八楞麻飲片質量標準研究

蔣健　曹玉　王貞媛　蔣小文

【摘 要】 目的：制定八楞麻飲片的質量標準。方法：參照《中國藥典》2015年版相關方法，對八楞麻的性狀、顯微特征、薄層色譜、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物進行研究;采用高效液相色譜法測定槲皮素含量。結果：薄層色譜斑點清晰，分離好，專屬性強;八楞麻水分不得過14.0%，總灰分不得過10.0%，酸不溶性灰分不得過1.5%，浸出物不得少于6.0%，槲皮素平均含量為0.01805%。結論：根據實驗結果建立了八楞麻飲片的質量標準，可用于八楞麻的質量控制。

【關鍵詞】 八楞麻;質量標準;高效液相色譜法;槲皮素

【中圖分類號】R282 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2020）23-0040-04

Establishing Quality Standard of Saussureae Japonicae Herba

JIANG Jian CAO Yu WANG Zhenyuan JIANG Xiaowen

Nanjing Institute for Food and Drug Control， Nanjing 211122， China

Abstract：Objective To establish the quality standard of Saussureae Japonicae Herba.Methods Identification through microscope and TLC（thin-layer chromatography）， and determination of moisture， total ash， acid-insoluble ash， extract and content of quercetin were conducted to investigate the quality.Results TLC spots were clear， well-separated without interference and had a strong specificity. The moisture of Saussureae Japonicae Herba should be less than 14.0%， the total ash should be less than 10.0%， the acid-insoluble ash should be less than 1.5%， the alcoholic extract should be more than 6.0%. The average content of quercetin determined by HPLC（high performance liquid chromatography） was 0.01805%.Conclusion The quality standard of Saussureae Japonicae Herba was conformed to the state requirements of traditional Chinese medicinal examination， it can be used for quality control of Saussureae Japonicae Herba.

Keywords：Saussureae Japonicae Herba; Quality Standard; HPLC; Quercetin

八楞木又名八楞麻，青竹標，八面風，三棱草，為菊科植物風毛菊Saussurea japonica （Thunb.） DC. 的干燥地上部分，生于海拔1000～1800m的山坡草地、山谷草地或山腳路旁。分布于全國各地[1]。八楞麻飲片收載于《江蘇省中藥飲片炮制規范》2002年版，性辛、苦，平，具有祛風活血功效，用于風濕痹痛、跌撲損傷、麻風[2]。原質量標準僅有性狀鑒別，無法有效控制飲片質量。本實驗建立八楞麻飲片的性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物方法，研究了含量測定方法，為進一步提高飲片質量標準提供依據。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Olympus DP-12 顯微數碼攝影系統;CAMAG REPROSTAR 3 薄層成像系統（瑞士CAMAG公司）;KQ-250B 型超聲清洗機（昆山超聲儀器有限公司）;SHIMADZU LC-20AB 高效液相色譜儀;DiKMA Silversil C18（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱;HH-4 數顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）;XS205 型天平（Mettler ToleDo公司）

1.2 試藥 默克產硅膠G預制薄層板、青島海洋化工廠產硅膠G預制薄層板;八楞麻對照藥材（自制）;槲皮素對照品（批號：100081-201610，含量99.1%，105℃干燥2 h后使用。）購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

八楞麻飲片均購自亳州藥材市場，來源于廣西、湖北，經江蘇省中藥飲片炮制規范修訂專家組鑒定為風毛菊Saussurea japonica （Thunb.） DC. 干燥地上部分。見表1。

2 方法與結果

2.1 藥材性狀 本品為不規則的短段。莖、葉混合。莖圓柱形，具縱棱，有疏生腺點及細毛，切面類白色，有髓;葉多卷縮破碎，暗綠色，兩面有腺點及細毛。氣微，味苦。

2.2 顯微特征 本品粉末棕色。非腺毛多見，常斷裂，單細胞或多細胞，表面光滑或微波狀，長約50～300μm。導管多為螺紋、網紋、梯紋及具緣紋孔導管。氣孔不定式。分泌細胞含油滴。葉薄壁細胞含草酸鈣簇晶，直徑10～20 μm。纖維壁厚，多斷裂，有點狀紋孔。顯微如圖1所示。

2.3 薄層色譜鑒別 取本品粉末1g，加甲醇10mL，超聲處理30min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取八楞麻對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部 通則0502）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-丁酮（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰，置日光及紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點和熒光斑點。薄層色譜如圖2所示。

2.4 水分測定照《中國藥典》2015年版四部（通則0832水分測定法 第二法），測定五批樣品，平均測定值為10.09%。根據《中國藥典》2015年版四部（通則0212 藥材和飲片檢定通則），除另有規定外，飲片水分通常不得過13%，故規定水分不得過13.0%。結果見表2。

2.5 灰分測定 照《中國藥典》2015年版四部（通則2302 灰分測定法），依法測定五批樣品，平均測定值為7.26%。以平均測定值的120%設限，為8.7%，故規定總灰分不得過9.0%。結果見表2。

酸不溶性灰分? 照《中國藥典》2015年版四部（通則2302 灰分測定），法依法測定五批樣品，平均測定值為0.71%，由于數據離散度大，故規定酸不溶性灰分不得過1.5%。結果見表2。

2.6 浸出物測定 照《中國藥典》2015年版四部（通則2201浸出物測定法），采用熱浸法，以75%乙醇為溶劑，測定浸出物。測定五批樣品，平均測定值為9.53%，由于數據離散度大，以平均測定值的70%設限，故規定浸出物不得少于6.0%。結果見表2。

2.7 槲皮素含量測定

2.7.1 色譜條件 色譜柱：DiKMA Silversil C18（150mm×4.6mm，5μm）;流動相：甲醇-0.4%磷酸（40∶60）;流速：1.0mL;柱溫：35℃;檢測波長：370nm;進樣量：10μL。

2.7.2 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品10.20mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.7.3 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末（過二號篩）2g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，加熱回流30min，放冷，濾過，取續濾液10mL，置錐形瓶中，加鹽酸溶液（15→37）5mL，搖勻，置90℃水浴中加熱水解30min，立即冷卻，轉移至25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.7.4 線性關系考察 精密吸取2.7.2項下對照品貯備液適量，制成槲皮素濃度分別為1.011、2.022、5.054、10.11、20.22、50.54、101.1μg·mL-1的對照品溶液，分別進樣10μL，記錄峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程為：Y=4.289×104X-1.200×104，r=1.000。結果表明，槲皮素對照品濃度在1.011～101.1μg·mL-1范圍內呈現良好的線性關系。

2.7.5 精密度試驗 精密吸取2.7.4項下濃度為10.11μg·mL-1的對照品溶液10μL，連續進樣6次，對照品溶液峰面積的RSD為0.59%，表明精密度良好。

2.7.6 穩定性試驗 取同一批供試品（編號05）溶液，分別于0、3、6、12、24h進樣10μL，按2.7.1項下色譜條件測定，峰面積的RSD為0.67%。表明供試品溶液在24h內穩定。

2.7.7 重復性試驗 取同一批供試品（編號05），按2.7.3供試品溶液制備方法平行制備6份，按2.7.1項下色譜條件測定，計算槲皮素的含量，RSD為0.55%，表明重復性良好。

2.7.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的八楞麻樣品（編號05）9份，每份1.0g，置錐形瓶中，按低、中、高濃度分別精密加入對照品貯備液1.7mL、3.4mL、5.1mL，精密補足甲醇至25mL，照2.7.3項下方法制備供試品溶液，按2.7.1項下色譜條件測定 計算加樣回收率，結果平均回收率為98.14%，RSD為1.61%。結果見表3。

2.7.9 樣品測定 按2.7.3項下方法制備供試品溶液，按2.7.1項下色譜條件，對五批樣品進行測定，結果按干燥品計算，槲皮素含量分別為0.02337%、0.003590%、0.01436%、0.01446%、0.03448%，平均值為0.01805%。由于樣品批次少，含量測定結果離散性較大，故暫未收入標準，本試驗為含量測定進一步研究提供參考。圖譜如圖3所示，結果見表4。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別 在本實驗研究中，對不同溶劑[甲醇、石油醚（60～90℃）、環己烷、乙酸乙酯]提取進行考察，結果顯示甲醇提取簡單方便，效果佳。經考察，供試品溶液在24h內點樣，色譜圖斑點清晰，重現性好。對不同薄層板（默克產硅膠G預制薄層板、青島海洋化工廠產硅膠G預制薄層板）、不同展開系統[參考其他菊科來源飲片：環己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上層液、三氯甲烷-環己烷（5∶1）（木香）[3]62;環己烷-丁酮（4∶1）（漏蘆）[3]370;石油醚（60～90℃）-丙酮（9∶2）（蒼術）[3]161]進行實驗，結果表明，本方法展開劑配制簡單方便，薄層色譜斑點清晰豐富、分離效果好。本實驗還針對不同溫、濕度（t：4℃，RH：45%;t：30℃，RH：45%;t：18℃，RH：18%;t：18℃，RH：72%）等薄層條件進行了考察，結果表明，本薄層色譜實驗耐用性好。

3.2 浸出物測定 分別采用不同浸出方法（冷浸法、熱浸法）進行比較，不同浸出溶劑（水、稀乙醇、75%乙醇、乙醇）進行比較，結果采用熱浸法，以75%乙醇為溶劑，測定浸出物。測定5批樣品，平均測定值為9.53%，由于數據離散度大，以平均測定值的70%設限，故規定浸出物不得少于6.0%。

3.3 含量測定 八楞麻地上部分含揮發油、內酯、黃酮類、三萜類、木脂素等，具有抗炎、抗變作用[4]。八楞麻飲片用法為水煎（內服：煎湯，9～15 g;外用適量，煎水洗患處）[2]，因此考慮活性成分為水煎后較穩定的成分，故擬定黃酮類為含量測定指標。八楞麻含槲皮素-3-O-（6″-巴豆油?；?β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-（6″-巴豆油?；?β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷等黃酮類[4]，甲醇提取物經酸水解后可得槲皮素和山柰素，經試驗發現槲皮素含量較高，可用于含量測定。槲皮素對照品紫外光譜顯示最大吸收為370nm，因此確定吸收波長為370nm。參考《中國藥典》2015年版一部紅花[3]151、金錢草[3]219含量測定項下槲皮素、山柰素提取方法，結果加鹽酸溶液（15→37）5mL水解效果更優，因此確定本試驗提取方法。同時考察了甲醇-水（40∶60）和甲醇-0.4%磷酸（40∶60）兩個系統，二者差別不大，但甲醇-0.4%磷酸（40∶60）系統下槲皮素峰響應值更高，故以此為流動相。

4 結論

八楞麻為江蘇地區使用藥材，收載于《江蘇省中藥飲片炮制規范》2002年版，原質量標準僅有性狀鑒別。本實驗參照《中國藥典》2015年版相關方法，對五批八楞麻飲片開展了性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分檢查、灰分檢查、浸出物測定等研究，結果表明該試驗簡便高效，重復性好，可操作性強，提高后的標準可用于八楞麻飲片的質量控制。本實驗建立了高效液相色譜法測定八楞麻中槲皮素含量的方法，為八楞麻質量標準的進一步提高提供一定的科學依據。

參考文獻

[1]國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草（第7冊）[M].上海：上?？茖W技術出版社，1999：930.

[2]江蘇省藥品監督管理局.江蘇省中藥飲片炮制規范[S].南京：江蘇科學技術出版社，2002：223.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：62，370，161，151，219.

[4]南京中醫藥大學.中藥大辭典（下冊）[M].2版.上海：上?？茖W技術出版社，2006：31.

（收稿日期：2020-06-07 編輯：劉斌）

作者簡介：蔣?。?982- ），女，漢族，本科，主管中藥師，研究方向為中藥分析。E-mail：jiangjane1982@sina.com