熒光染色法和KOH濕片法在診斷淺部真菌感染中的效果比較

陳卉

淺部皮膚真菌病是一種常見的真菌感染疾病，主要是因人體毛發、表皮、甲等受到真菌侵犯導致的[1]。淺部皮膚真菌病具有很強的傳染性，且病情容易反復發作，容易傳播，引起交叉感染，嚴重影響人類健康安全[2]。目前，臨床主要通過免疫學檢查、分離培養、直接涂片鏡檢等多種方法檢測真菌，其中KOH濕片法因操作簡便、檢測快速等優點是傳統檢測的常用手段，但該種檢測方法敏感性較低，且容易出現主觀錯誤，導致漏診[3]。我院采用熒光染色法診斷真菌感染，結果發現檢測效果良好。為進一步探討分析淺部真菌感染的有效診斷方法，本文對比分析了我院皮膚科門診2018年1—5月收治的60例疑似真菌感染標本，分別采用熒光染色法、KOH濕片法檢測的結果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院皮膚科門診2018年1—5月收治的60例疑似真菌感染標本，60例可疑標本中，感染部位位于手足部20例，體股部22例，頭面部8例，甲部10例。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑 本次采用立特晰－真菌熒光染色液（一步法，安徽德萊康生物醫療科技有限公司），選用的試劑主要包括復染劑、10% KOH溶液（取KOH 10 g溶于100 ml純水中）、熒光素。顯微鏡選擇奧林巴斯CX31普通光學顯微鏡以及萊卡熒光顯微鏡。

1.2.2 取材 采用75%酒精對皮損部位進行消毒，采用鈍頭刀片刮取適量皮損炎性活動性邊緣的皮屑，頭癬取病發及附近鱗屑，趾甲、指甲取近端甲屑。采用酒精消毒后應快速取材，分為兩份，分別放置于載玻片上。

1.2.3 檢測方法 （1）熒光染色法。取一滴染色液滴入標本中，直至覆蓋或淹沒整個標本，靜置幾秒。將蓋玻片蓋上，借助紙巾或者棉簽進行壓片，將多余染液吸走，放置于熒光顯微鏡下進行觀察。（2）KOH濕片法。取一滴10% KOH溶液放置于載玻片上，將蓋玻片蓋上，點燃酒精燈加熱標本使其溶解，放置于光學顯微鏡下觀察。如果標本屬于趾甲、指甲或毛發，應滴入一滴20% KOH溶液。

1.3 觀察指標

對比分析兩種檢測方法的檢出特征，并對比兩種檢測方法對不同部位檢出陽性率。

1.4 統計學分析

本次選擇的統計學處理軟件為SPSS 18.0，檢出陽性率等計數數據通過（n，%）表示，組間數據對比采用χ2檢驗；P＜0.05為差異具有統計學意義。

表1 兩種檢測結果對比（n，%）

2 結果

2.1 兩種檢測方法特征對比

熒光染色后，孢子、菌絲等真菌會被熒光標記，鏡下可觀察到清晰的真菌輪廓，呈亮藍色，可觀察到孢子的出芽形態以及菌絲的典型橫隔結構，便于識別。在熒光顯微鏡下，可觀察到暗黑色的背景、雜質，背景和真菌熒光造成強烈的反差對比。KOH濕片法顯示背景雜亂，真菌與背景反差比較小，且真菌結構不容易進行分辨和判斷。

2.2 兩種檢測結果對比

熒光染色法檢出手足部陽性7例，體股部14例，頭面部6例，甲部7例；KOH濕片法檢出手足部陽性4例，體股部11例，頭面部2例，甲部6例；熒光染色法檢出陽性34例（56.7%），KOH濕片法檢出陽性23例（38.3%），差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

3 討論

KOH是臨床上最早使用的一種直接鏡檢法，不僅操作簡便，且無需特殊儀器[4]。但這種檢測方法缺點明顯，如背景較為雜亂，陽性檢出率較低，漏診率較高，特別體現在甲屑標本上[5]。而且孢子類結構容易和脂滴、氣泡相混淆，導致誤診[6]。熒光染色法中具有特殊的熒光素，可以特異性結合真菌細胞壁上的幾丁質，且具有較高的親和力，只要十幾秒的時間即可完成反應，因此檢測靈敏度較高，反應也較快[7]。熒光顯微鏡設定的激發光波段特定為340～400 nm，在這種條件下，孢子、菌絲會被熒光標記，且呈明亮的藍綠色，黑暗的背景下，真菌輪廓在強烈的反差對比下可清晰顯示，相對KOH濕片法而言，可更加清晰的觀察真菌形態結構，辨識度大大提高。本次實驗研究表明，熒光染色法檢出陽性率高于KOH濕片法，這和陳銳君等[8]研究報道結果（淺部真菌感染患者采用熒光染色法診斷的陽性檢出率高于KOH濕片法）基本相符。但需要注意的是，熒光染色法可對植物纖維素進行標記，玻片、空氣中包含少量纖維，可能在熒光顯微鏡下也會發出熒光，但一般情況下纖維形態不具備規則性，亮度、粗細、大小等也不同，應重點觀察熒光是否具備典型的出芽結構、真菌橫隔。

綜上所述，熒光染色法是一種快速、準確的真菌檢測方法，在具備熒光顯微鏡的條件下，熒光染色法可用于皮膚科對真菌感染進行早期診斷。