重組禽流感病毒（H5+H7）三價滅活苗的免疫效果評估

吳蕾

摘 ?要：為評估新型重組禽流感（H5+H7）三價滅活苗對父母代種雞場的免疫效果，選擇了五家公司的禽流感三價滅活苗產品，分別免疫9日齡的SPF雞，并以廠家進行分組（分別是A、B、C、D、E組），對照組為F組;采集免疫前后血清，檢測 H5N1（Re-11、Re-12、Re-8）和H7N9（H7-Re2、H7-Re1）抗體效價，分析不同公司疫苗產品在雞上抗體的消長規律。結果表明，對照組雞血清H5N1（Re-11和Re-12）和H7N9（H7-Re2）的HI抗體均為0;免疫1周后所有免疫組雞的禽流感抗體開始上升，4周左右抗體效價達到高峰;產生抗H5N1（Re-11）的HI抗體最好的是A組;產生抗H5N1（Re-12）的HI抗體最好的是D組;產生抗H7N9（H7-Re2）的HI抗體最好的是E組;不同廠家禽流感三價苗產生禽流感抗體效價差異不顯著。三價滅活苗同時可以產生抗H5N1（Re-8）和H7N9（H7-Re1）的有效抗體。本研究對雞場免疫禽流感三價滅活疫苗提供數據支持。

關鍵詞：禽流感;H5+H7三價滅活苗;免疫效果評估

中圖分類號：S858.312.5 ? ? 文獻標識碼：B ? ? 文章編號：1673-1085（2020）4-0015-05

高致病性禽流感是一種重要的人獸共患傳染病，被世界衛生組織列為一類動物疫病[1]。2013年開始發現的 H7N9流感病毒對禽類表現為低致病性，感染禽類后并無明顯臨床癥狀;抗原不斷變異是禽流感病毒最顯著的特點，2017年5月12日我國農業部首次報道了一起家禽H7N9流感疫情，引起發病的H7N9流行毒株具有典型的高致病性禽流感分子特征，對禽類表現為高致病性，臨床癥狀與H5亞型高致病性禽流感類似，死亡率較高[2]。為有效防控H7N9亞型禽流感，2017年7月農業部發布關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知，要求從2017年秋季開始對全國家禽全面開展H7N9禽流感疫苗的免疫[3]。

許多養殖場由于規?；潭鹊突蛘咂渌虻南拗?，沒有自己的實驗室，對所使用的疫苗免疫效果不了解或者免疫程序不合理，導致免疫后仍不能產生有效的抗體保護家禽。選擇合適的疫苗和合理免疫程序對有效防控禽流感具有重要的意義，本實驗選擇了5家公司最新生產的H5+H7三價滅活苗免疫SPF雞，通過檢測H5N1（Re-11和Re-12）和H7N9（H7-Re2）的抗體效價和CV%值來評估免疫效果，并且根據實驗結果篩選最合適的重組禽流感（H5+H7）三價滅活苗。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗動物、疫苗 ?SPF雞由山東省農業科學院家禽研究所SPF雞場提供，試驗場所為山東省農業科學院實驗動物房，試驗在SPF負壓隔離器中進行。

抗原H5N1（Re-11）株、H5N1（Re-12）株H5N1（Re-8）株、H7N9（H7-Re2）株和H7N9（H7-Re1）株及對應的陽性血清均由哈爾濱獸醫研究所提供。禽流感H5+H7三價滅活苗產品信息見表1。

1.2 ?試驗分組 ?90只9日齡SPF雞隨機分為6組，每組15只。設5個試驗組，分別對應5個疫苗廠家（A、B、C、D、E），頸部皮下注射，每只0.3mL;1個對照組，免疫等量PBS。分別在免疫后1、2、3、4周對各組別雞進行采血。

1.3 ?試驗方法 ?HA和HI 檢測方法根據國家標準（GB/T-18936-2003）進行。

2 ?結果與分析

2.1 ?H5N1（Re-11）株抗體檢測結果 ?在9日齡首次免疫后1周，雞體產生的抗H5N1（Re-11）的抗體效價開始上升，免疫后2周抗體檢測合格率100%，免疫后4周抗體效價達到高峰。高峰時抗體效價最高（A組）和最低（C組）相差1.04log2個滴度。B組抗原變異系數最?。–V值最低），與變異系數相對較高的C組相比，CV降低了2.95%。F組抗體效價均為0log2（表2）。

2.2 ?H5N1（Re-12）株抗體檢測結果 ?免疫后1周，抗H5N1（Re-12）的禽流感抗體開始上升，免疫后2周，除A組和B組外，其余組采集的血清樣品均合格，免疫后4周抗體達到高峰。高峰時抗體最高的D組和抗體最低的A組相差1.19log2個滴度。CV值最好的E組比相對較差的A組低了5.37%。F組抗體值均為0log2（表3）。

2.3 ?H5N1（Re-8株）抗體檢測結果 ?免疫后2周，抗H5N1（Re-8株）的禽流感抗體開始上升，免疫后4周各個試驗組血清抗體值在5log2和6log2之間。F組抗體值均為0log2（表4）。

2.4 ?H7N9（H7-Re2）抗體檢測結果 ?免疫后1周，抗H7N9（H7-Re2）禽流感抗體開始上升，免疫后3周抗體檢測合格率100%，免疫后4周抗體達到高峰。高峰時抗體效價最高的C組和E組比最低的D組高了1.52log2個滴度，C組的CV值，較E組的低了0.86%，比相對較差的B組低了3.49%。F組抗體值均為0log2（表5）。

2.5 ?H7N9（H7-Re1）抗體檢測結果 ?與H7N9（Re-2）抗體產生結果相似，免疫后3周抗H7N9（H7-Re1）抗體檢測合格率均達100%，4周抗體達到高峰。高峰時抗體效價最高的A組比最低的D組高了1.04log2個滴度，A組和E組抗體效價差異不顯著，比其高了0.35log2滴度，E組的CV值最低，比A組低了3.79%。F組抗體值均為0log2（表6）。

3 ?討論

2017年以來H7N9流感變異毒株給我國家禽養殖業帶來了嚴重的影響和經濟損失[2、4]。國內外禽流感防控實踐表明，疫苗免疫是防治禽流感的關鍵措施之一[5-7]。

本試驗中，從免疫后產生的抗體來看，5個廠家H5+H7三價滅活苗差異不顯著，都符合規定。

本試驗還檢測了H5N1（Re-8）和H7N9（H7-Re1）的抗體效價，見表4和表6。盡管H5+H7三價滅活苗不含有H5N1（Re-8）疫苗株，但是免疫后4周，產生的抗H5N1（Re-8）的抗體效價也能達到5log2和6log2之間，這表明H5+H7三價滅活苗對市場上的H5N1（Re-8）禽流感也有一定的保護效果。

同樣免疫后，檢測到抗H7N9（H7-Re1）抗體結果和抗H7N9（H7-Re2）的結果相似，抗體效價最高達到了9.42log2，見表6。這表明5個廠家H5+H7三價滅活苗盡管不含有H7N9（H7-Re1）疫苗株，對H7N9（H7-Re1）毒株同樣具有很好的防控效果。

重組禽流感 H5+H7三價疫苗中因不同廠家疫苗抗原含量、生產工藝、免疫佐劑以及保存運輸等方面的原因，會導致疫苗質量存在一些差異，從而造成免疫后H5和H7亞型免疫抗體水平差異。因此，免疫前后持續的抗體檢測是當前高致病性禽流感免疫防控工作中的重要環節。另外，由于AIV等病毒抗原變異持續發生，定期開展家禽重大疫病的流行病學調查和疫苗的免疫效果評估具有重要的臨床指導意義。

參考文獻：

[1] ?Chen Hua-lan.H5N1 avian influenza in China [J]. Sci China Life Sci， 2009，52（5）：419-427.

[2] ?田國彬.禽流感流行現狀與防控措施[J].獸醫導刊，2017（17） ：8-11.

[3] ?農業部.關于切實做好全國高致病性禽流感秋季免疫工作的通知 [EB/OL].（2017-07-10）.http：//www.moa.gov.cn/govpublic/SYJ/201707/t20170711_5744436.htm.

[4] ?Jianzhong Shi，Guohua Deng，Huihui Kong，et al.H7N9 virulent mutants detected in chickens in China pose an increased threat to humans[J].Cell Research，24 October 2017：1409-1421.

[5] ?張濟培，張溢珊，牛森，等.H7N9 亞型禽流感免疫程序研究初報[J].廣東畜牧獸醫科技，2017，42（3） ：21-27.

[6] ?曾顯營.H5N1亞型重組禽流感滅活疫苗種毒Re6 株的生物學特性及免疫原性研究[J].中國預防獸醫學報，2010，41（10） ：800-803.

[7] ?田國彬.防控H7N9，建議免疫 2 次以上 H7-Re1 苗[J].北方牧業，2017（20）：9.

Abstract：In order to evaluate the immunity effect of the new recombinant avian influenza （H5+H7） trivalent inactivated vaccine on the parental generation chicken farm， the trivalent inactivated vaccine products of five companies， A， B， C， D and E， were selected. Serum samples of chickens were collected weekly before and after inoculation to test the titer of H5N1（re-11， re-12， re-8） and H7N9（H7-re2， H7-re1） antibodies， and to analyze the fluctuation pattern of antibodies on chickens from different companies. The results showed that the HI antibodies of H5N1（re-11 and re-12） and H7N9（H7-re2） in the serum of the control group were 0log2.After 1w of immunity， the antibody of avian influenza of all the chickens in the immune group began to rise，and the titer of antibody reached a peak around 4w.The group that produced the best HI antibody against H5N1（re-11） was group A;The group that produced the best HI antibody against H5N1（re-12） was group D; The group E produced the best HI antibody against H7N9（H7-re2）.Different manufacturers of avian influenza trivalent vaccine produced avian influenza antibody titer difference is not significant.The trivalent inactivated vaccine also produces effective antibodies against H5N1（re-8） and H7N9（h7-re1）.This study provides data support for chicken farm immunity to avian influenza trivalent inactivated vaccine.

Key words：Avian influenza viruses;vaccine of recombinant avian influenza virus（H5+H7） trivalent inactivated;immune effect evaluation