因糖類大多沒有發色基團,故檢測前常需衍生處理。毛細管電泳法操作簡便、靈敏度高、數據可靠,在分析方面應用日益廣泛,成為單糖和部分寡糖含量的常用檢測手段[64]。

4.4 其他方法

紅外光譜法(IR)可以快速、非破壞性、同時分析多種成分的結構。其原理是利用朗伯比爾定律,通過多糖的特征吸收譜帶強度來對應組分含量。崔潔[65]等人通過此方法分析了通過兩種不同方法提取的山杏果肉可溶性膳食纖維的結構,二者結構相似均可能含有酚類、芳烴類、胺類、醇類化合物。

核磁共振波譜(NMR)是通過原子躍遷共振而進行檢測的方法。NMR操作簡便、樣品用量少、可同步完成復雜樣品的定性定量分析[66]。騰海艷等[67]將單色云芝多糖(CUP)溶于重水,轉入核磁管進行13C核磁共振分析,確定了CUP的四種連接方式。

酶比色法和酶電極法,是利用酶促反應、光化學特征、離子選擇性和專一性的分離分析方法。該方法有高度專一性,只能同時測定單一組分。使用時應注意,受酶的選擇及其反應環境條件對分析結果影響較大[68]。以下列舉了不同多糖的提取、分離純化和分析方法見表2。

表2 不同多糖的提取、分離純化和分析方法Table 2 Extraction,purification and identification methods of diffevent polysclccharides

綜上,不同多糖從提取分離到分析的方法都取得了不同程度的發展,但基于多糖種類和結構的復雜性,針對不同多糖還需要特定的系統研究方法。不同檢測環節中,單一方法往往有其缺點,進而導致結果不理想。所以每個環節應該采用一種以上的方法進行。這樣才能較好保證結果的準確性。雖然如此,仍然可以總結出一些共性的方法或特點，如提取分離主要是要去除多糖中的蛋白、脂類和低分子量小分子物質,所以今后的方法和技術開發應具有特定的針對性。而分析的難度主要是由于不同多糖是由多種單糖以多種連接方式構成。目前來看,核磁方法相比其他方法在這方面似乎有較好的效果。

5 展望

多糖類物質以其重要的生物學活性和取材廣、毒性小等特點,在研究領域,尤其是在制藥行業,將會扮演極其重要的角色。本文從多糖的提取、分離、分析等環節對其常用方法進行論述。

目前,在多糖的提取、分離以及分析前的預處理環節中,更多的是運用酸水解等幾種物理、化學手段的結合,此種方法對樣品有一定的損害且得到的產物復雜尚需進一步處理。但隨著生物技術和酶工程的發展,在未來,通過酶的高度特異性和作用條件相對溫和的特點,或許可以直接在樣品中分離且無損地得到目的產物。

多糖分析方法趨于多樣化,其中色譜法相較于滴定法和比色法有著轉移性更強,準確性更佳等優點成為多糖類物質分析的常用方法。在未來,隨著色譜儀等分析儀器的發展,多種色譜根據不同的需求選擇聯用將成為可能。多糖分析將向著快速、準確、微量化的方向發展。

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