伊曲康唑膠囊的質量評價

杜亞俊 張秉華 牛龍青 衷紅梅 趙蒲中

(陜西省食品藥品檢驗研究院，西安 710065)

伊曲康唑為三唑類抗真菌藥物，1980年由比利時楊森制藥有限公司(Janssen Pharmaceutica N.V.)合成。伊曲康唑通過干擾真菌細胞膜麥角固醇的生物合成來達到抑制真菌增殖、促進真菌死亡的目的，具有抗菌譜廣、毒性低的特點，臨床上適用于淺表真菌感染和深部真菌引起的系統感染，還適用于其他抗真菌藥物不適用或無效的系統性感染[1-3]。1987年伊曲康唑膠囊首次在墨西哥獲準上市，1993年在我國獲準進口。2000年，伊曲康唑膠囊在國內天津力生制藥廠首仿獲準生產。目前國內有批準文號5個，生產企業5家，規格均為0.1 g。其不良反應主要表現為胃腸道不適、肝功能異常和頭痛。

2015年在國家藥品抽驗計劃中，筆者曾對伊曲康唑膠囊進行過質量評價，2021年伊曲康唑膠囊再次作為國家藥品抽檢計劃品種。根據標準查詢情況，現行的中國藥典(ChP)、美國藥典(USP)、歐洲藥典(EP)、英國藥典(BP)及日本藥局方(JP)均收載了伊曲康唑原料，ChP、USP及企業注冊標準YBH12752020收載了伊曲康唑膠囊。本文按現行質量標準對全部樣品進行檢驗，并針對其中發現的問題開展相應的探索性研究，通過對關鍵指標與2015年國家藥品抽驗計劃結果的對比，對當前伊曲康唑膠囊的質量狀況進行客觀評價，并為進一步完善質量標準提出建議。

1 儀器及試藥

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀(Agilent 1260及島津 LC-2030 3D)，電子天平(瑞士梅特勒XPE205及ME204)，氣相色譜儀(島津GC-2010 Plus及Agilent 8890)，溶出度儀(Agilent 708-DS、天大天發RC806ADK、天大天發RC1208D及SOTAX AT 7x)，紫外可見分光光度計(島津UV 2600)，水分活度儀(AquaLab 4TE，美國METER Group, Inc.公司)

四氫呋喃(色譜純，Merck公司)，甲醇、乙腈(色譜純，美國Sigma-Alorich公司)，四丁基硫酸氫銨、鹽酸、乙酸銨、十二烷基硫酸鈉(分析純，國藥集團)

1.2 對照品

伊曲康唑對照品(批號：100631-201402，含量：99.2%)、雜質A對照品(批號：130686-201501，含量：99.5%)、雜質B對照品(批號：130687-201501，含量：97.5%)、雜質C對照品(批號：130688-201501，含量：96.3%)、雜質D對照品(批號：130689-201501，含量：95.1%)、雜質E對照品(批號：130690-201501，含量：97.1%)、雜質F對照品(批號：130691-201501，含量：98.0%)、雜質G對照品(批號：130692-201501，含量：95.5%)，均購自中國食品藥品檢定研究院。雜質H對照品(雜質名稱自擬，企業D提供，批號：WVLA_0062_003_1，含量：97.2%)。

1.3 樣品

伊曲康唑膠囊為2021年國家評價性抽驗樣品，共131批，抽自全國29個省、自治區和直轄市的藥品生產、經營和醫療單位，樣品涉及A、B、C和D 4個生產企業。企業A、B和C均提供了原輔料；企業D采用從國外進口伊曲康唑小丸，在本地進行膠囊填充和泡罩包裝生產伊曲康唑膠囊，未提供原輔料。企業D的產品為原研藥品地產化品種，于2018年經國家食品藥品監督管理總局仿制藥質量與療效一致性評價專家委員會審核確定為仿制藥參比制劑。

2 實驗方法

2.1 法定檢驗

檢驗依據為ChP 2015年版第一增補本和2020年版二部，主要項目包括性狀、 鑒別、有關物質、二氯甲烷、溶出度、裝量差異和含量測定，兩個標準內容一致。

2.2 探索性研究

2.2.1 雜質譜分析

采用現行標準有關物質檢查的方法，通過雜質對照品定位和加速試驗，對原料藥生產過程可能引入的工藝雜質、制劑生產及貯存過程中可能產生的降解產物進行雜質歸屬，明確各企業樣品的關鍵雜質，比較分析國產制劑與原研地產化藥品雜質水平的差異。

2.2.2 有關物質測定方法研究

針對部分樣品相鄰雜質峰分離效果不佳的問題，建立了新的方法測定有關物質。色譜條件：色譜柱：Aglient Proshell 120 EC-C18(150 mm×4.6 mm,2.7 μm)；柱溫：30℃；檢測波長：260 nm；流速：0.8 mL/min；進樣量：10 μL；流動相A：0.01 mol/L乙酸銨溶液；流動相B：乙腈，梯度洗脫(表1)；稀釋劑Ⅰ：甲醇-乙腈(3:1)、稀釋劑Ⅱ：量取稀釋劑Ⅰ700 mL，加0.01 mol/L乙酸銨溶液300 mL，混勻。采用該方法對每個企業3批樣品進行測定。

表1 HPLC法流動相梯度洗脫表Tab.1 The gradient elution table of HPLC mobile phase

2.2.3 溶出行為及溶出度方法考察

伊曲康唑為難溶性弱堿性藥物，溶解性跟溶劑的pH緊密相關。查詢日本橙皮書發現，伊曲康唑膠囊(規格50 mg)在pH4.0醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水3種介質中，槳法，轉速50 r/min條件下，6 h的溶出量均在5%以下；查閱文獻[4]發現，企業B、D和C的伊曲康唑膠囊在pH4.0醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液和水3種介質中，槳法，轉速100 r/min條件下，1.5 h的累積溶出量在5%以下，溶出曲線無區分度，因此不再考慮這3種溶出介質。探索性研究中，按照《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》要求，選擇已形成標準的3種方法繪制溶出曲線，對溶出數據進行比較以選擇出較為科學合理的溶出度方法，同時比較國產制劑與參比制劑的相似性。

方法1：參照現行的中國藥典伊曲康唑膠囊溶出度方法[5]，采用槳法，以鹽酸溶液(9→1000)1000 mL為溶出介質，轉速為75 r/min。

方法2：參照比利時楊森公司(Jassen Pharmaceutica N.V.)的伊曲康唑膠囊全球釋放標準中溶出度方法，采用槳法，以含1%吐溫-20的鹽酸(7→1000)氯化鈉溶液900 mL為溶出介質，轉速為100 r/min。

方法3：參照美國藥典伊曲康唑膠囊溶出度方法1[6]，采用槳法，以含0.25%(W/V)十二烷基硫酸鈉的鹽酸溶液(9→1000)900 mL為溶出介質，使用沉降籃，轉速為75 r/min。

2.2.4 穩定性考察

按照現行的中國藥典9001原料藥物與制劑穩定性試驗指導原則[7]，每個企業取3批樣品按市售包裝置于溫度40℃±2℃、相對濕度75%±5%的條件下，分別在第1、2和3月末取樣一次，拍照記錄性狀變化，同時測定有關物質。

2.2.5 水分活度測定

水分活度(water activity)可以表征口服固體制劑產品中微生物可利用的水分情況，是影響微生物生長的關鍵因素之一，水分活度可反映產品中潛在微生物的生長繁殖狀況[8]，探索性研究中，采用儀器測定法對4個企業的樣品水分活度進行了測定，為非無菌制劑微生物污染風險評估提供參考。

3 結果與討論

3.1 法定檢驗結果

按現行質量標準檢驗，131批樣品均符合規定，合格率為100%，較2015年國評合格率(94.7%)[9]有明顯提升。結合探索性研究結果，對產品質量密切相關且各企業產品間差異較大的項目(有關物質和溶出度)進一步進行比較分析。

3.2 雜質譜比較

對131批伊曲康唑膠囊進行檢驗，典型色譜圖見圖1，發現主要檢出7個雜質，利用中國食品藥品檢驗研究院提供的伊曲康唑雜質A～G對照品及企業提供的雜質H對照品定位雜質峰，確定了其中5個已知雜質，分別為雜質B(編號1)，雜質C和雜質D(編號2)，雜質F(編號3)，雜質H(編號5)，雜質G(編號6)，編號4和7的雜質為未知雜質。

所有批次樣品按現行標準檢驗， 企業A主要檢出3～4個雜質，分別為雜質B、雜質C+D、雜質F和編號為4的未知雜質；最大單個雜質為雜質B，分布在0.07%～0.2%之間，雜質總量分布在0.13%～0.45%之間；企業B主要檢出4個雜質，分別為雜質B、雜質C+D、雜質G和雜質H，最大單個雜質為雜質B或雜質H，分布在0.09%～0.3%之間，雜質總量分布在0.16%～0.55%之間；企業C主要檢出4～5個雜質，分別為雜質B、雜質C+D、雜質G和編號為7的未知雜質，最大單個雜質為雜質B，分布在0.09%～0.2%之間，雜質總量分布在0.11%～0.51%之間。企業D主要檢出2個雜質，分別為雜質B和雜質E，多批次樣品雜質檢出量在忽略限以下，最大單個雜質分布在未檢出～0.1%之間，雜質總量分布在未檢出～0.25%之間。企業A、B、C的產品中雜質個數與雜質含量均高于企業D的產品，說明國內生產企業的產品在有關物質方面與原研地產化藥品仍然存在一定差距。各企業樣品最大單個雜質和雜質總量箱式圖見圖2。

通過對企業A、B、C提供的伊曲康唑原料進行檢測發現，企業A、C的原料中未檢出雜質H，該雜質在膠囊劑中未檢出或含量多在忽略限(約0.05%)以下；企業B的原料中檢出雜質H，但含量明顯低于制劑；其余檢出雜質在原料和制劑中含量基本相當。結合加熱(105℃)破壞試驗和加速試驗結果可知，雜質H為熱降解雜質，制劑生產過程可能由干燥環節降解產生。綜上可知，膠囊劑中的雜質水平基本由其原料藥的雜質水平決定，提示伊曲康唑膠囊中的雜質主要來源于原料藥，控制好原料藥生產工藝是保證制劑質量的關鍵。從制劑有關物質檢驗情況推測，原研地產化產品由原料引入的工藝雜質較低。

將此次雜質譜分析結果與2015年國抽結果進行比較，發現各企業雜質檢出個數及雜質總量基本一致。2015年國抽中，企業A的樣品和原料中未檢出編號為4的未知雜質，推測企業A雜質譜變化由更換原料引起。

采用優化的HPLC方法對諸企業樣品有關物質進行測定。檢驗結果顯示，企業A的樣品雜質總量結果高于現行標準方法，企業B、C、D的樣品檢測結果與現行標準方法測定結果基本一致。

3.3 溶出度比較

131批樣品溶出度均值分布在83%～105%之間，繪制溶出度均值頻數分布圖(圖3)，可見結果呈正態分布，溶出度限度設置合理。

3.3.1 不同企業產品的溶出度/溶出行為差異

比較各企業樣品的批內溶出度結果，發現企業D的產品個別批次單粒溶出度小于80%，有2批樣品的批內溶出度RSD大于10%，5批樣品的批內溶出度RSD處于5%～10%之間，與企業A、B、C的產品相比，批內差異性較大，RSD散點圖見圖4。分析其可能原因，企業D的處方中主藥成分與輔料的配比較低，使得主藥成分在溶出介質中釋放較慢。我們注意到，在2015年國家藥品抽驗中，伊曲康唑膠囊檢驗標準為ChP 2010年版二部，溶出度檢查取樣時間為45 min，企業D有2批樣品溶出度檢查不符合規定，其余批次樣品的溶出度批內差異也較大[9]。在ChP 2015年版第一增補本和2020年版二部中，伊曲康唑膠囊溶出度檢查將取樣時間由45 min延長至60 min，企業D的產品溶出度檢查合格率100%，但批內的溶出結果差異仍然較大。鑒于企業D產品采用特殊的微丸制備工藝及添裝工藝，且其伊曲康唑膠囊已被確定為參比制劑，提示目前Chp的溶出度測定方法可能并不能完全客觀評價該工藝產品的質量。

采用方法1、方法2、方法3繪制溶出曲線(圖5)。對溶出數據進行比較，發現方法1中企業D的3批樣品在第1個取樣點(15 min)的溶出量的RSD均大于20%，在第二個取樣點的(30 min)累計溶出量的RSD均大于10%；企業A、B、C的9批樣品中有3批樣品在第1個取樣點(15 min)的溶出量的RSD大于20%，有1批樣品在第2個取樣點的(30 min)累計溶出量的RSD大于10%。方法2中企業D的3批樣品僅1批樣品在第2個取樣點的(20 min)累計溶出量的RSD大于10%；企業A的3批樣品在第1個取樣點(10 min)的溶出量的RSD均大于20%，企業B、C各有1批樣品在第2個取樣點的(20 min)累計溶出量的RSD大于10%。方法3中4個企業12批樣品在第1個取樣點(10 min)的溶出量的RSD均小于20%，在第二個取樣點的(20 min)累計溶出量的RSD均小于10%。上述結果提示，使用沉降籃和在介質中加入適宜適量的表面活性劑可明顯降低批內差異，根據不同制劑處方工藝的特點，選擇適宜量的表面活性劑是建立合理溶出度檢測方法的關鍵。

按《普通口服固體制劑溶出度試驗技術指導原則》要求，采用非模型依賴多變量置信區間法和f2相似因子法比較國內3個生產企業的樣品與參比制劑(企業D)的差異。結果顯示，企業A樣品的溶出曲線與參比制劑均不具有相似性；企業B、C的6批樣品在3種方法下的溶出曲線不能同時與參比制劑具有相似性?？偟膩碚f，企業A、B、C的產品尤其是企業A產品的溶出偏快，與原研地產化藥品存在差異。

3.3.2 溶出度分析方法合理性探討

溶出度試驗是模擬藥物體內釋放過程的理想體外方法。伊曲康唑為難溶性弱堿性藥物，其制劑的工藝與處方決定藥物體內的釋放過程，如何建立體內外相關的溶出度測定方法是其難點。本文的結果提示，采用相同的溶出度方法評價不同工藝、處方的伊曲康唑膠囊質量具有一定的風險，針對具體產品工藝、處方的差異制訂不同的溶出度方法勢在必行。

3.4 穩定性考察

穩定性實驗中，各企業樣品性狀變化存在較大差異，見圖6。企業A的樣品在1個月后內容物小丸表面即有少量粉末脫落；2個月后小丸表面有大量粉末脫落，小丸結構破壞嚴重。企業C的樣品在2個月后小丸表面開始失去光澤，有輕微粉末脫落；3個月后小丸變化與2個月基本一致。企業B和D的樣品在3個月后內容物小丸結構依然完整，未發現表面有粉末脫落，但出現個別小丸黏連的現象。有關物質檢查結果顯示，企業A的樣品中雜質H由未檢出增大至0.3%左右；企業C的樣品中該雜質由未檢出增大至0.2%左右；企業B的樣品中該雜質由0.1%左右增大至0.3%左右；企業D的樣品該雜質由未檢出增大至0.09%，增速最緩。從性狀和雜質變化情況可以看出，各企業樣品內容物小丸穩定性由小到大依次為：企業A＜C＜B＜D，可以看出各企業的處方與生產工藝存在較大差異。提示仿制藥一致性評價中，產品處方和工藝直接影響其與參比制劑的一致性。

3.5 水分活度比較

對4個企業的102批伊曲康唑膠囊的水分活度進行測定，每批樣品平行測定3份，3次測定結果顯示，溫度的變化會引起水分活度結果的變化，為減小溫度的影響，盡量選取接近25.25℃時測定的水分活度結果繪制伊曲康唑膠囊溫度-水分活度簇狀柱形圖(圖7)。由圖可知，4個生產企業的產品水分活度均低于0.60，較低的水分活度限制了潛在微生物的生長繁殖，提示該產品微生物污染風險較小。另外還可以看出，在較小的溫度范圍內，企業D的產品水分活度結果維持在0.4左右，一定程度上反映了該企業生產工藝的穩定性，其余3個企業的產品水活度波動相對較大。

4 總結

按法定標準檢驗，伊曲康唑膠囊合格率為100%，較2015年國評合格率94.7%[9]有明顯提升，結合探索性研究情況認為，伊曲康唑膠囊總體質量情況較好。探索性研究結果顯示，伊曲康唑膠囊內容物小丸的穩定性與其溶出行為存在一定的相關性，穩定性差的溶出速度快。國內3個生產企業與原研地產化藥品的溶出行為均存在不同程度的差異，在仿制藥質量與療效的一致性評價工作中，應對處方工藝的合理性進行分析，以保證藥品療效。此外，現行的質量標準有關物質和溶出度檢查方法存在不足，需進一步完善。