大腸癌患者血清HE4、DKK-1水平變化及其意義

魏明，王園園，張興，劉擘，李衛，代擁軍

(河北醫科大學第一醫院，石家莊 050091)

大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，其發病率居惡性腫瘤的第三位[1]。2014年的登記數據顯示，我國大腸癌發病率可達每10萬人中16.14人，病死率更是高達每10萬人中7.55人，均居惡性腫瘤前幾位[2,3]。早期診斷，及時手術治療可以顯著提高大腸癌5年生存率[4]。盡管近年來大腸癌的普查力度不斷加強、手術方式不斷改進、靶向藥物的大力推廣，并取得了一系列的突破，但大腸癌的5年生存率不足60%[5]，仍是公共衛生的關鍵問題，每年造成約608 000例患者死亡。因此，對大腸癌的深入研究尤其對特異度、靈敏度較高的分子學標記物的研究具有很高的臨床價值。目前，大腸癌診斷應用較廣的有CEA、CA19-9等，但靈敏度和特異度均不高。人附睪蛋白4(HE4)是一種酸性蛋白質，主要表達在附睪的遠端上皮細胞和輸精管的上皮細胞，其在卵巢癌、子宮內膜癌、肺癌等惡性腫瘤診斷和預后的監測中有重要價值，而在消化系統腫瘤尤其是大腸癌中的應用鮮有報道。分泌型糖蛋白(DKK-1)是Wnt/β-catenin信號通路的抑制劑，其可以影響腫瘤細胞的生物學行為，通過多種途徑誘導腫瘤細胞凋亡、增殖和遷移，目前已證實其在胃癌、胰腺癌、肝癌等惡性腫瘤的診斷中有重要價值，但在大腸癌中的研究較少。本研究通過檢測大腸癌患者血清HE4、DKK-1水平變化，并分析兩指標與大腸癌臨床病理特征的相關性，另繪制ROC曲線評估其診斷效能，旨在為大腸癌提供一種新的血清學診斷和監測的標志物，從而提高大腸癌的早診率。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月～2016年12月河北醫科大學第一醫院收治的大腸癌的患者135例(觀察組)，男74例，女61例；年齡49～76(62.5±9.4)歲。所有患者均為首次發現，且經病理證實，研究前均未進行任何輔助治療。病變部位：直腸癌78例，結腸癌57例；組織類型：管狀腺癌125例，黏液腺癌10例；浸潤深度：未侵及漿膜16例，侵及漿膜層119例；淋巴結轉移：有73例，無62例；肝轉移：有21例，無114例。另選100例同期體檢健康者作對照(對照組)，男56例，女44例；年齡48～78(64.1±9.3)歲。排除標準：合并其他組織、器官原發性腫瘤；重要臟器功能衰竭。

1.2 血清HE4、DKK-1檢測 所有入選對象均晨起抽取空腹靜脈血4 mL，在離心機中以2 000 r/min離心10 min，其上清并保存于-20 ℃待檢，使用前置于冰上溶解。HE4檢測采用上海將來實業股份有限公司生產的ELISA檢測試劑盒，DKK-1采用美國R&D公司的試劑盒，按照試劑盒說明及檢測系統操作步驟操作，檢測儀器為Beckman Dxi800化學發光分析儀，檢測各孔樣本吸光度值，Excel繪制標準曲線，并計算濃度。

2 結果

2.1 兩組血清HE4、DKK-1水平比較 血清HE4、DKK-1水平比較見表1。

表1 兩組血清HE4、DKK-1水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2 血清HE4、DKK-1水平與大腸癌臨床病理特征的關系 結果見表1，由表1可知血清HE4、DKK-1水平與大腸癌病變部位、組織類型、浸潤深度、淋巴結轉、肝轉移均相關(P均<0.05)。

表2 血清HE4、DKK-1水平與大腸癌臨床病理特征的關系

2.3 大腸癌患者血清HE4、DKK-1水平相關性分析結果 直線相關性分析顯示，大腸癌患者血清HE4、DKK-1水平呈正相關(r=0.452，P<0.05)。

2.4 血清HE4、DKK-1診斷大腸癌的靈敏度和特異度 血清HE4、DKK-1診斷大腸癌ROC曲線下面積分別為0.779、0.890，二者對大腸癌診斷的最佳閾值分別為18.5、22.1 μg/L，血清HE4、DKK-1診斷大腸癌的靈敏度分別為64.6%和69.5%、特異度分別為65.0%和75.39%；兩指標聯合診斷大腸癌的靈敏度和特異度分別為86.1%和87.4%，聯合檢測分別與單獨檢測比較，P均<0.05，詳見圖1。

圖1 血清HE4、DKK-1單獨及聯合診斷大腸癌的ROC

3 討論

大腸癌的發病率和病死率均較高，并且呈上升趨勢[6]。腫瘤血清標志物是一項無創檢查，與影像診斷和病理診斷比較具有簡便、高效、價格低廉的特點。目前，已有大量的血清蛋白被發現與腫瘤有關，其中一部分已應用于臨床診斷，其中與大腸癌有關的血清腫瘤標志物主要有CEA、CA19-9、CA125、CA727、DCD等[7,8]。近年研究多致力于多種標志物的聯合檢測，以提高疾病的診斷率和準確性。陳舒穎等[9]發現，CA199、CA724、CEA聯合檢測診斷大腸癌ROC曲線下面積為0.930，DCD、CA199、CA724、CEA聯合檢測為0.942，均高于各指標單獨使用。HE4基因的cDNA是Kirchhoff等[10]于1991年由附睪的上皮細胞遠端分離發現的，是一種染色體位于20q12-13.1的蛋白酶抑制劑。HE4是一種主要分布于生殖系統上皮的乳清酸性蛋白，全長只有約25 kb，臨床認為其與精子成熟或天然免疫相關[11]，最早被用于婦科卵巢腫物良惡性的判定[12]。HE4檢測對漿液性腫瘤的篩查可達到100%，對子宮內膜腫瘤、透明細胞瘤、黏液性癌等均有很高的靈敏度(72.9%)和特異度(95.0%)[13]。此外，在肝癌、肺癌也發現HE4呈高表達；在胃腫瘤中，也檢測到HE4呈高水平表達。Guo等[14]發現，HE4可以促進胃癌細胞增殖以及腫瘤細胞在組織中的浸潤、生長。許琦華[15]發現，高齡、晚期、伴有淋巴結轉移的胃癌患者HE4水平明顯升高，并且化療效果較低表達者差。本研究顯示，觀察組血清HE4水平高于對照組，且血清HE4水平與大腸癌病變部位、組織類型、浸潤深度、淋巴結轉、肝轉移相關。提示HE4與腫瘤組織來源有關，并且隨著腫瘤發展呈逐漸升高的趨勢。HE4篩查的腫瘤定位性較差[16～18]，但可以作為惡性腫瘤及腫瘤部位、類型、發展程度等的進一步判斷。

DKK-1是一種由滑膜成纖維細胞分泌的糖蛋白，由約266個氨基酸組成，編碼基因Dickkopf位于10號染色體上，約3.5 kb。Dickkopf基因僅在胎盤和間質干細胞中有少量表達，不表達于正常組織。DKK-1是Wnt/β-catenin信號通路的抑制劑，在Xenopus的胚胎發育、細胞分化、組織內穩態中發揮重要作用[19]。DKK-1可以抑制腫瘤基因表達，影響腫瘤細胞的生物學行為，其過度表達可以通過多種途徑誘導腫瘤細胞凋亡、增殖和遷移[20]。臨床研究發現，DKK-1在不同腫瘤細胞中表達水平不同，在某些腫瘤中表達水平增高，比如腎母細胞瘤、原發性肝癌、胰腺癌、肺癌等[21～23]，但在某些腫瘤中反而呈現低表達，如黑色素瘤和胃癌。而且即使是在同一腫瘤類型，DKK-1在不同的細胞中也可能呈現不同的水平[24,25]。研究發現，DKK-1超表達與實體腫瘤生存率相關。文獻[26]報道，DKK-1在胃癌診斷中的特異度和靈敏度均高達100%。DKK-1水平高低與胃癌惡性程度密切相關，在遠處轉移、分期晚的胃癌患者中表達水平更高。本研究顯示，觀察組血清DKK-1水平高于對照組，且血清DKK-1水平與大腸癌病變部位、組織類型、浸潤深度、淋巴結轉、肝轉移相關?？赡苁怯捎谀[瘤增殖激活了DKK-1對Wnt通道的抑制作用，呈現高表達狀態，以抑制腫瘤增生，發揮負反饋調節作用。

本研究還發現，大腸癌患者血清HE4、DKK-1水平呈正相關，血清HE4、DKK-1聯合檢測診斷大腸癌的靈敏度和特異度均高于單項指標，提示HE4、DKK-1聯合檢測可彌補單項指標對大腸癌診斷的不足和漏洞。

總之，大腸癌患者血清HE4、DKK-1水平升高，其水平變化與大腸癌病變部位、組織類型、浸潤深度、淋巴結轉、肝轉移相關，二指標均可作為大腸癌診斷的血清腫瘤標志物，聯合檢測診斷準確性更高。