HPLC—MS/MS法測定蒙藥珠蘇木丸中川楝素的含量

朱艷紅 王明新

【摘 要】 目的：采用HPLC-MS/MS測定珠蘇木丸中川楝素含量的方法。方法：采用WatersXBridge C18色譜柱（2.1mm×100mm，2.5μm），以乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶[KG-*3/5]69）為流動相；質譜使用電噴霧電離源（ESI）負離子模式，多反應檢測（MRM）掃描方式檢測，定性離子對為m/z 573/531和m/z 573/425。結果：川楝素對照品在0.002019～0.030285μg范圍內與兩個峰面積之和具有良好的線性關系（r=0.9998），平均加樣回收率為99.7%，RSD=0.2%（n=6）。結論：該方法穩定、準確性好，可用于珠蘇木丸中川楝素的質量控制。

【關鍵詞】 川楝素；珠蘇木丸；HPLC-MS/MS

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2018）16-0020-02

Abstract：Objective The content of toosendanin in Zhusumu Pill eas determined. Methods The HPLC-MS/MS analysis was performed on a column with octadecylsilance-bonded silica gel as the packing material， eluted with acetonitrile-0.01% formic acid solution （31∶69）. Negative ion mode of electrospray ionization source（ESI） by mass spectrometry， Multi-reaction detection（MRM） scanning method， qualitative ion pair is m/z 573/531 and m/z 573/425. Results There was a good linear relationship between 0.002019～0.030285μg in the injection volume of toosendanin（r=0.9998）， with the average recoveries were 99.7% and the RSD was 0.2%（n=9）. Conclusion The method is stable and accurate.It could be used for the quality control of Zhusumu Pill.

Keywords：Toosendanin；Zhusumu Pill；HPLC-MS/MS

珠蘇木丸是呼倫貝爾市人民醫院制劑，由川楝子、公丁香、建蓮子、紫檀香、水牛角濃縮粉、人工牛黃、麥冬、木香、訶子、川楝子、梔子、甘松十味藥組成的復方制劑。具有清肝熱，除“亞瑪”病，解毒的功效，用于肝熱胸膈，配毒癥，“亞瑪”病，腰腎損傷，尿頻，尿血，尤其對血熱引起的眼病有效。川楝子為該方中主要成份之一，對本方的臨床療效有重要作用，以川楝子中主要有效成分川楝素為定量監控指標可有效地控制產品的質量。本研究采用HPLC-MS/MS法測定其中川楝素的含量，方法穩定、準確性好，可作為質量控制的方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LCMS-8030液相色譜質譜聯用儀（島津公司）。

1.2 材料 川楝素（批號：111842-201503，含量96.8%，中國食品藥品檢定研究院），珠蘇木丸（批號：20171208、20170606、20170612，呼倫貝爾市人民醫院制劑室）。甲醇為色譜純，水為高純水，乙腈為分析純。

2 方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱：WatersXBridge C18柱（100mm×2.1mm，2.5μm）；流動相：乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶69）；進樣量：5μL。

2.2 質譜條件 離子源：電噴霧電離源（ESI）；掃描方式：負離子模式；檢測方式：多反應檢測（MRM）掃描方式檢測；DL溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；載氣流速：3L/min；碎裂電壓：-17.0V；定性離子對為m/z 573/531和m/z 573/425。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取川楝素對照品適量，加甲醇制成每1mL含川楝素0.02019mg/mL，精密量取5mL對照品貯備液，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。

2.3.2 供試品溶液 取珠蘇木丸，研細（過三號篩），取粉末1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 陰性對照溶液 按照珠蘇木丸的制備工藝制備不含川楝子的陰性對照樣品，并按“2.2.2”項下方法制成陰性對照溶液。

2.4 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各5μL進行測定，結果：陰性對照色譜在川楝素兩個峰保留時間處無干擾。結果如圖1所示。

2.5 線性關系考察 精密吸取配制好的對照品溶液1、3、5、7、10、15μL分別進樣。以兩個峰面積之和為縱坐標，以對照品進樣量X（μg）為橫坐標，繪制標準曲線。得回歸方程為Y=55411545.7X-285.89，r=0.9998，川楝素進樣量在0.002019～0.030285μg范圍內線性關系良好。

2.6 精密度試驗 取“2.2.1”項下的對照品溶液5μL，重復進樣6次，測得川楝素兩個峰面積之和平均值為556976.5，RSD為0.5%，表明儀器的精密度良好。

2.7 重復性試驗 取供試品（20171208）珠蘇木丸供試品6份，按“2.2.2”項下方法操作，進行測定含量。結果川楝素含量的平均值（n=6）為57.6μg/g，RSD為0.4%，表明實驗的重復性良好。

2.8 穩定性試驗 取同一批號（20171208）珠蘇木丸供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24h按上述色譜條件測定，測得川楝素峰面積的RSD（n=6）0.8%。結果表明供試品溶液室溫放置24h內穩定。

2.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品約0.8g，共6份，分別精密加入一定量的川楝素對照品溶液，按“2.2.2”項下方法操作，測定含量，并計算回收率。結果見表1。川楝素平均回收率（n=6）為99.7%。

2.10 樣品測定 取珠蘇木丸，按上述供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜測定，結果見表2。

3 討論

參考《中國藥典》2015年版一部川楝子的含量測定方法中的樣品提取及色譜條件對珠蘇木丸中川楝素進行分析，運用HPLC-MS/MS尋找出定量離子進行含量測定，此方法樣品前處理簡單、回收率高、專性強，可作為珠蘇木丸的質量標準，能夠有效控制樣品的質量。

參考文獻

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（收稿日期：2018-06-06 編輯：程鵬飛）