過敏性紫癜合并肺炎支原體感染患兒外周血中細胞因子及淋巴細胞亞群水平變化

陳見南，占劉英

(浙江大學醫學院附屬兒童醫院實驗檢驗中心/國家兒童健康與疾病臨床醫學研究中心，浙江杭州 310003)

過敏性紫癜(HSP)是兒童時期常見的一種以免疫復合物在受累組織小血管內皮沉積為主要特征的、多種免疫介導的系統性免疫性血管炎，多累及皮膚、關節、消化道和腎臟，病因復雜，致病機制目前并不十分清楚[1-2]。目前大多認為HSP的發病可能與感染、藥物、疫苗接種、食物過敏等因素有關。近年有較多研究報道HSP合并肺炎支原體(MP)感染病例，但尚缺乏確切證據證實MP感染可導致HSP。HSP發病誘因以感染占第1位，而MP感染誘發兒童HSP近年有增多趨勢[3]。本研究通過回顧性調查2016-2018年在浙江大學醫學院附屬兒童醫院進行檢查的HSP-MP感染患兒、HSP患兒和健康體檢兒童的白細胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)、干擾素-γ(IFN-γ)、CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD4+/CD8+水平，探討MP感染與HSP發病機制的關系。此外，對HSP-MP感染組根據臨床特點和累積部位進行臨床分型，觀察各型之間年齡和T細胞亞群水平的差異，為臨床及早判斷HSP的病情和預后提供依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016-2018年在浙江大學醫學院附屬兒童醫院住院的HSP急性期發作兒童作為研究對象，均符合美國風濕病學會制定的HSP診斷標準[4]，所有患兒均為初次發病。起病在15 d以內，既往身體健康，排除其他免疫性疾病。HSP-MP感染組101例，男49例，女52例；HSP組101例，男65例，女36例。另選取年齡、性別與HSP-MP感染組和HSP組相配的同期在浙江大學醫學院附屬兒童醫院健康體檢且資料齊全的59例兒童作為對照組，男32例，女27例。3組研究對象性別、年齡等一般資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有HSP患兒均為急性期初發病例，近期(2周內)均未使用抗組胺藥物、腎上腺皮質激素和免疫抑制劑治療。本研究通過浙江大學醫學院附屬兒童醫院倫理委員會批準，患兒家長均知情同意并簽署知情同意書。

1.2儀器與試劑 (1)病原學診斷：德國Virion/Serion公司的MP-IgM試劑盒。(2)免疫功能檢測：儀器為美國BD公司 FACSCalibur型流式細胞分析儀，抗體及溶血素均為美國BD公司產品，試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。

1.3方法 (1)病原學診斷：HSP患兒于入院當天未治療前采集靜脈血，取2 mL血清，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測，德國Virion/Serion公司的MP-IgM試劑盒，嚴格按說明書操作，檢測患兒MP-IgM水平?？贵w效價>1∶80確診為陽性。(2)免疫功能檢測：①入院后治療前空腹抽取EDTA-K2抗凝血2 mL，采用流式細胞術測定T淋巴細胞亞群，由專人嚴格根據試劑盒說明書步驟進行操作，檢測各組CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD4+/CD8+水平。②入院后治療前采集空腹靜脈血2 mL,3 000 r/min離心10 min,分離收集血清,置-20 ℃冰箱保存待測,采用ELISA雙抗體夾心法檢測上清液中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF和IFN-γ水平，試劑盒購自深圳晶美有限公司，步驟按試劑盒說明書進行操作。

2 結 果

2.13組外周血細胞因子水平比較 HSP-MP感染組、HSP組IL-2、IFN-γ水平均低于對照組,IL-4、TNF水平均高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；HSP-MP感染組IL-4水平高于HSP組，差異有統計學意義(P<0.05)；HSP-MP感染組和HSP組IL-6和IL-10水平與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；HSP組IL-6和IL-10水平與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；HSP-MP感染組IL-2、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ水平與HSP組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.23組外周血淋巴細胞亞群水平比較 HSP-MP感染組、HSP組CD3-CD16+CD56+水平均低于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)； HSP-MP感染組和HSP組CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+和CD4+/CD8+水平與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；HSP-MP感染組CD4+、CD8+、CD3-CD16+CD56+和CD4+/CD8+水平與HSP組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。

2.3HSP-MP感染組各臨床分型間年齡和淋巴細胞亞群水平比較 HSP-MP感染組101例患兒中，單純皮膚型13例，關節型36例，腹型16例，腎型8例，混合型28例。通過比較發現，腎型患兒年齡和CD8+水平均明顯高于單純皮膚型、關節型、腹型和混合型，CD4+/CD8+水平低于單純皮膚型、關節型、腹型和混合型，兩兩比較差異均有統計學意義(P<0.05)；腎型患兒CD4+水平與其他臨床分型比較，差異均無統計學意義(P>0.05),見表3、圖1～4。

表1 3組外周血細胞因子水平比較[ M(P25～P75),pg/mL]

表2 3組外周血淋巴細胞亞群水平比較

表3 HSP-MP感染組各臨床分型間年齡和淋巴細胞亞群水平比較

圖1 HSP感染組各臨床分型間年齡比較(月)

圖2 HSP感染組各臨床分型間CD4+水平比較(%)

圖3 HSP感染組各臨床分型間CD8+水平比較(%)

圖4 HSP感染組各臨床分型間CD4+/CD8+水平比較

3 討 論

HSP是兒童時期常見的一種自身免疫性疾病，HSP患兒存在體液免疫紊亂、T細胞亞群功能失調及細胞因子分泌異常等多種免疫失衡，但其具體發病機制尚不清楚[5]。MP感染的HSP的發病機制也未明確，有研究顯示，HSP-MP感染較單純HSP 存在更為嚴重的T細胞功能紊亂[6]。本研究通過觀察外周血中細胞因子、T細胞亞群水平的變化，了解HSP患兒免疫功能狀態，探討MP 感染與HSP免疫學發病機制之間的關系；并通過比較HSP-MP感染患兒不同臨床分型間年齡和T細胞亞群水平的差異，為臨床及早對HSP進行分型提供參考。

CD4+T淋巴細胞接受不同刺激后向不同的功能亞群分化，相應的細胞因子在CD4+T淋巴細胞分化過程中起調控作用。IL-4主要由Th2輔助細胞分泌，參與體液免疫，促進過敏反應；IL-4對B細胞的增殖和抗體的產生特別是IgE的產生有巨大促進和誘導功能；IL-2和IFN-γ主要由Th1輔助細胞分泌，參與細胞免疫，對抗細胞內細菌及原蟲的免疫反應，在清除結核、麻風等細胞內寄生菌感染中發揮重要作用。如果Th1功能亢進，將導致炎癥的慢性遷延、接觸性皮炎、自身免疫性疾病和器官移植急性排斥反應等疾病的發生和病理損傷。CD4+T淋巴細胞分化過程中，Th1和Th2存在交互調節，作用相反的兩種細胞因子在調節Th1/Th2免疫平衡中發揮重要作用，高水平IL-4抑制CD4+T淋巴細胞向Th1分化；而Th1通過IFN-γ抑制IL-4的分泌和CD4+T淋巴細胞向Th2分化。LI等[7]研究表明，HSP存在Th2功能亢進，血清IL-4水平升高，而Th1和IFN-γ改變不明顯。本研究發現，HSP-MP感染患兒和HSP患兒IL-4水平升高，IL-2和IFN-γ水平下降，Th2優勢活化，存在Th1/Th2失衡。此外，Th2類的細胞可產生IL-4等抗炎性的細胞因子，促進抗體產生，介導體液免疫應答[8]。本研究HSP-MP感染患兒IL-4水平明顯高于HSP患兒，提示兒童HSP合并MP感染時可能存在Th2細胞分泌亢進，體液免疫更加明顯。

TNF是由單核-巨噬細胞分泌的一種具有多種生物活性的多肽調節因子，屬于促炎因子，能有效反映腎臟受損程度，是檢測評估HSP持續性進展的重要指標，在HSP發病機制中發揮重要作用[9]。本研究中HSP-MP感染患兒和HSP患兒TNF水平均升高，符合以往報道。而HSP-MP感染組和HSP組TNF水平差異無統計學意義(P>0.05)，說明HSP患兒是否合并MP感染，TNF水平均會升高。

自然殺傷(NK)細胞即CD3-CD16+CD56+，是第三類群淋巴細胞，其特征性表型是CD16+和CD56+分子。測定CD3-CD16+CD56+水平可較準確反映機體的免疫活性細胞狀態。魏樊[10]研究表明，HSP-MP感染患兒和HSP患兒的NK(CD3-CD16+CD56+)細胞水平均下降，且HSP-MP感染患兒NK(CD3-CD16+CD56+)細胞水平低于HSP患兒。還有文獻表明，HSP患兒CD3-、CD4+/CD8+水平均低于對照組[11-13]。本研究結果顯示，HSP-MP感染患兒和HSP患兒的NK(CD3-CD16+CD56+)細胞水平較對照組下降，二者與對照組比較差異均有統計學意義(P<0.05)，說明HSP患兒的細胞免疫活性降低。此外，由于 NK細胞對B細胞有一定的抑制作用，因此，NK細胞的活性降低使B細胞過度增殖，導致體液免疫亢進。

HSP好發于兒童，本研究通過比較HSP-MP感染組不同臨床分型間中位年齡可發現，單純皮膚型中位年齡為83.6個月，關節型為83.8個月，腹型為84.5個月，混合型為73.7個月，腎型為105.8個月，腎型中位年齡明顯高于其他臨床分型，差異有統計學意義(P<0.05)，可以為臨床及早對HSP分型提供參考。通過比較HSP-MP感染組不同臨床分型間CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平發現，腎型CD8+水平明顯高于其他臨床分型,CD4+/CD8+低于其他臨床分型。近年來有研究發現，與健康人比較，HSP患者CD4+水平降低，而CD8+水平升高[14]，CD4+/CD8+水平下降，由此提示在HSP患者急性期體內T淋巴細胞亞群功能處于紊亂狀態，同時也說明CD4+、 CD8+T細胞參與了HSP的發病過程。 本研究中腎型CD8+水平明顯高于其他臨床分型，提示腎型HSP患兒體內存在更加嚴重的T細胞功能紊亂。

4 結 論

本研究表明，HSP患兒體內存在免疫失衡，表現為Th1/Th2分化失衡，IL-2、IFN-γ水平降低，IL-4、TNF水平升高，MP感染合并HSP時IL-4水平升高更加明顯。此外，腎型HSP-MP感染患兒年齡和CD8+水平均高于其他臨床分型，CD4+/CD8+低于其他臨床分型，可為臨床對HSP-MP感染患兒盡早進行臨床分型提供參考，有利于及早進行個體治療，盡早康復。