GPR160 介導骨癌痛大鼠脊髓中樞敏化的機制研究*

骨癌痛 (bone cancer pain, BCP) 常發生在癌癥晚期的骨轉移病人中，如乳腺癌、肺癌和前列腺癌

，引起劇烈的疼痛反應。2020 年全世界約有1000 萬人死于癌癥

，約75%的癌癥晚期病人經歷中度或重度疼痛，至少一半的病人使用現有的藥物無法有效的緩解

。阿片類藥物作為癌痛三階梯用藥，發揮著重要的作用，但也存在明顯的呼吸抑制、藥物依賴等不良反應

，全世界超過1500 萬人經歷著阿片類藥物使用障礙 (opioid use disorder, OUD)，急需尋找新的藥物和作用靶點。目前BCP 發病機制不清，最新的研究專注于BCP 的細胞和分子機制，以開發新的靶向治療

。

1.2 基于項目學習理論的復習 項目學習是一種通過完成一個項目(課題)來促進學習者學習的方式，它以建構主義為理論指導，以小組合作的方式進行規劃和解決項目任務。項目學習強調以項目任務驅動學生學習，它以信息加工心理學和認知心理學為基礎，強調學習的過程以學生的主動、合作學習為主，認為學習是學生自主構建知識的過程[2]。根據項目學習理論，新高考生物學復習尤其是“二考”復習從學生出發、以學生的問題為導向，指導學生對考試內容進行自主構建、合作交流完成復習任務，達到對知識的深度學習和熟練應用。

G 蛋白耦聯受體 (G protein-coupled receptors,GPCRs) 是人類最大的膜蛋白受體家族，已經發現超過1000 個人類GPCRs

。GPCRs 作為藥理學靶點一直備受關注，靶向GPCRs 的藥物占全球治療藥物市場份額約27%

。GPCRs 廣泛分布于外周和中樞神經系統，是疼痛治療最重要的靶點之一，針對每一種GPCRs 亞型特異性的藥物開發，都可能會提高鎮痛藥的療效，并最大限度地減少不良反應

。

GPR160 (G protein-coupled receptors 160) 受體在物種間高度保守，廣泛存在于人類和嚙齒動物中樞神經系統中

。研究表明，GPR160 受體參與了神經病理性疼痛的產生和維持，鞘內注射GPR160-siRNA 能有效緩解痛覺過敏現象

。目前尚未發現GPR160 受體在BCP 中的相關報道，GPR160 受體是否參與BCP 的發病機制，以及如何影響BCP 的發生發展，將是本研究探討的內容。本研究首次發現GPR160受體參與BCP大鼠脊髓中樞敏化的作用，為開發以GPR160 受體為靶點的藥物提供實驗依據。

方 法

1.主要試劑和儀器

主要試劑：GPR160 抗體（美國Invitrogen）、GPR160-siRNA（上海吉瑪）、BCA 蛋白濃度試劑盒（碧云天）、逆轉錄酶和SYBR

Green (Thermo Scientific)、ELISA 試劑盒（聯科生物）。

CatWalk 步態分析結果顯示，與BCP 組大鼠相比，siGpr160 組大鼠在最大觸地面積(

＜ 0.001)、最大觸地面積時最大壓強(

＜ 0.05)、平均壓強(

＜0.001)顯著增加（見圖3D-F）。MWT 結果提示，鞘內給藥后，siGpr160 組MWT 在BCP 術后第10 天(

＜ 0.05)、12 天(

＜ 0.001)顯著升高（見圖3G）。Western Blot 結果顯示，與BCP + sieGfp 組相比，BCP + siGpr160組GPR160蛋白顯著下降（

＜ 0.001，見圖3H）。

在嫁接之后要對嫁接苗利用拱棚覆蓋進行溫度管理，頭3天白天保持28-30℃，夜間18-20℃，土溫25℃左右。3天后逐漸降低溫度，白天在25-27℃，夜間17-20℃。6天后可把小拱棚的薄膜掀開一部分，逐漸擴大，逐步降低空氣相對濕度，8天后去掉小拱棚。

2.實驗動物與分組

雌性SD 大鼠，體重180～200 g，由浙江省醫學科學院實驗中心提供（倫理審批號：2021-JUM 097），動物飼養于22±2℃室溫下，維持大鼠12 h/12 h 晝夜節律，自由攝食攝水。本實驗嚴格按照國際疼痛學會 (International Association for the Study of Pain,IASP) 關于應用動物進行疼痛研究的倫理綱要進行操作，整個過程盡量減少動物的不適和使用量。

“大搬快治”工作開展以來，各級黨委政府領導高度重視，省、市主要領導、分管領導25次對“大搬快治”工作作出批示。層層落實工作責任，通過及時召開各類動員會、部署會、推進會，白天干完晚上干，密集開展實地調研、督查指導，發現一個問題，當場解決一個問題，真正做到問題不過夜、工作不停歇，有力推動工作落實。如景寧畬族自治縣實行“督戰令”制度，縣委書記、縣長親自督導“大搬快治”工作；蓮都區落實“后進約談”機制，對工作不力的鄉鎮（街道）實行問責約談，有效保障了“大搬快治”的工作進度。

雌性SD 大鼠92 只，第一部分分組：正常組（Na?ve 組，

= 8）、假手術組（Sham 組，

= 8）和骨癌痛組（BCP 組，

= 8）進行

Frey 機械痛閾測定，其中Sham 組和BCP 組在第18 天取材用于CT (

= 3)、HE (

= 3)和免疫熒光(

= 2)。第二部分分組：Sham 組和BCP 組，Sham (

= 8)組和BCP 組(

= 8)用于RT-PCR 檢測GPR160 的mRNA 表達；Sham 組、BCP 6 天、BCP 12 天和BCP 18 天用于Western Blot 檢測GPR160 蛋白。第三部分分組：Sham 組(

= 8)、BCP 組(

= 8)、BCP +sieGfp 組(

= 8)和BCP + siGpr160 組(

= 8)用于

Frey 機械痛閾測定和步態分析，另Na?ve 組 (

=4)作為正常組對比；其中Na?ve 組(

= 4)、Sham 組(

= 4)、BCP 組(

= 4)和BCP + siGpr160 組(

= 4)用于TNF-α、IL-1β 和IL-6 的Western Blot 和ELISA檢測。

3.實驗流程

第一部分：實驗動物適應環境3 天后，于BCP造模前、造模后6 天、12 天和18 天進行

Frey機械痛閾測定，其中于造模后12 天取材進行免疫熒光實驗，第18 天取材進行HE 和CT 檢測。第二部分：實驗動物適應環境3 天后，進行BCP 造模（Sham 組注射滅活癌細胞），于造模后6 天、12天和18 天取材Western Blot 實驗；于造模后第12天取材（Sham 組和BCP 組，

= 8）進行RT-PCR實驗。第三部分：實驗動物適應環境3 天后，進行

Frey 機械痛閾測定，然后BCP 造模（Sham 組注射滅活癌細胞），于造模后第3 天進行鞘內置管并驗證成功后，于造模后第7 天、8 天、9 天、10天、11 天和12 天鞘內給藥，并于造模后第6 天、7 天、8 天、9 天、10 天、11 天和12 天鞘內給藥1 h后進行

Frey 機械痛閾測定，第12 天鞘內給藥1 h 后進行步態分析，然后取材進行Western Blot 和ELISA 實驗。

4. BCP 模型的建立

參照我們之前的方法

建立大鼠BCP 模型。將保存于液氮中的Walker 256 乳腺癌細胞株取出，37℃水浴復蘇，取0.5 ml (2 ×10

) Walker 256 細胞種植于SD 大鼠腹腔，3～4 天后出現腹水。抽出腹水，用Hank's 液洗滌3 次，細胞計數。采用戊巴比妥鈉麻醉(50 mg/kg)，在左脛骨中下1/3 處縱向切開皮膚暴露脛骨，用微量注射器抽取10 μl Walker 256 乳腺癌細胞(1×10

)，從骨面向干骺端穿刺緩慢注入骨髓腔，Sham 組注入10 μl 滅活癌細胞，停留1 min 后拔出，立即用醫用膠封堵針孔。

5.鞘內置管給藥

ELISA檢測結果顯示，與Na?ve或Sham組相比，BCP 組TNF-α (

＜ 0.001)、IL-1β (

＜ 0.001)和IL-6(

＜ 0.001)顯著增高；與BCP 組相比，siGpr160 組TNF-α (

＜ 0.01)、IL-1β (

＜ 0.01)、IL-6 (

＜ 0.001)顯著下降（見圖4A-C）。Western Blot 結果顯示，與Na?ve 或Sham 組相比，BCP 組TNF-α (

＜ 0.001)、IL-1β (

＜ 0.001)和IL-6 (

＜ 0.001)顯著增高；與BCP 組 相 比，siGpr160 組TNF-α (

＜ 0.01)、IL-1β(

＜ 0.05)、IL-6 (

＜ 0.05)顯著下降（見圖4D-G）。

6.機械痛閾的測定

采用

Frey 檢測BCP 大鼠機械刺激縮足反射閾值 (mechanical withdrawal threshold, MWT)

，安靜環境下，將大鼠置于底部為0.5 cm×0.5 cm 鐵絲網格有機玻璃箱(20 cm×20 cm×25 cm)中，適應環境30 min。采用

Frey 電子式機械測痛儀測定MWT，對準大鼠左側足底中間部位，逐漸加壓，當大鼠出現縮足、舔足、甩足時記錄壓力值，測定3 次，每次間隔10 s，取其平均值為MWT (g)。在BCP 術前、術后第6 天、12 天、18 天測定大鼠左足MWT (g)。BCP + siGpr160 組大鼠在BCP 術后7～12 天連續鞘內注入GPR160-siRNA，對照組鞘內注入GPR160-sieGfp，于BCP 術前、術后6 天、8 天、10 天、12 天鞘內給藥1 h 后進行測痛。

7.步態分析

使用CatWalk 步態分析系統對運動中的大鼠進行步態分析，步態分析已被證明是測量疼痛相關行為的有效方法。光線從通道底部熒光管中發出，穿過玻璃板，大鼠腳印與玻璃板接觸時，光線向下反射，下方的高速攝像機捕捉到大鼠的腳印圖像，全程采集大鼠腳印的參數。采集前進行訓練，以勻速、無停頓地通過通道為準。CatWalk 系統常采用腳印的接觸面積和強度作為衡量指標

，因此，本研究采用以下三個指標來評估骨癌痛前后的相關行為：①最大觸地面積 (max contact area)：足部接觸最多時的面積；②最大觸地面積時最大強度 (max contact max intensity)：足部接觸玻璃板時最大壓強；③平均強度 (mean intensity)：足部觸地面積最大時的平均強度。為了減小差異，本研究采用左后肢/右后肢比值來消除其他因素影響，數據采用左后肢/右后肢百分比形式。

8. CT 三維重建

建立骨癌痛模型后18 天，腹腔注射戊巴比妥鈉(100 mg/kg)深麻醉后取材（造模側下肢），對大鼠脛骨進行CT 三維重建，觀察骨質破壞情況，根據之前的研究

，CT 掃描參數如下：螺旋掃描，管電壓為120 kVp，層厚1 mm，層間距1 mm，核：U30u 中等光滑，SD 大鼠脛骨的CT 成像為高分辨率（視野為100 mm）。所有圖像通過西門子PACS系統軟件處理和分析。

9. HE 染色

建立骨癌痛模型后18 天，腹腔注射戊巴比妥鈉(100 mg/kg)取材，大鼠左側脛骨經4%多聚甲醛固定、脫鈣、石蠟包埋、切片后進行HE 染色。使用顯微鏡（日本Olympus）采集分析圖像，觀察腫瘤生長及骨質破壞情況。

10. Western Blot

11. Real-time PCR

大鼠脊髓背角取材（同Western Blot 步驟），Trizol 法提取總RNA，測定濃度后使用逆轉錄試劑盒(Thermoscientific RevertAid cDNA synthesis Kit, USA) 將1000 ng RNA 逆轉錄為cDNA，使用PowerUp SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems)在實時熒光定量PCR 儀中進行Real-time PCR 反應，引物由上海生工設計合成。GPR160 Forward:5'-TTCCTTCGCTTACGGCTTCTTGC-3', Reverse: 5'-GCTTGGCTCTGGACAGATTAC-3'; β-actin Forward:5'-ATCACTATCGGCAATGAGCGGTTC-3', Reverse;5'- TGTTGGCATAGAGGTCTTTACGGATG-3'。PCR擴增條件為：(50℃, 120 s; 95℃, 120 s)；擴增循環 40次(95 ℃, 15 s; 60 ℃, 60 s)；溶解(95 ℃, 15 s; 60 ℃,60 s; 95 ℃, 15 s)。熒光實時定量PCR 采用2

法分析，相對表達量采用與β-actin 的比值；

ct、

ct 計算公式：

ct = 目的基因CT 值-內參基因CT 值；

ct =

ct（處理組）-

ct（對照組）。

12.免疫熒光

CatWalk 步態分析系統作為研究機械性疼痛的方法

，本研究采用觸地面積和壓強作為參考指標，數據分析結果顯示，與Sham 組相比，BCP 組大鼠在最大觸地面積(

＜ 0.001)、最大觸地面積時最大壓強(

＜ 0.05)、平均壓強(

＜ 0.01)均顯著降低（見圖3 A-F）。

13. ELISA

大鼠BCP 造模后12 天取材（同Western Blot步驟），裂解液提取組織蛋白，10 倍稀釋蛋白上清，參照文獻

方法，并依據試劑盒說明書進行操作，加樣、富集孵育、洗板、加酶標抗體、再次洗板、底物顯色和終止反應，然后酶標儀讀取450 nm 下樣本的OD 值。擬合標準曲線，將樣本OD 值代入方程，計算樣品濃度。

14. 統計學分析

大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(100 mg/Kg)深麻醉后，在冰上快速取出大鼠脊髓腰段膨大處(L

-L

)脊髓背角，液氮儲存。組織40 mg 加入RIPA 裂解液（含PMSF和磷酸酶抑制劑）300 μl，超聲破碎勻漿，冰上裂解30 min，4℃ 14,000 r/min 離心20 min，吸取上清。BCA 法測定蛋白濃度，上樣緩沖液1:4配比，每孔加入40 μg 蛋白樣SDS-PAGE 膠電泳，濕法轉膜，5% BSA 室溫封閉2 h，一抗4℃孵育過夜，二抗室溫2 h，ECL 顯影。使用Image J 軟件對圖片進行灰度分析，GPR160 蛋白相對表達量以GPR160 蛋白條帶灰度值與GAPDH 條帶灰度值比值表示。

(4)螺栓的標高控制。在螺栓高度的控制環節，其關鍵是安裝時入柱螺桿與柱箍筋的焊接質量和定位標高控制，而對過程的跟蹤復查僅是糾偏。

結 果

1.骨癌痛模型的建立

痛閾結果顯示，與Na?ve 組或Sham 組相比，BCP 組大鼠在6 天(

＜ 0.05)、12 天(

＜ 0.001)、18天(

＜ 0.001)的MWT 顯著降低（見圖1A）。CT成像顯示，與Sham 組相比，BCP 組大鼠在術后18天左側脛骨出現明顯的骨質破壞（見圖1B）。脛骨組織病理學結果顯示，Sham 組骨髓腔可見正常的骨小梁結構（見圖1C），而BCP 組骨髓腔內可見被侵蝕的骨小梁結構，骨髓腔充滿核大深染的腫瘤細胞（見圖1D）。

2. GPR160 在BCP 大鼠脊髓中的表達

免疫熒光結果顯示，與Sham 組相比，BCP術后12 天GPR160 的表達增強（見圖2A 和圖2C）；在BCP 術后12 天脊髓背角上，與對側(Contra)相比，造模側(Ipsi)的GPR160 表達增強（見圖2B）。Western Blot 結果顯示，與Sham 組相比，GPR160 蛋 白 在BCP 術 后6 天(

＜ 0.05)、12 天(

＜ 0.01)、18 天(

＜ 0.001)明顯增高（見圖2D）。Real-time PCR 結果顯示，與Sham 組相比，BCP 組GPR160 mRNA 表達顯著增加（

＜ 0.001，見圖2E）。

3.鞘內注射GPR160-siRNA 對BCP 大鼠MWT及GPR160 蛋白的影響

大鼠BCP 造模后12 天，戊巴比妥鈉(50 mg/kg)深度麻醉，經心尖穿入靜脈針至升主動脈，快速灌注PBS 500 ml 后，再用4%多聚甲醛250 ml 灌注固定，將脊髓取出放入4%多聚甲醛固定6 h，然后在15 %和30%蔗糖溶液中梯度脫水48 h，擦干水分后使用OCT (Sakura)在-20℃包埋，切成16 μm厚的切片置于載玻片上，放入-80℃保存。切片使用PBS 洗滌，5% BSA 封閉室溫1 h，然后在4℃冰箱孵育一抗GPR160 (orb215127, Biorbyt, Cambridge,UK) 過夜，第2 天室溫復溫30 min, PBS 洗滌后，在室溫下二抗[Abcam, donkey anti-rabbit IgG H&L(Alexa Fluor

488), ab150073]孵育50 min, PBS 洗滌后滴加DAPI (Vectashield-DAPI mounting medium)封片，使用熒光共聚焦顯微鏡 (Zeiss, Germany) 采集圖像。

實驗所用主要儀器：實時熒光定量PCR 儀(Applied Biosystems)、電泳儀(Bio-Rad)、多功能酶標儀(Bio Tek)、超微量分光光度計(Thermo Scientific)、超聲波細胞粉碎機（新芝）、共聚焦顯微鏡(Zeiss,Germany)、動物步態分析系統(CatWalkXT)、化學發光成像系統(GeneGnome)、

Frey 電子式機械測痛儀(BME-404)。

新興媒體的發展則打破了時空的局限，讓圖書館信息服務成為一個不受時空限制的交互平臺。讀者即可以隨時隨地通過各種智能終端實現對圖書館資源的訪問和數據下載，同時還可以利用即時通信工具或網絡論壇方式進行問題的咨詢和發布，館員也可以實現隨時隨地的回復相應的咨詢問題，使得館員為讀者服務的手段更加便捷化。

4.鞘內注射GPR160-siRNA 對骨癌痛大鼠脊髓TNF-α、IL-1β 及IL-6 蛋白表達的影響

將大鼠戊巴比妥鈉(50 mg/kg)麻醉后，在L

棘突處做一縱向切口，分離L

棘突旁肌肉和椎板，切除L

棘突，暴露L

椎間隙，用26 G 針刺破黃韌帶和硬脊膜，經破口處置入PE-10 導管2 cm，18 G 硬膜外穿刺針在皮下穿一條隧道至頸背部，外露2 cm 固定，外口封閉，防止腦脊液外漏。術后第2 天經PE-10 管注入2%利多卡因15 μl 測試，30 s內出現下肢麻痹，30 min 左右恢復，表明置管成功。置管后單籠飼養，觀察2 天，出現肢體感覺或運動障礙、導管脫出的剔除，于BCP 造模后第7 天、8 天、9 天、10 天、11 天、12 天開始鞘內注射GPR160-siRNA 或者對照藥物 (GPR160-sieGfp)，在BCP 造模后第12 天取材進行實驗。

實驗需測取同種激勵不同電場條件下經減振器減振后的加速度衰減的數據。實驗采用型號為JZ-5激振器給減振器提供正弦力F，采用DH5299動態信號采集器和GF-20型號的功率放大器對激振器的振幅A和頻率ω進行控制以及采集各傳感器的數據，加速度傳感器型號是YJ9A的壓電傳感器；壓電力傳感器的型號為YFF-1。按照上述的實驗器材以及實驗想法設計出實驗系統示意圖3，其中虛線框中的直流穩壓電源和高壓放大器組成了直流穩壓高壓電源，為后續對比實驗提供1000V的穩定高壓。

討 論

骨癌痛 (BCP) 是一種復雜的慢性疼痛，國際上有多種研究骨癌痛的動物模型

，這些模型在一定程度上可以產生與臨床骨癌痛病人相似的疼痛狀態，以便觀察骨癌痛的發生發展、骨質破壞、中樞及外周組織中的分子生物學改變。

本研究采用姚明等

建立的骨癌痛模型，在造模后第6 天左足開始出現明顯的痛閾下降，且疼痛的程度和時間與行為學表現一致；HE 染色可見骨髓腔內大量癌細胞和遭到破壞的骨小梁，CT 三維重建再次驗證了BCP 組存在明顯的骨質破壞；行為學CatWalk 步態分析結果顯示，BCP 組大鼠左足在最大觸地面積、最大觸地面積時最大壓強、平均壓強出現顯著下降，這與相關的研究結果一致

，驗證模型成功。

隨著GPR160 受體的配體CARTp 的確定

，CARTp/GPR160 信號通路也被認為與獎賞、成癮、厭食和抑郁等有關

，其在疼痛中的作用也受到重視。Yosten 等

在坐骨神經慢性壓迫模型 (chronic constriction injury, CCI)上發現GPR160 受體參與痛覺過敏的發生。

4.3 詞匯密度與“個性風格詞匯”之計算。詞匯密度計算方中，實詞是指名詞、動詞、形容詞和副詞四類。根據Biber(2000：62),計算公式是：詞匯密度=實詞數÷總詞數×100%。Ure指出，詞匯密度可以作為區別語體正式程度的一個指標，某文本的詞匯密度越高，則該文本的語體越接近正式端；反之，若該文本詞匯密度低，則可以說明，該文本越靠近非正式端，越接近自然口語。據Ure(1971：443-452)的研究，口語的詞匯密度大概通常低于40%，而在書面語里，詞匯密度通常要超過40%。

為了探究GPR160 受體在骨癌痛中的表達，本研究發現，與Na?ve 或Sham 組相比，BCP 組大鼠脊髓中GPR160 蛋白和mRNA 表達量均顯著增加，提示BCP 上調脊髓中GPR160 受體的蛋白和mRNA的表達，這與之前在神經病理性疼痛中的研究結果一致

。為了進一步明確GPR160 受體在BCP 中的作用，本研究鞘內注射了GPR160-siRNA，結果顯示，與BCP + sieGfp 組 相 比，BCP + siGpr160 組 大 鼠MWT 顯著降低，GPR160 蛋白也顯著下降，提示抑制GPR160 受體有助于減輕骨癌痛；CatWalk 步態分析結果提示，與BCP 組相比，BCP + siGpr160 組大鼠在最大觸地面積、最大觸地面積時最大壓強、平均壓強出現顯著的上升，提示疼痛程度減輕。但同時也觀察到，鞘內注射GPR160-siRNA 并沒有完全逆轉BCP 模型大鼠的痛閾下降程度（MWT 曲線并未達到基線水平），提示GPR160 受體途徑可能是參與大鼠骨癌痛發生和維持的重要機制之一。

炎癥因子（TNF-α、IL-1β 和IL-6）在疼痛信號轉導過程中起著重要的作用

。本研究采用ELISA和Western Blot 檢測了骨癌痛大鼠脊髓中的炎癥因子，結果發現，與Na?ve 或Sham 組相比，BCP組大鼠脊髓中的炎癥因子顯著升高，而在鞘內注射GPR160-siRNA 后，炎癥因子水平出現顯著下降；與BCP + sieGfp 組相比，BCP + siGpr160 組的MWT 明顯的上升，提示抑制GPR160 受體后，減少了炎癥因子的釋放，減輕痛覺過敏反應。

1.3 觀察指標 對兩組患兒治療前后不同時段心率(HR)、呼吸頻率(R)、平均壓、血氧飽和度(SpO2)、新生兒行為神經評分(NBNA)以及治療后不良反應發生情況進行綜合評價[6]。NBNA神經功能評分主要包括行為能力、主動肌張力及原始反射等5個方面，總分>35分表示正常，<35分表示異常[7]。

雖然BCP 的發病機制不清，但目前的普遍觀點歸納為：①周圍神經損傷和炎癥介質引起的傷害感受器的外周敏化

；②脊髓中廣泛的神經化學變化導致的中樞敏化

；③下行抑制系統的喪失和異化系統的激活

。神經元和膠質細胞在BCP 發生發展過程中起著重要的作用，在腫瘤細胞置入大鼠骨髓腔后，小膠質細胞和星形膠質細胞活化，釋放大量的炎癥因子（如TNF-α、IL-1β 和IL-6），上調細胞表面的受體（如P2X3R、TLR4 和CX3CR1），并激活胞內信號通路（如PI3K/Akt、NF-kB 和ERK通路）

。研究發現抑制TNFR1 和IL-6R 可減輕BCP 大鼠機械痛和熱痛過敏

；同樣，IL-1β 也可通過增加NMDA 受體NR1 亞基的磷酸化促進BCP

。GPR160 受體在脊髓中的神經元、星形膠質細胞和小膠質細胞上表達

，參與神經元和膠質細胞的信號傳遞。在鞘內注射GPR160-siRNA 后，炎癥因子水平下降、MWT 上升，提示BCP 大鼠膠質細胞的活化和/或神經元-膠質細胞的交互作用可能受到了抑制。關于GPR160 受體在神經元-膠質細胞中如何影響BCP 的發展，我們將進一步深入研究。

本研究未進行GPR160 的過表達處理，沒有進一步探究GPR160 在興奮性神經元或抑制性神經元中的分布，接下來還將繼續GPR160 參與疼痛調節直接機制的研究。綜上所述，在本研究條件下，首次證明了GPR160 受體參與了脊髓水平大鼠骨癌痛的發生和維持，其機制可能與促進炎癥因子釋放有關，這為臨床治療提供了新的思路。

首次登記時，應嚴格按照規劃審批圖件準確客觀的劃分被登記建筑的基本單元情況，不僅無需僅依靠第三方測繪成果，反而可以發現其不當之處，有效杜絕一些測繪問題，例如重慶市于2010年就要求開發建設項目竣工后測繪的，必須結合規劃審批圖紙和房屋現場進行測量，房屋測繪結果應還原到規劃審批的設計內容中去[8]。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。

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