劉夢杰
(山東省新泰市人民醫院藥學部,山東新泰 271200)
據調查顯示,我國居民死因排名第一位的為腦卒中,且我國腦卒中患者發病第一年的復發率明顯高于西方國家[1]。腦卒中因其發病原因的不同,分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中。缺血性腦卒中的發病率占60%~70%,明顯高于出血性腦卒中,其發病的主要原因是腦血管中形成的血栓。據調查顯示,通過控制危險因素,80% 以上的腦卒中可以實現早期預防[2]。
目前有研究顯示,與缺血性腦卒中相關的基因有三種,分別為68MTHFR、187F5、27PAI-1。為此,我們通過分析缺血性腦卒中患者與正常對照人群體內27PAI-1(4G/5G)、68MTHFR(C>T)、187F5(G>A)的基因型分布與等位基因頻率,進一步為預防中老年人發生缺血性腦卒中提供科學依據。
選擇2017年1月~2018年12月于我院神經內科住院的缺血性腦卒中患者共計92例,其中男性65例,女性27例,以上患者均經顱腦CT或MRI檢查確診。診斷標準為中國急性缺血性腦卒中診治指南2019[3],所選人群均排除患有其他急性或慢性疾病,如:肝腎功能不全,癌癥等。
選擇健康體檢者36例,男性25例,女性11例,均經體檢排除心腦血管疾病和其他血栓性疾病。
取靜脈血2~3ml置于EDTA抗凝管中,將樣本血樣上下顛倒混勻,移液槍取200μl血液置于裝有1ml 1×NH4Cl處理液的離心管中,靜置5min顏色變為澄清的紅色后,3000~4000r pm離心5min,吸掉上清液留白細胞,加入35μl核酸純化試劑將白細胞打勻,靜置20~30min,取1.5μl處理后的白細胞樣本加入相應試劑耀金分中,混勻。采用數字熒光分子雜交/數字熒光原位雜交法(DFMH/DFISH Digital Fluorescence Molecule Hybridization/ Digital Fluorescence in situ Hybridization) 以熒光檢測儀(L998A,西安天隆科技有限公司)檢測受試者27PAI-1、68MTHFR、187F5基因型。所有試劑均由北京華夏時代基因科技發展有限公司提供。
比較兩組27PAI-1、68MTHFR、187F5基因型分布以及等位基因頻率,探討27PAI-1、68MTHFR、187F5基因多態性與缺血性腦卒中的關系。
所有研究數據均應用SPSS 19.0統計軟件進行分析和處理,定性資料組間采用χ2檢驗,用百分比(%)表示。以P<0.05為差異有統計學意義。
缺血性腦卒中組基因型4G4G 與正常對照組比較,差異有統計學意義(P<0.05);基因型4G5G與正常對照組比較,差異有統計學意義(P<0.05);基因型5G5G與正常對照組比較,差異無統計學意義(P>0.05)。缺血性腦卒中組4G等位基因頻率顯著高于正常對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。4G5G者居于4G與5G之間,含有4G的基因型分布在缺血性腦卒中組顯著多于對照組。結果見表1:
表1 各組27PAI-1(4G/5G) 基因型分布與等位基因頻率比較 [n(%)]
缺血性腦卒中組基因型TT與正常對照組比較,差異有統計學意義(P<0.05);基因型TC與正常對照組比較,差異有統計學意義(P<0.05);基因型CC與正常對照組比較,差異無統計學意義(P<0.05)。缺血性腦卒中組T等位基因頻率顯著高于正常對照組,差異有統計學意義(P<0.01)。TC者居于TT與CC之間,含有T的基因型分布在缺血性腦卒中組顯著多于對照組。結果見表2:
表2 各組68MTHFR(C>T) 基因型分布與等位基因頻率比較 [n(%)]
缺血性腦卒中組基因型、等位基因頻率與正常對照組比較,差異無統計學意義(P>0.05)。結果見表3:
表3 各組187F5(G>A) 基因型分布與等位基因頻率比較 [n(%)]
4G4G基因型合并TT基因型與5G5G基因型合并TT基因型比較,差異有統計學意義(P<0.05);4G5G基因型合并TT基因型與5G5G基因型合并TT基因型比較,差異有統計學意義(P<0.01)。4G4G基因型合并CT基因型與4G5G基因型合并CT基因型比較,差異有統計學意義(P<0.05);4G4G基因型合并CT基因型與5G5G基因型合并CT基因型比較,差異有統計學意義(P<0.05);4G5G基因型合并CT基因型與5G5G基因型合并CT基因型比較,差異有統計學意義(P<0.01)。結果見表4:
表4 缺血性腦卒中組27PAI-1(4G/5G) 基因合并68MTHFR(C>T) 基因比較 [n(%)]
基于腦卒中的高發病率、死亡率、致殘率,因其缺乏有效的治療手段,目前認為最好的措施即為預防。本研究通過熒光染色原位雜交染色體核型分析技術檢測缺血性腦卒中相關風險基因:68MTHFR、187F5、27PAI-1基因型,對其結果進行分析,判斷其發病的風險率,從而起到預防缺血性腦卒中的作用。
PAI-1是纖溶系統中的主要成分,對調節纖溶系統的平衡起著重要作用。PAI-1基因啟動子序列中存在多個基因多態性,其中有一個4G/5G多態性,即鳥苷酸插入或缺失的基因多態性,其調控著PAI-1的表達水平[4]。研究者證實,PAI-1轉錄基因增加與4G等位基因有很大相關性,4G4G純合子血漿PAI-1水平顯著高于雜合子4G5G和5G5G純合子,且雜合子4G5G血漿PAI-1水平明顯高于5G5G純合子[5]。PAI-1基因4G/5G基因多態性可能影響纖溶系統導致缺血性腦卒中的發生[6]。有外國學者對印度人缺血性腦卒中患者血漿PAI-1水平和4G/5G基因多態性的關系做了研究,發現缺血性腦卒中患者血漿PAI-1水平高于正常組,且4G4G患者血漿PAI-1水平最高,其次是4G5G基因型者,5G5G基因型者血漿PAI-1水平最低[7]。本研究結果顯示,缺血性腦卒中組攜帶PAI-1基因4G4G基因型與4G5G基因型的患者明顯高于正常組,4G5G者居于4G與5G之間,4G等位基因頻率顯著高于正常對照組。
MTHFR基因多態性存在種族和地域的差異,我國人群TT基因型的攜帶率遠高于西方國家[8]。Li等[9]通過Meta分析證實了MTHFR C677T基因可能是腦卒中的易感基因。在對中國人群進行的研究中發現,MTHFR基因C677T位點的T等位基因是腦卒中發生的危險因素[10]。中國人群MTHFR C677T的高遺傳突變率是導致血漿同型半胱氨酸HCY水平和腦卒中發生率顯著高于歐洲人群的主要危險因素。本研究結果顯示,缺血性腦卒中組攜帶MTHFR基因TT型與TC型的患者高于正常對照組,T等位基因頻率顯著高于正常對照組。攜帶TC基因者居于TT與CC之間,含T的基因型分布在缺血性腦卒中組顯著多于對照組。
F5基因是一種V因子的單核苷酸多態性,攜帶者凝血活性正常,但是對活性蛋白C抵抗從而導致相應的血液高凝狀態[11]。187F5的A基因型與G基因型比,發生缺血性腦卒中的風險比為1.33。然而,此基因型在亞洲人群中突變的幾率不大。本研究結果顯示,缺血性腦卒中組和正常對照組中187F5基因型都沒有突變。
綜上所述,PAI-1基因在缺血性腦卒中的發病中起著關鍵作用,攜帶4G4G基因型的患者發生卒中的風險明顯高于攜帶5G5G基因型的患者,其次是攜帶4G5G基因型者。MTHFR基因TT基因型突變者發生缺血性腦卒中的風險高于CC基因型,其次是CT基因型。同一患者PAI-1基因與MTHFR基因同時突變,發生缺血性腦卒中的風險提高,尤其以4G5G合并CT、TT者居多。187F5基因型無突變,此基因不作為缺血性腦卒中發病的重要基因。以上統計結果顯示與前人研究一致,說明通過個體化治療基因檢測技術提前檢測基因型可以預防缺血性腦卒中的發生。這將為今后高危因素人群預防缺血性腦卒中起到重要作用,從而降低死亡率與致殘率,提高中老年人生活質量。