不同溶劑對柴胡中柴胡皂苷ａ溶出效果的影響

姜華 李軍 徐強 申屠平安

【摘 要】目的：基于目前柴胡提取溶劑無一定論的現狀，考察并確定柴胡的最佳提取溶劑。方法：采用高效液相色譜法測定不同溶劑對藥材中柴胡皂苷a的提取量。結果：中性乙醇-水溶劑系統中，50%乙醇對柴胡皂苷a的提取效率最高，堿性乙醇-水溶劑系統中，堿性50%乙醇的效果較好，且效果優于50%乙醇。結論：當提取的目的僅是柴胡皂苷a時，用堿性50%乙醇作為提取溶劑，其他情況，建議采用50%乙醇作為柴胡的提取溶劑。

【關鍵詞】柴胡;柴胡皂苷a;高效液相色譜法

【中圖分類號】R917 【文獻標志碼】A【文章編號】1007-8517（2019）5-0023-04

柴胡是傘形科柴胡屬植物的干燥根，為常用中藥，具有解熱鎮痛、利膽保肝的作用。柴胡皂苷a是柴胡藥材的主要有效成分，是含有柴胡類中成藥質量標準中重要的檢測指標。在目前的中成藥質量標準評價體系下，提高藥材中柴胡皂苷a的溶出度無疑是提取工藝研究的重點，其中溶劑種類的選擇尤為重要。目前有文獻對柴胡的提取溶劑進行優選，然而得出的結論卻差異較大，有高濃度的乙醇，如70%乙醇[1-2]，有堿性高濃度乙醇，如含5%氨水的95%乙醇[3]，亦有常規提取溶劑水[4]?？梢?，從已有的相關文獻判斷，并不能得到明晰的結論，這種狀況無法對相應的科研和生產起指導作用?；诖?，本文以藥材中柴胡皂苷a的溶出度為指標，對不同溶劑對藥材中柴胡皂苷a溶出效果進行考察，為合理選用柴胡的提取溶劑奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 600-2487高效液相色譜儀;RE-52AA旋轉蒸發儀（鄭州長城科工貿）;KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;METTLER-AE240型電子分析天平。

1.2 試藥 柴胡藥材購自洛陽關林藥材市場，經河南科技大學尹衛平教授鑒定為北柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根;柴胡皂苷a（自制，面積歸一化法測定其純度高于98%）;乙腈（DIKMA公司，色譜純），重蒸水自制，大孔樹脂（天津南開大學化工廠），其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取柴胡皂苷a 2.2mg，置于10mL量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，經0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.2 供試品溶液的制備[5] 稱取柴胡藥材10份，每份20g，分別用水、30%、50%、70%、95%乙醇和5%NaOH水溶液、5%NaOH-30%乙醇、5%NaOH-50%乙醇、5%NaOH-70%乙醇、5%NaOH-95%乙醇進行提取。提取方式為10倍量溶劑，提取3次，每次1h。提取完畢后，將所得提取液合并，回收溶劑，真空干燥，得相應浸膏。

分別稱取相當于0.4g生藥的浸膏（以水為提取溶劑的樣品取相當于2g生藥浸膏），加水溶解后，于AB-8型大孔吸附樹脂（內徑1.2cm，柱長9cm）上樣，先用0.5mol/LNaOH 80mL洗脫，棄去;然后用水洗脫至中性（約40mL）;再用30%乙醇30mL洗脫，棄去;最后用95%乙醇100mL洗脫，搜集95%乙醇洗脫部分，水浴蒸干，用50%乙醇溶解轉至10mL量瓶中，用0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

2.3 色譜條件 Hypersil-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）;流動相：（見表1）;流速：1.0mL/min;柱溫：35℃;檢測波長：210nm;進樣量：10.0μL。各樣品及標準品的HPLC色譜圖見圖1。

2.4 線性關系 考察分別精密吸取柴胡皂苷a對照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL注入液相色譜儀，依“2.3”項下色譜條件分析并測定峰面積。以峰面積（A×10-6）與進樣量（X）進行線性回歸，得柴胡皂苷a的回歸方程為A =3.371X -0.0271（r = 0.9998）。結果表明，柴胡皂苷a在0.55～3.3μg范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。如圖2。

2.5 精密度試驗 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的樣品溶液10.0μL，注入液相色譜儀，連續進樣5次，測定峰面積。結果顯示柴胡皂苷a的峰面積RSD為 1.51%，說明精密度良好。

2.6 穩定性試驗 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的樣品溶液10.0μL，分別于0、2、5、10、12h注入液相色譜儀，依法測定柴胡皂苷a的峰面積。結果顯示柴胡皂苷a峰面積的RSD為1.83%，表明樣品在12h內基本穩定。

2.7 重復性試驗 精密稱取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的柴胡提取物5份，每份浸膏折合生藥材0.4g，依法富集其中的柴胡皂苷a并測定含量。結果顯示，以5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑從20g柴胡藥材中提取得到柴胡皂苷a的含量為97.5mg，RSD為2.10%。

2.8 回收率試驗 精密稱取已測知含量的5%NaOH-30%乙醇作為提取溶劑的柴胡提取物5份，每份折合生藥材0.2g，加入適量對照品溶液，按樣品溶液的制備方法處理，并依法測定，計算柴胡皂苷a的回收率。結果見表2。

2.9 樣品測定 按照“2.3”項下柴胡皂苷a的分析方法對各樣品進行測定，并計算折合20g柴胡生藥中柴胡皂苷a溶出量。結果見表3。

3 討論

3.1 溶劑中堿濃度的確定 柴胡皂苷a結構中的環氧醚環不穩定，在提取過程中易發生開裂，造成結構轉化[6]，降低提取液中柴胡皂苷a的含量，而堿性溶劑可以抑制該過程的發生。因此，本文在考察提取溶劑的種類時增加了不同濃度的堿性乙醇，同時確定提取溶劑中氫氧化鈉的濃度為5%，因為在該濃度下可以很好的抑制柴胡皂苷a的結構轉化。

3.2 提取方式的確定 柴胡中的有效成分包括揮發油和皂苷兩大類成分[7]，前者提取采用水蒸氣蒸餾法，后者以溶劑法為主。本文主要優化皂苷的提取，并不涉及揮發油。有文獻[3，8]采用先提取柴胡揮發油，再提取藥渣中的皂苷的方式提取柴胡，以達到對柴胡的充分利用，但是這種提取方式在提取揮發油的過程中已經有部分柴胡皂苷a發生結構轉化，換句話說這種提取方式在顧忌了揮發油的同時損失了柴胡皂苷a的提取率。

3.3 提取溶劑種類的確定 由表3的測定結果可知，對于不同濃度的中性乙醇水溶劑系統，50%和70%的乙醇對柴胡皂苷a的溶出度較高，其次是30%的乙醇，再次是95%的乙醇，溶出度最差的是水溶液?？紤]到成本的因素，50%乙醇是中性溶劑系統中對柴胡皂苷a溶出度最佳的溶劑。對于不同濃度堿性乙醇，同樣50%的堿性乙醇表現出了對柴胡皂苷a的良好溶出能力，且比中性50%乙醇的溶出量高近30%?？梢?，堿性50%乙醇對柴胡皂苷a的溶出能力最強。然而，實際生產中，柴胡往往是與其他藥材一同進行提取，如果采用堿性50%乙醇作為提取溶劑，那么在提高了柴胡皂苷a溶出度的同時，堿性環境極有可能對其他成分造成破壞，此時50%乙醇應作為首選提取溶劑，而只有當提取的目的僅僅是柴胡皂苷a時，可選用堿性50%乙醇作為提取溶劑。

中醫臨床用藥的主要形式是煎劑，作為煎劑的提取溶媒水在表3中顯示出對柴胡皂苷a較低的溶出度，由于中藥發揮作用的機理是多成分、多靶點起效，因而據此判斷水不宜作為柴胡的提取溶劑是不可取的，該方面還有待進一步的深入研究。本文通過系統地考察提取溶劑對柴胡皂苷a溶出度的影響，為進一步規范柴胡的提取工藝提供參考。

參考文獻

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（收稿日期：2018-12-25 編輯：劉斌）