貴州省民族藥材鴨兒芹的質量標準研究

王慧娟，郭志偉，張 敏，彭禮軍，田民義

(1.貴州大學 西南藥食兩用資源開發利用技術國家地方聯合工程研究中心，貴州 貴陽 550025；2.貴州大學 釀酒與食品工程學院，貴州 貴陽 550025；3.貴州大學 藥學院，貴州 貴陽 550025)

鴨兒芹為傘形科植物鴨兒芹屬鴨兒芹CryptotaeniajaponicaHassk的干燥全草。鴨兒芹出自《國藥提要》，又名三葉、水白芷、鴨腳板草、野芹菜等。鴨兒芹是貴州省民間常用藥材，在貴州資源豐富，多地均有分布。此外，我國長江流域以南各省區及河北、山西、陜西、甘肅、臺灣等地也有分布。鴨兒芹的莖葉、果實及根均可入藥，且藥理作用比較廣泛，具有祛風止咳、利濕解毒、化瘀止痛等功效，在民間常用于治療感冒咳嗽、肺癰、淋痛、疝氣、風火牙痛、目赤翳障、癰疽瘡腫、皮膚瘙癢、跌打腫痛、蛇蟲咬傷等[1-2]?，F代藥理學研究表明，鴨兒芹具有抗炎、抗氧化、抗菌、降血脂、抑制黑素原生成、急性肝損傷保護、清咽的作用[3-7]?；瘜W成分研究發現，鴨兒芹主要含有黃酮類、酚酸類、腦苷脂類、揮發油等[8-10]。

近年來，關于鴨兒芹的研究報道主要集中在藥理活性、化學成分、提取純化工藝等[11-14]方面，而鴨兒芹質量標準方面的研究相對缺乏。在2020年版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)及2003年版《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》中均未收載“鴨兒芹”品種，且鴨兒芹也未被其他省份的藥材標準所收錄。隨著人們對鴨兒芹研究的不斷深入，其應用范圍日益擴大，但是鴨兒芹質量標準至今仍然空缺，不利于其質量控制及進一步產品開發。針對現有問題，本研究利用粉末顯微特征和薄層色譜法對鴨兒芹進行鑒別，并對其水分、灰分、浸出物等開展研究，綜合各項結果制定鴨兒芹的質量標準，進而為該藥材的質量控制及后續開發利用提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 儀器

FA2004型電子天平(上海良平儀器儀表有限公司)；KS10-4D-11型馬弗爐(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)；WGL-65B電熱鼓風干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；DK-98-Ⅱ電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)；GoodLooK-1000薄層色譜成像系統(上?？普苌萍加邢薰?；LEICA DMi1 顯微鏡(上海萊卡顯微系統有限公司)。

1.2 試藥

咖啡酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110885-201703，純度：99.7%)；綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-201817，純度：96.8%)；聚酰胺薄膜(浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠)；水為雙蒸水，其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

鴨兒芹藥材共收集13個批次，均采自貴州省，由貴州中醫藥大學藥學院魏升華教授鑒定為傘形科植物鴨兒芹CryptotaeniajaponicaHassk的全株，具體來源見表1。

表1 13批鴨兒芹樣品采集信息Tab.1 Sample collection of 13 batches of Cryptotaenia japonica Hassk

1.4 鑒別

對鴨兒芹藥材分別進行顯微鑒別及薄層色譜鑒別實驗。

顯微鑒別：取鴨兒芹干燥藥材粉碎后，過四號篩，用解剖針取少許粉末，水合氯醛溶液透化，加稀甘油裝片后置顯微鏡下觀察。

薄層色譜鑒別：取樣品粉末2 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液加鹽酸調為酸性，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次25 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取咖啡酸和綠原酸對照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照2020年版《中國藥典》(四部)通則0502項下薄層色譜法(thin layer chromatography，TLC)實驗，吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(15 ∶5 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。

1.5 檢查

水分：取鴨兒芹藥材粉末(過二號篩)約3 g，精密稱定，照2020年版《中國藥典》(四部)通則0832第二法(烘干法)測定。每份樣品平行測定3次，根據減失重量計算供試品中水分含量。

總灰分：取鴨兒芹藥材粉末(過二號篩)約3 g，精密稱定，照2020年版《中國藥典》(四部)通則2302項下方法進行測定。每份樣品平行測定3次，根據殘渣重量計算供試品中總灰分的含量。

1.6 浸出物

1)浸出溶劑及浸出方法的選擇

取鴨兒芹藥材粉末(批號：YEQ-03，過二號篩)約4 g，精密稱定。分別采用水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇和95%乙醇作溶劑，照2020年版《中國藥典》(四部)通則2201項下的冷浸法和熱浸法分別進行測定，計算并比較供試品中浸出物的含量。

2)浸出物測定

照2020年版《中國藥典》(四部)通則2201項下水溶性浸出物測定法的熱浸法，對13批鴨兒芹藥材的浸出物進行測定，每份樣品平行測定3次，計算均值。

2 結果與分析

2.1 鑒別

2.1.1顯微鑒別

根據13批鴨兒芹粉末樣品的觀察結果，將其顯微鑒別特征總結如下：本品粉末灰黃色或綠色。淀粉粒多為單粒，圓形或類圓形，直徑5～30 μm，臍點以點狀居多，亦有人字狀。纖維多聚集成束。有棕色塊存在。單細胞非腺毛直徑10～20 μm。導管為螺紋導管、梯紋導管和網紋導管。鴨兒芹粉末顯微特征見圖1。

2.1.2薄層色譜鑒別

13批鴨兒芹藥材的薄層色譜圖見圖2。由圖2可以看出：供試品在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且分離效果良好?？Х人嵩诟髋嗡幉闹芯尸F出清晰斑點，而綠原酸在不同批次藥材中含量差異較大，部分批次因含量低而呈現較弱斑點。因此，根據13批鴨兒芹藥材的研究結果，建議只選取咖啡酸的TLC鑒別納入質量標準。

1—單細胞非腺毛；2—導管；3—淀粉粒；4—棕色塊；5—纖維。圖1 鴨兒芹粉末顯微特征Fig.1 Microscopic characteristics of Cryptotaenia japonica Hassk powder

1～13—YEQ-01～YEQ-13；咖—咖啡酸對照品；綠—綠原酸對照品。圖2 13批鴨兒芹藥材的薄層色譜圖Fig.2 TLC chromatogram of 13 batches of Cryptotaenia japonica Hassk

2.2 檢查

對收集到的13批鴨兒芹樣品進行水分和總灰分測定，結果見表2。由表2可知：13批樣品水分質量分數為7.80%～12.48%，總灰分質量分數為6.24%～11.64%。RSD(相對標準偏差)均小于3%，表明樣品測定重復性良好。經計算，水分平均值為10.14%，總灰分平均值為9.38%。根據測定結果，擬定鴨兒芹藥材水分不得超過13.0%?？紤]到不同批次藥材的總灰分差異較大，擬定鴨兒芹藥材總灰分不得超過14.0%。

表2 13批鴨兒芹水分、總灰分測定結果(n=3)Tab.2 Determination results of water content and total ash in 13 batches of Cryptotaenia japonica Hassk (n=3)

2.3 浸出物

2.3.1浸出溶劑及浸出方法的選擇

選取批號為YEQ-03的鴨兒芹藥材，分別以不同濃度乙醇和水作為溶劑，采用冷浸法和熱浸法對樣品的浸出物進行測定，結果見表3。由表3可知：采用不同方法進行浸出物測定時，RSD均小于3%，表明樣品測定重復性良好。以水作為溶劑時，熱浸法的浸出物含量最高。

表3 浸出溶劑及浸出方法的考察(n=3)Tab.3 Study on extraction solvent and extraction method (n=3)

2.3.2浸出物測定

采用熱浸法對13批鴨兒芹藥材的水溶性浸出物進行測定，結果見表4。由表4可知：13批鴨兒芹藥材水溶性浸出物質量分數為17.84%～25.20%。RSD均小于3%，表明樣品測定重復性良好。經計算，浸出物平均值為21.72%。根據測定結果，擬定鴨兒芹水溶性浸出物不得少于17.0%。

表4 13批鴨兒芹水溶性浸出物測定結果(n=3)Tab.4 Determination results of water-soluble extract in 13 batches of Cryptotaenia japonica Hassk (n=3)

3 結論

鴨兒芹在貴州省分布較廣，是貴州省民間常用藥材，應用歷史悠久。其被《貴州植物志》《貴州民間方藥集》《貴州草藥》所收載，但至今尚無質量標準，因此亟需開展鴨兒芹的質量標準研究工作。

本研究通過對鴨兒芹藥材粉末的顯微特征進行觀察，建立了鴨兒芹的顯微鑒別方法。根據文獻調研，選取咖啡酸、綠原酸等成分開展鴨兒芹的薄層色譜鑒別研究。經研究比較，薄層色譜中采用聚酰胺作為固定相，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(15 ∶5 ∶1)作為展開劑時，鴨兒芹在與咖啡酸、綠原酸對照品相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點且分離度良好。從13批鴨兒芹藥材的研究結果來看，咖啡酸在各批次藥材中均呈現清晰斑點，而綠原酸在不同批次藥材中含量差異較大，部分批次因含量低而呈現較弱斑點?？紤]到所建立質量標準后期使用時的適用性，建議只選取咖啡酸的薄層色譜鑒別方法納入質量標準。以上顯微鑒別及薄層色譜鑒別法的建立，為鴨兒芹藥材提供了鑒別依據。

根據13批鴨兒芹藥材水分和總灰分的測定結果，擬定鴨兒芹藥材水分不得超過13.0%，總灰分不得超過14.0%。通過對不同浸出溶劑及浸出方法的考察，確定了鴨兒芹浸出物的具體測定方法。采用熱浸法對13批鴨兒芹藥材的水溶性浸出物進行測定，依據測定結果擬定鴨兒芹浸出物不得少于17.0%。

綜上，本研究通過顯微鑒別、薄層色譜鑒別、常規檢查、浸出物研究等建立了鴨兒芹藥材的質量標準，為其品質鑒定、質量控制提供了評價方法和指標，有利于其后續的推廣應用及產品開發。