結腸鏡取組織中PRL-3、XRCC2 檢測在結直腸癌中的臨床意義

陸林 李亞男 儲凱

（南京市江寧區中醫院病理科，江蘇 南京 211100）

結直腸癌作為臨床常見消化系統的惡性腫瘤，因社會經濟的快速發展，人們的飲食生活發生較大變化從而導致結直腸癌發病人數日漸增加[1]。結直腸癌早期無明顯癥狀，隨著腫瘤的增大會出現排便失調、腹瀉、血便、便秘等，還會伴隨不同程度的腹部疼痛，到了癌癥晚期還會出現身體消瘦、營養不良、貧血等，發病最多的部位為乙狀結腸及直腸，但盲腸、橫結腸、升降腸等發病率也較高[1]。在胃腸道中的癌細胞通過血液循環等途徑擴散到其他臟器組織，癌細胞擴散范圍越大結直腸癌病癥越嚴重，因此，該病需早期診斷排查，預防癌細胞組織擴散。

目前臨床多用結腸鏡來進行結直腸癌檢測，通過纖維窺鏡進入患者胃腸道取樣進行活體細胞學檢查及病理學檢測，而據王琦[2]等學者發布的結直腸癌PRL-3 蛋白表達與臨床關系的Meta 分析和秦長江[3]等學者發布的 XRCC2 在結直腸癌中的表達及其臨床意義中表示組織中PRL-3 和XRCC2 均影響著結直腸癌的診斷。

因此，本文旨在探討PRL-3、XRCC2 檢測在結直腸癌中的診斷意義，為尋找結直腸癌的診斷指標，提高診斷效率提供一定基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院自2019 年3 月-2022 年3 月期間接收的78 例結直腸癌患者作為研究對象。其中男性51 例，女性27 例，年齡31-76 歲，平均年齡（45.38±6.49）歲，有結直腸癌癌家族史29 例，無結直腸癌家族史49例；腫瘤直徑：＜2.3 cm 35例，≥2.3 cm 43 例；組織分化程度：低分化38例，高分化40 例；TNM 分期：I-II 期52 例，III-Ⅳ期26 例；有淋巴結轉移31 例，無淋巴結轉移47 例；腫瘤部位：盲腸13 例、乙狀結腸21 例、橫結腸19 例、直腸9 例、升結腸3 例、降結腸13 例。

患者資料無顯著差異，具有可比性（P＞0.05）。

納入標準：（1）經手術病理檢查為結直腸癌；（2）可進行結腸鏡檢查患者；（3）為原發性直腸癌患者；（4）患者及家屬已簽署《知情同意書》；排除標準：（1）合并患有其他惡性腫瘤疾病患者；（2）臨床資料不全患者；（3）存在嚴重認知障礙及精神疾病患者；（4）預計生存時間小于4 m 患者。

1.2 方法

1.2.1 XRCC2 表達水平檢測

采用免疫組化檢測XRCC2 表達水平。結腸鏡取結直腸癌患者癌組織及癌旁組織后用濃度為4%的多聚甲醛（Paraformaldehyde，POM）溶液將組織樣本進行固定，石蠟包埋，再將整個蠟塊均勻切成多個4.5 μm 的薄片，將薄片用二甲苯進行脫蠟、用梯度乙醇進行脫水處理，隨后將0.01 mol?L-1的檸檬酸鈉加入到沸水中制作緩沖液進行高于熱修復，將緩沖液pH 值穩定在6.0，再轉至小火進行抗原修復，讓緩沖液持續沸騰10 min后，加入濃度為 3% 的過氧化氫（Hydrogen peroxide，H2O2）10 min，將內源性滅活過氧化氫酶進行滅活，滴加濃度為10%的山羊血清，整體封閉性孵育30 mim，加入XRCC2 抗體后將其放置在4℃的環境下，次日再拿出在37℃下復熱1 h 后，在加入生物素化二抗持續孵育1 h，DAB顯色后用蘇木素進行復染、分化。最后將脫水、封片放置顯微鏡下觀察。

1.2.2 PRL-3 表達水平檢測

采用免疫組化檢測PRL-3表達水平。樣本采集，包埋等方法同上。加入PRL-3 抗體（1:200）在37℃環境下繼續孵育2 h，再磷酸緩沖液漂洗，滴加生物素化二抗繼續在37℃環境孵育30 min，繼續用磷酸緩沖液漂洗，在滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，30 min 后再次進行磷酸緩沖液漂洗，DAB 顯色復染后脫水呈透明薄片，再用樹膠進行最后封片，將薄片放置顯微鏡下觀察。

1.2.3 直腸癌患者的病理分期

結直腸癌TNM 分期系統[4]由美國癌癥聯合委員會（American Joint Committee on Cancer，AJCC）和國際抗癌聯盟（Union for International Cancer Control，UICC）聯合發布，其分期標準為：據腫瘤浸潤深度代表T，分為Tis、T1、T2、T3、T4，N 代表區域淋巴結，M代表腫瘤的遠處轉移，TNM 分期共有5 期，分別為0 期、I 期、II 期、III 期及Ⅳ期。

1.3 觀察指標

（1）分析對比不同組織中PRL-3、XRCC2的表達水平；（2）分析對比結直腸癌患者不同分期的癌組織PRL-3、XRCC2 表達水平；（3）比較PRL-3、XRCC2 表達與結直腸癌病理特征的關系。

1.4 統計學方法

本研究數據均采用SPSS18.0 軟件進行統計分析，計量資料采用平均數±標準差（）描述，兩兩間使用t檢驗；計數數據采用百分比（%）表示，并采用卡方χ2檢驗；均以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 比較不同組織PRL-3、XRCC2 的表達水平

結直腸癌組織PRL-3 陽性率（69.23%）高于癌旁組織陽性率、XRCC2 陽性率（61.54）也高于癌旁組織陽性率（P＜0.05）。見表1。

2.2 比較不同分期的結直腸癌組織 PRL-3、XRCC2 表達水平

檢測出結腸癌組織0-II 期PRL-3 陽性患者有32 例，XRCC2 陽性患者有42 例；而III-Ⅳ期PRL-3 陽性患者有22 例，XRCC2 陽性患者有6例；結直腸癌組織檢測出 III-Ⅳ期 PRL-3、XRCC2 陽性率均高于0-II 期（P＜0.05）。見表2。

表2 不同分期的結直腸癌組織PRL-3、XRCC2 表達水平情況[n(%)]

2.3 比較PRL-3、XRCC2 表達與結直腸癌病理特征的關系

PRL-3、XRCC2 表達與年齡無顯著關系（P＞0.05）；PRL-3、XRCC2 表達與腫瘤大小、淋巴結轉移及肝臟轉移有關（P＜0.05）。見表3。

表3 PRL-3、XRCC2 表達與結直腸癌病理特征的關系情況［n(%)］

3 討論

據統計，目前結直腸癌發病年齡多集中在45歲以上的中老年人群，其中男性患者占比多于女性患者[1]。而結直腸癌早期無明顯癥狀，隨著腫瘤的增大會出現排便失調、腹瀉、血便、便秘等，還會伴隨不同程度的腹部疼痛，到了癌癥晚期還會出現身體消瘦、營養不良、貧血等[2]。因此，該病需早期診斷排查，預防癌細胞組織擴散[1]。結直腸癌患者多伴有肝轉移或淋巴轉移，據調查數據顯示，有24%的結直腸癌患者在早期及已經出現肝轉移，45%的結直腸癌患者在發病2-3 年內就會出現肝轉移，因此，結直腸癌的死亡率日漸增加，已成為世界前三的惡性腫瘤[1-3]。

PRL-3 是一種分子量22kD 的蛋白酪氨酸磷酸酶（Protein Tyrosine Phosphatase，PTP），通過細胞的生長分化、信息傳遞及物質運輸等。同時，也有研究表示PRL-3 多作用于腫瘤轉移[6]。本文研究結果顯示，PRL-3 表達與腫瘤大小、淋巴結轉移及肝臟轉移有關；PRL-3 陽性率高于癌旁組織；PRL-3III-Ⅳ期陽性率高于0-II 期。與李海林[7]等學者在MIF 和PRL-3 在結直腸癌及肝轉移中的表達及臨床意義的研究結果一致。PRL-3 具有促進細胞遷移增殖等作用，且相比未轉移的結直腸癌，有肝臟轉移或淋巴轉移的結直腸癌表達度更高[7]。原因可能為癌細胞影響了PRL-3 的表達水平，從而使得細胞的遷移增殖等作用加強，加快癌細胞的擴散。

XRCC2 是一種參與同源基因修復的蛋白質，可以維持生物基因的活性和完善整體基因[8]。本研究結果表明XRCC2 表達與腫瘤大小、淋巴結轉移及肝臟轉移有關；XRCC2 陽性率高于癌旁組織；XRCC2 III-Ⅳ期陽性率高于0-II 期。推測原因為XRCC2 參與修復基因，阻礙了癌細胞病灶的擴增，增加了細胞穩定性及完整性。XRCC2 表達水平降低導致受損基因無法修復，促進了癌細胞病灶的發生。但據陳建亮[9]等學者也在X 線修復交叉互補基因與肝癌進展及預后的關系中提出XRCC2 過多表達引起了細胞增殖飽和從而加速了癌細胞病灶的形成。說明XRCC2在癌細胞中的表達機制十分復雜，而癌細胞病灶的形成與細胞增殖異常也有密切關聯[8，9]，但其關聯機制仍需進一步臨床研究。

總而言之，應用結腸鏡檢測組織中的PRL-3、XRCC2 表達水平，可以為結直腸癌患者的臨床評估提供參考，有利于檢測癌細胞的轉移、生長，同時檢測病情的發生發展。