ACI后肢體運動功能障礙患者EphA2蛋白與Bold-f MRI、DTI參數相關性

陳歷 蔣炳虎 季一飛 靳雨 尹書斌 趙玉萍

急性腦梗死（Acute cerebral infarction，ACI）為臨床常見腦卒中類型，患者多預后差，嚴重影響患者的生存質量［1］。目前臨床上多釆用CT、核磁等現代影像學對缺血性腦血管病輔助診斷，如血氧水平依賴功能磁共振成像（Blood oxygenation leve1 dependent functional magnetic resonance imaging，Bold-f MRI）、彌散張量成像（Diffusion tensor imaging，DTI），但影像學僅能描述梗死病灶形態學的改變，無法描述神經功能缺損情況［2-3］。血清生物學標志物具有檢測具有床旁操作的可能性與便利性，使其在腦血管疾病方面的應用充滿前景［4-5］。筆者前期研究［6］發現，小鼠腦梗死組織中EphA2 表達隨著時間不斷增多，導致血腦屏障通透性增高，破壞血腦屏障緊密連接的形成，增加大腦內皮細胞通透性，并且抑制神經元再生，促進細胞凋亡。因此本研究嘗試探究ACI 后肢體運動功能障礙患者治療前后血清EphA2 蛋白與靜息態Bold-f MRI、DTI 參數相關性及臨床意義。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月 至2020年12月本 院143 例ACI 后肢體運動功能障礙患者作為研究組，男80例，女63 例；年齡平均（58.05±5.97）歲。另選同期60 例體檢正常者（經核磁或CT 排除腦血管疾?。┳鳛閷φ战M，男39 例，女21 例；年齡平均（57.30±5.64）歲。

納入標準：研究組患者均有明確ACI［7］病史；年齡18～70 歲；發病前mRS 為0 分，右利手；入院時右側上下肢體肌力均為3 級及以下（由2 名受過培訓的神經內科醫師共同完成）；Glasgow 評分＞8分，無智能缺陷；經頭顱CT/MRI 檢查證實梗死部位包括左側半卵圓中心、基底核區、放射冠區和內囊中的一個或多個部位，梗死總面積＜3 cm2，無明顯占位效應、對周圍腦組織結構無明顯影響；發病時間至入院時間48 h 內。對照組均為全身體檢均未發現明顯異常，且經核磁或CT 排除腦血管疾病。兩組研究對象均知曉本研究，已簽署同意書，且本研究經本院倫理委員會審批通過。排除標準：無癥狀腦梗死者；腦梗死后3 個月內出血轉化者；嚴重肝腎功能不全、嚴重感染等可能影響本研究指標檢測者；血液系統疾病患者；治療期間有任何部位新發腦梗死者；既往有精神系統疾病、頭部嚴重外傷和手術史者；有MRI 檢查禁忌者。

1.2 方法

治療方法：研究組均給予抗血小板聚集及他汀等常規治療，同時住院期間行傳統康復治療，持續治療3 個月后根據肌力分級標準［8］評估療效，上下肢體肌力均提高2 級及以上為療效良好，共99例，未達到療效良好評定為療效不良，共44 例。

靜息態Bold-f MRI、DTI 檢查：分別于治療前、治療1、3 個月后進行檢查，采用1.5T 磁共振掃描儀（GE 公司生產）進行多模態MRI 檢查，采集靜息態Bold-fMRl 圖像，采用回波平面成像（EPI）序列，同時進行三維高分辨率結構圖像采集。采用SPM5 軟件觀察分析患側顱內初級感覺運動區（SMC）、輔助運動區（SMA）、運動前區（PM），后頂葉皮層（PPC）的低頻振幅（ALFF）圖像；同時，對受試者行磁共振彌散張量成像（DTI），測量患側各向異性參數（FA），并計算走行區平均擴散率（Ratio ofmean diffusivity，rMD）值。

血清EphA2 蛋白檢測：分別于治療前、治療1、3 個月后采集空腹外周靜脈血5 mL，離心處理取血清，采用酶聯免疫吸附法測定血清EphA2 蛋白，試劑盒購自江蘇江萊生物技術有限公司。

1.3 統計學方法

數據處理采用SPSS 22.0 統計軟件，計數資料以n（%）描述，采用χ2檢驗，計量資料采用（）描述，采用t檢驗，相關性分析采用Pearson 相關系數模型，通過Logistic 進行驗證關聯性，評估效能分析采用受試者工作特征（ROC）曲線。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組臨床資料比較

研究組血清EphA2 蛋白水平高于對照組，Bold-f MRI 參數、DTI 參數低于對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組臨床資料比較［n（%），（±s）］Table 1 A comparison of the clinical data between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 兩組臨床資料比較［n（%），（±s）］Table 1 A comparison of the clinical data between 2 groups［n（%），（±s）］

項目性別（男/女）年齡（歲）＜60≥60 BMI（kg/m2）＜18.5 18.5～23.9≥24吸煙（是/否）飲酒（是/否）EphA2 蛋白（pg/mL）PM 的ALFF 值SMA 的ALFF 值SMC 的ALFF 值PPC 的ALFF 值FA 值rMD 值研究組（n=143）80/63對照組（n=60）39/21 χ2/t 值0.587 P 值0.444 82（57.34）61（42.66）36（60.00）24（40.00）0.051 0.822 10（6.99）67（46.85）66（46.15）64/79 53/90 49.44±12.35 0.74±0.10 0.76±0.09 0.77±0.08 0.84±0.09 0.86±0.08 0.97±0.07 6（10.00）30（50.00）24（40.00）21/39 18/42 12.35±3.51 0.97±0.13 0.96±0.17 0.98±0.13 1.04±0.17 0.93±0.09 1.12±0.09 0.533 0.297 0.679 0.379 13.323 9.264 8.155 10.064 8.155 3.609 8.937 0.410 0.538＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 研究組療效及不同療效患者血清EphA2 蛋白水平、Bold-f MRI 參數、DTI 參數比較

治療前、治療3 個月后，療效不良患者血清EphA2 蛋白水平均較療效良好患者高，PM、SMA、SMC、PPC 的ALFF 值、FA 值均較療效良好患者低（P＜0.05）；療效良好患者治療3 個月后血清EphA2 蛋白水平低于治療前，PM、SMA、SMC、PPC 的ALFF 值、FA 值均高于治療前（P＜0.05）。見表2。

表2 不同療效患者血清EphA2 蛋白水平、Bold-f MRI 參數、DTI 參數比較（±s）Table 2 Serum EphA2 protein levels，Bold-f MRI parameters and DTI parameters of patients with different curative effects（±s）

表2 不同療效患者血清EphA2 蛋白水平、Bold-f MRI 參數、DTI 參數比較（±s）Table 2 Serum EphA2 protein levels，Bold-f MRI parameters and DTI parameters of patients with different curative effects（±s）

注：與同組治療前比較，aP＜0.05。

時間n治療前99 44治療3 個月后組別療效良好療效不良t 值P 值療效良好療效不良t 值P 值99 44 EphA2 蛋白（pg/mL）43.05±11.09 55.83±14.37 5.789＜0.001 35.58±9.72a 51.63±11.97 8.471＜0.001 PM 的ALFF 值0.82±0.11 0.66±0.09 8.466＜0.001 0.88±0.12a 0.69±0.11 8.960＜0.001 SMA 的ALFF 值0.82±0.10 0.70±0.08 7.020＜0.001 0.91±0.13a 0.74±0.10 7.714＜0.001 SMC 的ALFF 值0.83±0.09 0.70±0.08 8.240＜0.001 0.90±0.13a 0.74±0.11 7.108＜0.001 PPC 的ALFF 值0.92±0.10 0.76±0.08 9.359＜0.001 0.99±0.14a 0.80±0.12 7.813＜0.001 FA 值0.48±0.09 0.38±0.07 6.539＜0.001 0.52±0.11a 0.40±0.09 6.350＜0.001 rMD 值0.98±0.07 0.97±0.08 0.754 0.452 1.10±0.09a 1.08±0.09a 1.227 0.222

2.3 治療前各指標相關性分析

ACI 后肢體運動功能障礙患者治療前血清EphA2 蛋白與PM（r=-0.716）、SMA（r=0.648）、SMC（r=-0.682）、PPC（r=-0.688）的ALFF（r=-0.660）、FA（r=-0.688）值間均存在負相關關系（P＜0.05）。

2.4 血清EphA2 蛋白、靜息態Bold-f MRI、DTI 參數評估療效的價值

繪制治療3 個月后血清EphA2 蛋白、靜息態Bold-f MRI、DTI 參數評估患者療效的ROC 曲線，結果顯示，各指標評估療效的曲線下面積（Area under the curve，AUC）均在0.7 以上，具有良好評估效能，且聯合評估的AUC 為0.932，大于各指標單獨評估。見表3、圖1。

表3 治療3 個月后各指標評估療效的效能Table 3 Effectiveness of evaluation of efficacy by indicators after 3 months of treatment

圖1 治療3 個月后各指標評估療效的ROCFigure 1 ROC of evaluation of curative effect after 3 months

3 討論

ACI 后肢體運動功能障礙的發生機制復雜，其治療結果易受多方面因素影響。本研究結果提示上述指標變化可能與ACI 后肢體運動功能障礙的發生有關。由于ACI 后肢體運動功能障礙不同療效患者的rMD 值無明顯差異，故本研究后續的相關性、評估價值中未將rMD 值納入。本研究還發現，靜息態Bold-f MRI 參數、DTI 參數均是ACI 后肢體運動功能障礙患者療效的關聯性因素。Bold-f MRI 是利用磁振造影測量神經元活動引起的血液動力的改變，可直觀顯示腦卒中和針刺所致大腦皮層的功能區活動情況，以及神經纖維束損傷等情況［9-10］。然而，影像學參數僅能反映梗死病灶形態學的改變，在評估神經功能缺損方面存在一定局限性。

本研究結果提示EphA2 蛋白可能與患者疾病轉歸情況有關。EphA2 蛋白是在促紅細胞生成素產生肝細胞中發現的具有酪氨酸酶活性的基因編碼產物，國內石秋艷等［11］通過ACI 大鼠模型的研究，發現少量的EphA2 蛋白可能與維持正常的中樞神經功能有關，ACI 發生可導致EphA2 蛋白表達不斷增加，過多的EphA2 蛋白對機體組織具有毒害作用，且EphA2 蛋白表達增高可導致血腦屏障通透性增加、抑制神經元再生、促進腦細胞凋亡。國外Finney AC 等［12］研究證實，內皮細胞EphA2 蛋白通過促進單核細胞的粘附而參與斑塊炎癥和動脈粥樣硬化病變進展，平滑肌EphA2 蛋白可能通過調節平滑肌增殖和細胞外基質沉積而調控動脈粥樣硬化進展。但國內外尚無血清EphA2 蛋白水平與ACI 后肢體運動功能障礙患者療效相關的研究，本研究通過多因素分析提示血清EphA2 蛋白在ACI 后肢體運動功能障礙患者治療過程中呈負向調節作用，通過抑制其表達水平，或許有助于改善治療效果?；谏鲜鼋Y果，本研究首次采用ROC 曲線探究血清EphA2 蛋白、靜息態Bold-f MRI、DTI 參數評估ACI 后肢體運動功能障礙患者療效的價值，發現治療3 個月后血清EphA2 蛋白、靜息態Bold-f MRI、DTI 參數評估患者療效的AUC 均在0.7 以上，具有良好評估效能，尤其是聯合評估的AUC 高達0.932，大于各指標單獨評估，其原因可能在于EphA2 蛋白可從分子生物學方面對患者病情進行評價，從而對影像學參數的局限性進行補充，可為醫生提供更全面的分析數據，從而改善評估效果。

綜上可知，ACI 后肢體運動功能障礙患者血清EphA2 蛋白與靜息態Bold-f MRI、DTI 參數呈負相關，均與患者療效顯著相關，行血清EphA2 蛋白與靜息態Bold-f MRI、DTI 檢測有助于臨床評估治療效果。