不同溫濕度條件下球孢白僵菌對核桃長足象的致病力研究

趙玉雪，朱佳敏，楊 霞，吳柳燕

(貴州省核桃研究所 貴州 貴陽550005)

核桃長足象(AlcidodesjuglansChao)屬鞘翅目(Coleoptera)象甲科(Curculionidae)，是核桃樹主要害蟲種類之一，在我國的核桃產地多有分布，發生十分嚴重，主要蛀果危害[1]。核桃長足象一年發生一代，成蟲在果實里產卵，嚴重情況下一果達到幾十個產卵孔，卵孵化后形成幼蟲，其幼蟲在果內蛀害時間長且隱蔽，防治困難，早期幼蟲會蛀食種仁，導致落果，而后期幼蟲會導致核桃青皮腐爛而污染果殼，損害其商品價值[2-5]。

球孢白僵菌是一種廣譜性昆蟲病原真菌，具有致病力強、殺蟲譜廣、容易培養及飛揚擴散等特點，因而被普遍應用在農林害蟲的防治上[6]。在核桃上，楊世璋等人就球孢白僵菌對核桃長足象成蟲的致病性與防治效果做了初步的研究[7]。本文以不同溫、濕度條件下球孢白僵菌對核桃長足象的致病力的影響為研究內容，旨在掌握球孢白僵菌施用的最佳溫、濕條件，為后續生產上應用球孢白僵菌防治長足象的實踐提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 供試昆蟲

采集受幼蟲危害后的落果帶回實驗室，放入飼養盒中，以紗網封住頂部，待羽化后收集成蟲,以新鮮核桃果實和核桃枝條飼養備用。

供試菌株與菌液的制備：供試菌株購買的農保生物生產的100億/g的球孢白僵菌。將其在(26 ±1) ℃下用PDA培養基培養10 d，待完全產孢后，刮下分生孢子，用0.1%吐溫-80無菌水潤濕，并用攪拌器攪拌均勻。經血球計數板計數后，配成分生孢子濃度為2．0 ×108個/mL的孢子懸浮液；并以0.1%吐溫-80無菌水作對照。

1.2 試驗方法

1.2.1 溫度對球孢白僵菌致病力的影響

挑選健壯、個頭一致的核桃長足象成蟲，用無菌水清洗后，浸泡在配制好的球孢白僵菌孢子懸浮液中10 s，后放置在塑料杯中，每3頭放一個杯中，杯底墊濾紙，杯中放入新鮮的核桃枝條，并以紗網封住頂部。以0.1%吐溫-80無菌水作對照，分別置于5個溫度梯度為18 ℃、21 ℃、24 ℃、27 ℃、30 ℃的人工氣候箱中，相對濕度為80%±10%，每個溫度梯度處理15頭，重復3次，后每天定時檢查成蟲的被侵染情況，并及時更換新鮮核桃枝條，以蟲體長出白色菌絲，最后被菌絲包圍，產生分生孢子層為死亡蟲體，記錄死亡數量。

1.2.2 濕度對球孢白僵菌致病力的影響

挑選健壯、個頭一致的核桃長足象成蟲，用無菌水清洗后，浸泡在配制好的孢子懸浮液中10s，后放置在塑料杯中，每3頭放一個杯中，杯底墊濾紙，杯中放入新鮮的核桃枝條，并以紗網封住頂部。以0.1%吐溫-80無菌水作對照，分別置于(95±5)%、(85±5)%、(75±5)%、(65±5)%、(55±5)%5個濕度梯度的的人工氣候箱中，溫度設置為27 ℃，每個濕度梯度處理15頭，重復3次，后每天定時檢查成蟲的被侵染情況，并及時更換新鮮核桃枝條，以蟲體長出白色菌絲，最后被菌絲包圍，產生分生孢子層為死亡蟲體，記錄死亡數量。

1.2.3 數據統計與分析

累計死亡率 = 死亡數 / 處理總數 × 100%[8]。數據采用EXCEL和SPSS進行統計學分析。

2 結果與分析

2.1 溫度與白僵菌致病力的關系

根據不同溫度條件下核桃長足象受球孢白僵菌侵染后的死亡情況，獲得死亡曲線及相關回歸方程，結果如圖1、表1所示。結果顯示：在設置的溫度范圍內，核桃長足象的累計死亡率隨著溫度變化而有所不同。在18～27 ℃范圍內，死亡率隨溫度的升高而增加，在27 ℃下達到最高84.44%，而致死中時間(LT50)則隨著溫度升高而降低，并在27 ℃下達到最低10.258 d。在較高溫度30 ℃條件下，核桃長足象死亡率卻明顯低于24 ℃和27 ℃，LT50也較之要高。因此，可以得出結論，在設置的溫度范圍內，27 ℃最有利于球孢白僵菌對核桃長足象的侵染。

表1 不同溫度下感染球孢白僵菌后核桃長足象的毒力回歸方程

圖1 不同溫度下感染球孢白僵菌后核桃長足象的死亡曲線上

2.2 濕度與白僵菌致病力的關系

用濃度為2×108/mL的球孢白僵菌分生孢子懸浮液侵染核桃長足象后，于27 ℃溫度條件下進行培養，在設置的濕度范圍內，獲得核桃長足象的死亡率及相關回歸方程結果如圖2、表2所示。由此可知，不同濕度條件下，核桃長足象的死亡率隨著濕度的增加而增長。試驗后期，在濕度為(95±5)%的環境下，核桃長足象的死亡率達86.67%，與濕度為(85±5)%的環境下接近，顯著高于其他濕度環境，且其LT50分別為10.285 d與10.572 d，均顯著低于其他幾組數據。因此，可以判定較高的濕度環境更有利于球孢白僵菌對核桃長足象的侵染。

圖2 不同濕度條件下感染球孢白僵菌后核桃長足象的死亡曲線

表2 不同濕度條件下感染球孢白僵菌對核桃長足象的毒力回歸方程

3 討論

球孢白僵菌在侵染寄主時，其致病力通常會受溫、濕度、寄主齡期、菌液濃度等因素影響[9-10]，本文就是對不同溫、濕度條件下球孢白僵菌對核桃長足象的致病力進行研究。不同昆蟲在受白僵菌侵染所需溫度不一定相同，研究表明，球孢白僵菌孢子萌發的適宜溫度范圍一般為18～28 ℃[11]，且在本研究中27 ℃是利于球孢白僵菌侵染核桃長足象的最佳溫度，這與菌絲適宜萌發生長的溫度相吻合，而溫度過高或過低都影響其致死率，尤其是高溫條件下，可能會導致球孢白僵菌孢內酶活代謝加快，影響其致病力。同時，濕度也是影響球孢白僵菌侵染寄主的一個因素，在高相對濕度下，寄主昆蟲致死率較高，且多數研究認為，在濕度為95%～100%的環境下，白僵菌孢子萌發率最高，萌發速度最快[12]。在本研究以球孢白僵菌侵染核桃長足象時，同樣是在高濕度條件下致病力表現為最高，與孢子萌發的濕度一致；而在當相對濕度<70%時，多數昆蟲的死亡率會顯著減少[13]，與本研究中低濕度環境下球孢白僵菌致病力減弱一致。因此，根據當地的溫度、濕度，進行球孢白僵菌的噴施，能夠取得較好效果[14]。

4 結論

在一定的范圍內，球孢白僵菌對核桃長足象的致病力會隨著溫濕度的變化而變化，在相同濕度下，溫度為27 ℃時，球孢白僵菌致死效果最好，核桃長足象的死亡率最高，LT50最短，溫度過高或過低都會降低其致死率；而在相同溫度下，濕度為(95±5)%的條件下，球孢白僵菌致死效果最好，核桃長足象的死亡率最高，LT50最短，這也表明高濕條件更利于球孢白僵菌對核桃長足象的侵染。因此，在應用球孢白僵菌防治核桃長足象時，掌握好其溫、濕度條件，能更有效的應用好球孢白僵菌，才能獲得更好的防治效果。