MTHFR基因多態性與中國男性不育關系的meta分析

周 青 劉帥妹 張瑞金 石 慧 林 寧 吳玉璘

江蘇省衛生健康發展研究中心(南京，210036)

育齡人群中不孕不育夫婦的發生率高達10%～15%，其中男性因素占40%～50%，嚴重影響人們生活質量和家庭幸福[1]。超過50%的男性不育原因不明，為特發性男性不育[2-3]。研究發現，亞甲基四氫葉酸還原酶(5,10-MTHFR)基因多態性的發生，改變酶活性引起體內葉酸代謝異常，產生高同型半胱氨酸血癥和DNA低甲基化，導致男性精子發生異常，功能受損而不育[4]。目前對MTHFR與中國男性不育的關系研究尚有爭議，為進一步評估兩者關系，本文基于先前諸多研究進行meta分析。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索

利用中英文數據庫Pubmed、中國知網、萬方數據庫等，搜索有關MTHFR基因多態性與中國男性不育關系病例-對照研究文獻。搜索中文關鍵詞MTHFR(C677T)、亞甲基四氫葉酸還原酶、基因多態性、男性不育；英文搜索關鍵詞：MTHFR(C677T)、polymorphisms、methylenetetrahydrofolate reductase、male infertility。檢索時間從建庫至2020年12月18日，同時閱讀參考文獻進行追溯，使獲得的文獻盡可能詳盡，限定語種為中文和英文。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①關于MTHFR(C677T)基因多態性與中國男性不育關系病例-對照研究；②研究對象為中國男性，且病例無輸精管缺如、泌尿生殖道感染、睪丸炎等疾??；③對照組為健康男性，有自然生育史；④數據齊全包含CC、CT和TT在病例和對照兩組分布頻數；排除標準：①非中英文研究型文章；②數據重復和質量不可靠的文章(NOS<5分)；③綜述類和meta分析類文章；④對照組基因型的分布不符合哈迪溫伯格(H-W)平衡定律，且影響結果穩定性。

1.3 資料提取

兩位研究者分別按照納入標準和排除標準獨立進行文獻的篩選和資料的提取，遇到分歧可討論或與第3位經驗豐富研究者進行協商。提取的資料包括發表時間、作者、地區、樣本量、基因分型方法、基因型的分布頻數。

1.4 文獻質量評價

兩位研究者分別根據文獻質量評價表(NOS)對納入文獻的方法學質量進行評價，并交叉核對，總分為9分，NOS≥5分文獻質量良好。

1.5 統計學分析

采用State軟件計算95%可信度區間(95%CI)和比值比(OR)，評估MTHFR(C677T)基因多態性與中國男性不育的關系。3種基因型包括CC、CT和TT，分別計算等位基因模型T比C、雜合比較模型CT比CC、純合比較模型TT比CC、顯性比較模型(CT+TT)比CC 和隱性比較模型TT比(CC+CT)。P<0.05具有統計學意義。采用I2和Q檢驗進行異質性檢測，若I2<50%則采用固定效應模型Mantel-Haenszel，反之采用隨機效應模型DerSimonian和Laird合并OR值，且I2≥50%則表示存在明顯異質性，需進行亞組分析和敏感性分析尋找異質性的來源[5-6]。最后采用Egger線性回歸法和Begg秩相關法計算評估發表偏倚情況，P>0.05表示不存在發表偏倚[7]。

2 結果

2.1 文獻檢索

檢索中英文相關文獻共153篇，剔除重復數據11篇，獲得142篇。根據納入和排除標準，剔除12篇meta分析，9篇綜述，47篇研究外國人群文獻，54篇研究非MTHFR(C677T)位點文獻，1篇研究心臟病文獻，最終納入文獻共19篇[8-26]。見表1。

2.2 文獻質量

19篇納入文獻質量良好，NOS均≥5分，見表1。

表1 MTHFR(C677T)基因納入文獻的基本情況

2.3 文獻分析

T比C、TC比CC、TT比CC、TT比(CC+CT)和(TT+CT)比CC 5種遺傳基因模型結果分析提示MTHFR(C677T)基因多態性與中國男性不育發生存在明顯相關性。根據基因分型的方法分為熒光定量PCR、PCR-RFLP、PCR和其他(SNaPshot、Sequencing和Taqman-MGB)亞組進行行分析，前3組結果有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 MTHFR (C677T)基因多態性與男性不育相關性分析

2.4 異質性分析

MTHFR(C677T)純合比較模型TT比CC，等位基因模型T比C，顯性比較模型(CT+TT)比CC，隱性比較模型TT比(CC+CT) ，I2>50%表示存在高度異質性，采用隨機效應模型進行合并計算，并通過基因分型方法進行亞組分析發現，TT比CC模型異質性主要來源于PCR組，T比C 模型異質性主要來源于PCR-RFLP、PCR和熒光定量PCR組，TT比(CC+CT) 模型異質性主要來源于PCR-RFLP，(TT+CT) vsCC 模型異質性來源于PCR和熒光定量PCR。

2.5 敏感性分析

通過敏感性分析一一剔除文獻重新合并計算，發現Xie 等[23]報道的文獻是主要的異質性來源，剔除后異質性下降，I2<50%。剔除不符合哈迪溫伯格平衡的胡斐等[18]報道文獻，重新合并計算各模型效應量無明顯改變。

2.6 發表偏倚

通過Begg漏斗圖和Egger線性回歸法，5種基因遺傳模型的漏斗圖均對稱，且Egger檢驗結果P>0.05，說明不存在發表偏倚。見表3和圖1。

表3 MTHFR(C677T)基因多態位點Egger檢驗結果

圖1 MTHFR(C677T)基因多態性漏斗圖(T比C)

3 討論

近年來，研究顯示MTHFR基因多態性的發生會增大男性不育的風險，然而由于研究方法、地域差異和樣本量不同等原因，導致結果不一致。

本研究共納入19篇文獻，觀察組和對照組分別為5602例和4521例，5種遺傳模型結果顯示MTHFR(C677T)基因多態性發生與中國男性不育存在明顯相關性，與Ren等[27]報道結果一致。按照基因分型方法進行亞組分析發現，熒光定量PCR、PCR-RFLP和PCR 結果均提示MTHFR(C677T)基因多態性發生增加中國男性不育的風險，而其他組結果提示不存在相關性，可能是因為不同實驗方法對基因分型結果存在影響，導致異質性較大。敏感性分析發現Xie 等[23]報道的文獻是主要的異質性來源。對納入文獻進行哈迪溫伯格平衡檢驗，發現胡斐等[18]報道文獻不符合哈迪溫伯格平衡定律，剔除該文獻重新合并計算，5種遺傳模型合并效應量無明顯改變。通過Begg漏斗圖和Egger檢驗，5種遺傳模型漏斗圖均對稱，且P>0.05，說明不存在發表偏倚，結果可靠。

本次研究尚有不足：樣本量太小，研究人群局限于中國漢族男性，研究人群葉酸攝入量、各地區生活環境、飲食習慣、納入人群吸煙情況以及年齡等信息無法獲取，對結果均可能產生影響。

綜上所述，MTHFR(C677T)基因多態性可能會增加中國男性不育的風險。MTHFR基因多態性與中國男性不育的關系還需擴大樣本量，對全國不同民族、地區、生活環境以及飲食習慣等進一步研究，以為臨床提供更可靠數據。