臨床病理診斷中顯示彈性纖維的Gomori醛品紅法優于地衣紅法

連家燕，謝文林

（中山大學附屬第七醫院病理科，深圳 518107）

彈性纖維（elastic fibers, EFs）廣泛分布于全身各處，在肺泡壁、動脈壁和皮膚尤其豐富。在HE 染色中，彈性纖維和膠原纖維都呈紅色，量少時兩者較難區別。彈性纖維染色可用于多種疾病的診斷，如：觀察動脈粥樣硬化動脈壁的改變以診斷心血管疾病，鑒別肌上皮瘤與涎腺多形性腺瘤，診斷皮膚彈力纖維病變等[1]。同時，彈性纖維也是肺泡及支氣管的構成骨架，與肺癌的生長、分化、轉移及預后均有極為密切的關系[2]。常用的彈性纖維染色方法很多，各有其優、缺點。本文采用常用的Gomori醛品紅和地衣紅兩種染色方法對皮膚、肺和血管組織進行對比染色觀察，以篩選出更有利于臨床病理診斷的彈性纖維染色方法。

材料與方法

1 材料

收集中山大學附屬第七醫院2018年1月－12月來源于皮膚、肺和血管的含有彈性纖維的組織石蠟標本90例，全部組織均用4%中性緩沖福爾馬林溶液固定（pH=7.0），常規脫水、透明、包埋及切片。每個組織均連續切取2張片，切片厚度均為4～5μm。

2 試劑配制

醛品紅溶液：0.5g堿性品紅溶于100ml 70%乙醇中，再慢慢加入1ml濃鹽酸和1ml三聚乙醛，緊塞瓶蓋，輕輕搖勻混合，室溫下放置約1～2d（冬季約4～5d）。觀察溶液轉變為深紫色，此時醛品紅液成熟，可過濾于小口砂塞瓶，于4℃冰箱保存備用。

桔黃G液：2g桔黃G、5g磷鎢酸溶于100ml蒸餾水，搖勻混合，4℃冰箱保存。

酸化高錳酸鉀水溶液：A液—0.5g高錳酸鉀溶于100mL蒸餾水，混勻傾入棕色瓶，置4℃冰箱保存；B液—0.5ml硫酸溶液慢慢滴入99.5ml蒸餾水中，慢慢搖勻，切勿大力搖動，保存于玻璃瓶，4℃冰箱保存。A、B兩液分瓶存放，臨用前分別取等量混合使用。

2%草酸溶液：2g草酸溶于100ml蒸餾水，4℃冰箱保存備用。

地衣紅酒精液：地衣紅1g+70%酒精100ml+濃鹽酸1ml，先將地衣紅溶于70%酒精，然后慢慢滴入濃鹽酸，放置1～2d后即可使用。

3 Gomori醛品紅染色法

常規石蠟切片5μm厚，脫蠟至水，流水沖洗5min，蒸餾水沖洗1min；酸化高錳酸鉀氧化5min，蒸餾水洗1min；2%草酸漂白1min， 蒸餾水洗1min；70%酒精稍洗1min；然后于組織中滴入醛品紅液染5～10min左右， 70%酒精反復洗滌3次，每次約20s，顯微鏡下觀察切片不再脫色，背景對比清晰鮮明為止；最后用橙黃G液滴染約2min，快速水洗，脫水、透明、封片。

4 地衣紅染色法

常規石蠟切片5μm厚， 脫蠟至70%酒精；入地衣紅酒精液染2.5～3h；反復用70%酒精洗滌數次，顯微鏡下觀察至切片不再脫色，背景清晰鮮明為止；Mayer蘇木素復染，流水沖洗返藍10min，脫水、透明、封片。

圖1 皮膚彈性纖維Gomori醛品紅染色（A）和地衣紅染色（B）。比例尺，50μmFig. 1 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the skin. Scale bar, 50μm

圖2 肺中彈性纖維Gomori醛品紅染色（A）和地衣紅染色（B）。比例尺，50μmFig. 2 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the lung. Scale bar, 50μm

結 果

Gomori醛品紅染色法結果顯示，在皮膚（圖1A）、肺（圖2A）和血管（圖3A）組織中的彈性纖維均清晰可見，彈性纖維呈深紫色，背景色為不同程度的黃色，二者對比明顯。

地衣紅染色法結果顯示，在皮膚（圖1B）、肺（圖2B）和血管（圖3B）組織中的彈性纖維呈深棕紅色，背景色為不同程度的淡紅色，二者反差相對較小，區分度不如Gomori醛品紅染色法明顯。

圖3 血管中彈性纖維Gomori醛品紅染色（A）和地衣紅染色（B）。比例尺，50μmFig. 3 Gomori’s aldehyde-fuchsin staining (A) and orcein staining (B) of elastic fibers in the blood vessels. Scale bar, 50μm

討 論

彈性纖維是由集合成束的彈性微纖維和均質狀的彈性蛋白組成的，彈性蛋白賦予彈性纖維彈性。在新鮮標本中，彈性纖維呈黃色發亮的細線條狀；在HE染色下，組織細胞核呈藍色，胞質、紅細胞和膠原纖維等呈不同程度的粉紅色，彈性纖維也被染成粉紅色，導致在顯微鏡下很難區分到底哪些是彈性纖維，哪些是膠原纖維，不利于臨床診斷。同時彈性纖維在肺腺癌、慢性支氣管炎、動脈粥樣硬化等病理狀態下發生改變，由于增生、斷裂而排列紊亂，更加導致對彈性纖維的辨認難度增加[3]。

彈性纖維的特殊染色方法有多種，Gomori醛品紅染色和地衣紅染色這兩種方法都能顯示彈性纖維，但它們也各有優缺點。地衣紅染色時，不僅染色時間長，一般需要3h，而且70%酒精分化后，對比效果相對較差，在顯微鏡下觀察分化效果時，背景中的紅細胞、細胞核、平滑肌和膠原纖維也染上了色，背景脫色效果較差，彈性纖維與背景的區分度相對較差，容易影響結果判斷，尤其是含出血、膠原纖維多的組織不易觀察彈性纖維。醛品紅染色時，染色時間短，一般需要10min，著色鮮艷、清晰，對比效果相對較好，染色結果比較穩定，特別在顯示肺組織肺膜彈性纖維時非常清晰，對比度相對較好。Travis等［4］報道癌組織破壞臟層胸膜彈性層才能視為侵犯臟層胸膜，建議HE切片難以評價時，應加做彈性纖維染色進一步明確診斷。因此清晰地顯示臟層胸膜對于臨床診斷至關重要。

醛品紅染色具有較好的染色效果，但也需要注意一些細節問題。首先，醛品紅染色的關鍵是醛品紅液的配制，配制好的醛品紅液需要靜置4～5d，待變為深紫色即為成熟方可使用，此液可保存3-6月，如染液時間過長，則染色時間要加長，但選染能力下降，會出現共染現象。其次，彈性纖維經強氧化劑酸性高錳酸鉀氧化后，對于醛品紅的親和性大為增加，染色鮮艷，對比清晰，效果明顯。根據筆者多年來的經驗，在皮膚彈性纖維染色中，彈性纖維的形態是單條狀，鏡下不容易觀察，彈性纖維經過氧化后著色鮮艷、清晰，對比度較好，但在臟層胸膜、動脈彈性纖維染色中，彈性纖維的形態是膜樣結構，鏡下容易觀察，經過氧化后的彈性纖維和背景分別染為深紫色和淺紫色，對比不夠鮮明。因此，經過反復優化，對于不同的組織我們采用不同的前處理方法，皮膚組織需經酸性高錳酸鉀氧化、草酸漂白，而動脈、臟層胸膜組織可不經酸性高錳酸鉀氧化、草酸漂白，可取得更佳的染色效果。另外，切片浸入70%酒精分化時，必須在顯微鏡下控制分化效果，時間不宜太久，否則彈性纖維著色較淡。

綜上所述，兩種特殊染色方法均可用于檢測組織的彈性纖維，但Gomori醛品紅染色法具有顏色鮮艷，對比明顯，結構清晰，更容易觀察等優點，是優選的彈性纖維染色方法；同時，此方法可以縮短彈性纖維染色時間，提高彈性纖維染色效率，節省彈性纖維染色成本，值得在臨床病理中推廣，能夠為臨床病理工作提供一種觀察彈性纖維的好方法。