復元飲合劑質量標準研究

李文靜　金衛洲　柳茜　劉軍

【摘 要】 目的：制定復元飲合劑的質量標準，為臨床提供治療小兒疳積證有效制劑。方法：參照中藥制劑備案實施細則對復元飲方中不少于1/3的藥味進行薄層定性研究并對指標成分白芍苷進行高效液相色譜法（HPLC）含量測定。結果：建立的白芍、甘草薄層色譜（TLC）通過方法學驗證，主斑點清晰，分離度良好;芍藥苷含量在4.80～24.00μg/mL與峰面積分值呈良好的線性關系（R=0.9999），轉移率高達71.39%。結論：所建立的定性定量方法分離度好、簡便、專屬性好，可用于復元飲合劑的質量控制。

【關鍵詞】 復元飲;質量標準;芍藥苷

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】A? 【文章編號】1007-8517（2022）07-0053-05

基金項目：2020年度銀川市學術技術帶頭人儲備工程項目;無機陶瓷膜分離技術在復元飲口服液制備工藝中的應用-寧夏醫科大學校級項目（XM2020128）;銀川市中醫醫院中藥學（制劑）重點?？平ㄔO項目，銀川市科學技術局立項（2019-ZD-001）。

作者簡介：李文靜（1989-），女，漢族，主管中藥師，研究方向為醫院制劑開發研究與質量檢測。E-mail：632780708@qq.com

通信作者：劉軍（1971-），男，漢族，主任藥師，研究方向為醫院制劑開發研究。E-mail：nxljj@163.com

The Study of Quality Standard of Fuyuan Drink Mixture

LI Wenjing JIN Weizhou LIU Qian LIU Jun*

Yinchuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Yinchuan 750001，China

Abstract：Objective To establish the quality standard of Fuyuan drink mixture and Tprovide effective preparation for clinical treatment of infantile malnutrition syndrome.Methods According to the implementation rules for the record of traditional Chinese medicine preparations， the thin-layer qualitative study was carried out on the flavor of no less than 1/3 of Fuyuan Yin prescription， and High performance liquid phase chromatography （HPLC） was used for the content of in the preparation.Results TLC spots were clear and well-separated without negative interference，the line range of Paeoniflorin was 4.80-24.00μg/mL， respectively，with good linear relationship with the peak area integral value（r=0.9999），the transfer rate was as high as 71.39%.Conclution The qualitative and quantitative method with good resolution and was simple ，convinient ， and reliable with good precision，It can be used for the quality control of Fuyuan drink mixture.

Key words：Fuyuan Drink Mixture;Quality Standard; Paeoniflorin

疳積尤多見于5歲以下小兒，又稱“小兒疳積”，屬中醫兒科四大要證（痘、麻、驚、疳）之一，是一種多由喂養不當或其他疾病導致小兒脾胃受損，水谷不化，精微不布，氣血運行不暢的慢性消耗性疾病，屬虛實夾雜，多采用消積健脾的治療原則。西藥在治療疳積中手法單一，效果不佳，而市面常用中成藥因考慮攜帶、使用和儲存方便，多采用顆粒劑和丸劑，但用于小兒疳積起效略慢。目前臨床亟需挖掘一款處方精簡、療效明確、起效迅速的合劑。復元飲是我院兒科應用多年的臨床經驗方，主要用于治療小兒濕熱疳積，食欲不振。藥味少、組方精當、療效明確，在臨床中受到醫生及患者的一致好評。該方在四君子的基礎上進行加減化裁，補益脾胃之氣，與“疳皆脾胃病，亡津液之所作”的病因病機相吻合。全方攻補兼施，藥方平和，益氣健脾補肺的同時健胃消食，從而改善疳積導致的肺苷、肝苷、脾苷各類癥狀。本文旨在通過建立制劑中甘草及白芍的薄層鑒別，并對方中芍藥苷含量進行測定，以期建立該制劑的質量標準，進而通過臨床驗證形成療效穩定可控的治療小兒疳積的醫院中藥制劑，更好地推廣和提升中醫特色醫療技術水平。

1 材料與儀器

1.1 儀器 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，配有G1315D DAD檢測器）;Agilent 5TC-C18色譜柱（460mm×250mm，5 μm），KQ-250D B超聲清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）;電子天平（METTLER TOLEDO XS205，精度可達萬分之一）;SHZ-D（III）循環水式真空泵（鞏義市宇翔儀器有限公司）。

1.2 試藥 芍藥苷（批號：S-010-180416）、薄層G板（青島海洋化工廠分廠和煙臺市化學工業研究所，規格：50 mm×100 mm）、甘草苷（批號：111610-201106），水是超純水，乙腈為色譜純，其他均為化學純。復元飲合劑銀川市中醫醫院自制（批號：20201117、20200816、20200517）。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

1.陰性樣品溶液;2.芍藥苷對照品溶液;

3～5.三批供試品溶液

2.1.1 白芍 取本品20 mL，用氨試液調節PH至12，用水飽和正丁醇（1∶1）振搖提取3次，合并上層正丁醇液;用水洗至下層無色，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加乙醇適量使其溶解，作為供試品溶液。同供試品法制備缺本藥的陰性對照液。取對照品芍藥苷，用乙醇制成1 mg/mL的待用對照品溶液。分吸上述3種溶液各5 μL，點于同一G薄層板上，放置于有CHCL3-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（20∶3∶7∶0.1）展開劑的層析缸內，展開，取出，晾干。噴以適量10%硫酸乙醇顯色劑，揮干105 ℃加熱至斑點清晰后日光下檢視。如圖1所示。

2.1.2 甘草 取復元飲合劑20 mL，用1∶1乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，置水浴蒸干，殘渣加甲醇適量溶解，作為供試品溶液。取適量甘草苷對照品，用甲醇制成對照品溶液。參照供試品制備法制成缺甘草的陰性對照液。各吸取上述5 μL，分別點于同一薄層G板上，在乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶2∶2）展開劑的層析缸內展開，取出，晾干，噴以適量10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至顯色清晰并在365 nm紫光燈下檢視。如圖2所示。

1.陰性樣品溶液;2.甘草苷對照品溶液;

3～5.三批供試品溶液

2.2 HPLC含量測定

2.2.1 色譜條件 參考《中國藥典》2020年版一部中白芍含量測定項的條件，選用以C18為填充劑（4.6 mm×250 mm，5 μm）。測定波長：230 nm;流動相：乙腈-0.1%磷酸液（14∶86），要求理論論板數≥2000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱量適量芍藥苷對照品，50%甲醇定容制成0.24 mg/mL對照溶液備用。

2.2.3 供試品溶液提取溶劑的考察 精密量取樣品溶液1 mL，共4份，置10 mL容量瓶中，用不同溶劑定容至刻度，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。按上述色譜條件進樣10 μL檢測，記錄峰面積。結果見表1。

結果表明，50%甲醇作為溶劑，芍藥苷含量較高，故選擇50%甲醇作為供試品溶液制備溶劑。

2.2.4 供試品溶液的制備方法 精密量取本品1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，即得。

2.2.5 陰性對照溶液的制備 按照復元飲工藝路線及供試品制備法制備不含白芍的陰性對照溶液。

2.2.6 專屬性考察 分別取上述3種溶液，按 “2.2.1” 項下條件進樣10μL，結果表明：復元飲供試品溶液在芍藥苷對照品溶液色譜峰保留時間處有相應色譜峰出現，而陰性對照溶液無對應色譜峰，說明陰性對照對芍藥苷的測定無干擾，所建立的色譜方法專屬性良好，分離度良好（大于1.5），其理論塔板數>2000。如圖3所示。

2.2.7 標準曲線 制備3.6、4.8、7.2、9.6、12、24 μg/mL的對照品溶液，按 “2.2.1” 項下條件進樣，測定峰面積。分別以6種對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得方程y=9514.4X-11.052，R2 =0.9999。結果表明，芍藥苷在4.80～24.00 μg/mL范圍與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.8 精密度測定 取濃度為 12.00 μg/mL的芍藥苷對照品溶液，進樣10 μL檢測，重復進樣 6 次，芍藥苷峰面積，結果RSD為0.46%，表明儀器精密度良好。

2.2.9 重復性試驗 取6 份復元飲各1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，制備供試品溶液，進樣10 μL檢測，測定芍藥苷含量，結果RSD為1.81%，表明方法重復性良好。

2.2.10 穩定性試驗 精密量取同一供試品溶液，分別于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 各進樣1次，每次進樣10 μL檢測，測定芍藥苷峰面積，RSD為1.57%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.2.11 加樣回收率試驗 精密量取已知芍藥苷成分含量的復元飲樣品9份，每份1 mL，置10 mL容量瓶中，分別按高、中、低濃度芍藥苷與所取供試品中其含量之比為1.5∶1，1∶1，0.5∶1精密加入，加50%甲醇至刻度，搖勻，離心，取10 μL進樣檢測，計算回收率，結果表明芍藥苷平均回收率為93.73%，符合《中國藥典》2020版規定的范圍需要確定范圍，且RSD%<1%，表明本法的準確度符合要求。見表2。

2.2.12 樣品測定 取樣品6批，照含量測定方法操作，測定其芍藥苷的含量，分別為1.48、1.67、1.08、1.02、1.25、1.24 mg/mL。

2.2.13 白芍藥材含量測定及同批制劑轉移率的計算 取六批復元飲樣品中的原藥材白芍，參照《中國藥典》2020年版一部中白芍含量測定項供試品制備法測定芍藥苷含量，并計算其轉移率約為71.39%。

3 討論

3.1 TLC方法建立 在對組方中甘草及白芍進行薄層鑒別的過程中，除了對專屬性及重現性進行考察外，還通過對比不同廠家薄層板、不同溫度（6℃、30℃）及濕度（38%、80%）下的展開效果進行耐用性的考察，結果顯示所建立的相應薄層鑒別方法專屬性、重現性等良好，且陰性均無干擾，適宜于該方白芍與甘草的薄層定性鑒別。

3.2 供試品制備方法的選擇 在提取溶劑選擇方面，以色譜峰的吸收強度及分離度為考察指標，選取了甲醇、50%乙醇、乙醇、50%乙醇為提取溶劑，結果表明50%甲醇提取液中芍藥苷色譜峰的數目以及分離度明顯優于其他的提取液，因此最終選擇50%甲醇作為提取溶劑。

3.3 HPLC指標成分的選擇 吳鞠通在《溫病條辨》篇中首次將本病治法作出總結，提出治疳九法，其為：疏補中焦;升降胃氣;升陷下之脾陽;甘淡養胃;調和營衛;食后擊鼓，以鼓動脾陽;傷其脾胃者，調其飲食;如果生有疳蟲，再少用苦寒酸辛;若見疳即予苦寒殺蟲便誤矣，用丸藥緩運脾陽，緩宣胃氣。小兒疳證雖有專病專藥治之，但目前亦有特殊辨證論治，典型的治則治法包括：甘淡清補法、健脾消積殺蟲法、清熱解毒法等。白芍性味酸寒，斂陰斂汗，具有很好地改善小兒疳積后虛熱傷陰的癥狀，方中與炙甘草配伍具有養血斂陰，柔肝緩急止痛的功效，可以有效改善小兒疳積后引起的肚腫青筋，胃脘脹痛的癥狀，現代且藥理研究表明其具有抗炎鎮痛、抗抑郁、抗癌、抗血栓、降血脂、降 糖、保肝、改善心肌肥厚、改善骨關節炎、改善斜視性弱視、改善缺血再灌注的影響、通便、減毒增效的作用，同時對口腔扁平苔蘚、硬皮癥、高泌乳血癥具有治療作用。因此，本研究選擇芍藥苷為檢測指標。為了更有效并全面的控制其質量，后期筆者正在對其制劑的穩定性進行跟蹤考察，以期為臨床治療小兒疳積等安全用藥提供有力的科學依據。

4 結論

中藥成分復雜，提取過程中的浸潤與滲透、解析和溶解、擴散與置換階段相互聯系，其中任何一個階段受阻礙或限制，都將導致有效成分轉移率降低并直接影響中成藥的療效。本研究建立了HPLC測定復元飲合劑中芍藥苷含量的方法，六批樣品中芍藥苷含量均符合要求，且芍藥苷轉移率高達70%以上，充分證明我院研制的復元飲處方工藝合理、質量可控、穩定性良好。以上試驗結果表明，所建立的質量標準方法操作簡便，結果準確，靈敏度高，重現性好，回收率好，干擾小，且陰性對照溶液對測定無干擾，可以有效地控制復元飲合劑的內在質量。

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（收稿日期：2021-09-01 編輯：陶希睿）