TBX2表達與前列腺癌臨床病理特征及其上皮間質轉化的相關性

胡君程 蘇瑜嬌 葉承祖

前列腺癌(PCa)為前列腺上皮細胞惡性增生所致的一種腫瘤，為男性泌尿生殖系統最常見的一種惡性腫瘤，臨床主要表現為排尿異常、勃起功能障礙等[1]。PCa的早期診斷、準確評估病情進展對制定臨床治療方案及患者預后有重要意義[2]。T-BOX轉錄因子2(TBX2)為T-BOX基因編碼轉錄因子家族的成員之一，在心臟、胚腎、乳腺等器官發育過程中均有表達，且發揮著重要作用[3]。目前關于TBX2的研究發現其在乳腺癌、宮頸鱗癌等多種惡性腫瘤中有較高表達，且參與了細胞周期調控，在腫瘤形成及發展中發揮著重要作用[4]。本研究觀察了TBX2表達與前列腺癌臨床病理特征及上皮間質轉化(EMT)的相關性，旨在為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年1月至2020年3月于我院行前列腺癌根治術的患者68例(PCa組)，取經中性甲醛固定、石蠟包埋的前列腺癌組織標本68份，患者年齡42～72歲，平均(57.89±2.51)歲，AJCC分期Ⅰ期12例，Ⅱ期17例，Ⅲ期21例，Ⅳ期18例。選取同期于我院進行前列腺電切術的良性前列增生患者68例(BPH組)，取蠟塊標本68份，患者年齡41～71歲，平均(57.82±2.45)歲。兩組年齡差異不明顯(P>0.05)。前列腺組織芯片制作：所有標本均來自我院病理科，蠟塊均保存完好，可直接行組織芯片制作，136個樣品點，前列腺癌組織68例、良性前列腺組織68例。

1.2 試劑

小鼠抗人TBX2單克隆抗體由上海研生生化試劑有限公司提供，工作液濃度為1∶350。

1.3 免疫組織化學染色

經中性甲醛固定、石蠟包埋的前列腺癌組織切成厚約5 μm的切片，并置于60 ℃恒溫箱內1 h，目的為將組織表面蠟融化，常規脫蠟、水化操作，應用3%H2O2溶液滅活內源性過氧化氫酶，并將切片置于枸櫞酸鈉緩沖液(0.01 mol/L)內行微波修復，應用10%山羊血清封閉液行室溫封閉20 min，然后于切片上滴加小鼠抗人TBX2(1∶350)單克隆抗體，以4 ℃過夜。第二天以超敏SP試劑盒及DAB顯色，以自來水沖凈后行蘇木精復染，最后經脫水、透明、中性樹膠封片。邀請病理科兩名副主任及以上職稱醫師于鏡下行雙盲閱片。

1.4 結果判定

著色標準以雙評分法半定量法[5]評估，染色強度(I)與陽性細胞所占百分比(P)之間乘積為切片染色評分，0分：未著黃色，細胞全無著色；1分：著淺黃色，著色<10%；2分：黃色，著色在10%～30%間；3分：棕色，著色在30%～50%間，4分：著色>50%?？偡帧?分(-)，4～6分(+)，7～9分(++)，10～12分(+++)，≤6分判定為陰性，>6分判定為陽性。

1.5 觀察指標

比較TBX2在前列腺癌組織與良性組織中表達情況；分析TBX2與PCa臨床病理特征的關系，包括年齡、臨床分期、有無淋巴結轉移、血清前列腺特異性抗原(PSA)；比較PCa患者TBX2陽性者與陰性者EMT相關蛋白表達量，應用Westeern blotting法對EMT相關蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin進行檢測；分析TBX2表達與前列腺癌EMT標志蛋白表達的相關性。

1.6 統計學方法

2 結果

2.1 TBX2在前列腺癌組織及良性組織中陽性表達情況

PCa組 TBX2陽性表達率為69.12%，較BPH組(16.18%)高(P<0.05)，見表1。

表1 前列腺癌組織及良性組織中TBX2陽性表達情況

2.2 TBX2表達與PCa臨床病理特征的相關性

TBX2陽性表達與PCa患者年齡、淋巴結轉移等病理特征無關(P>0.05)，與臨床分期、PSA水平有關(P<0.05)，見表2。

表2 TBX2表達與PCa不同病理特征的相關性

2.3 PCa組TBX2陽性者與陰性者EMT相關蛋白表達量比較

PCa組TBX2陽性者EMT相關蛋白表達量與陰性者比較有顯著差異(P<0.05)，見表3。

表3 PCa組TBX2陽性者與陰性者EMT相關蛋白表達量比較

2.4 TBX2表達與前列腺癌EMT標志蛋白表達的相關性

TBX2表達與E-cadherin呈正相關性，與N-cadherin、Vimentin呈負相關性(P<0.05)，見表4。

表4 TBX2表達與前列腺癌EMT標志蛋白表達的相關性/例

3 討論

PCa為男性泌尿生殖系統最常見的一種惡性腫瘤，具有較高發病率，且近年來發病率逐年上升，成為威脅男性生殖健康的主要疾病。部分PCa惡性程度較低，進展較緩慢，無需規范化治療，但部分患者惡性程度較高，具有較強侵襲性，需及時治療以改善預后[6]。目前臨床無確切PCa進展評估標準，多綜合患者臨床分期、血清PSA等資料對病情進展進行預估。

TBX2為-T-BOX基因家族的重要成員之一，在生物體內具有調控發育的作用，屬發育調控相關基因，其廣泛表達于各種組織的胚胎發育過程中，可指導胚胎及組織器官軸向發育[7]。近年來多項研究表示TBX2在多種惡性腫瘤中有較高表達，并與腫瘤細胞增殖、凋亡有密切關系，在乳腺癌等腫瘤中可通過一些重要生長調控因子參與細胞分化、凋亡及衰老中[8]。TBX2可經多條途徑參與腫瘤形成過程，TBX2可通過對P19ARF表達抑制封閉細胞衰老途徑，從而抑制細胞凋亡，當TBX2異常累及到一定程度后可導致細胞發生惡性病變[9]。TBX2高表達可使癌組織突破基底膜向肌層浸潤性生長，利于提高癌組織侵襲能力，促進前列腺癌組織向增殖更快、惡性程度更高的方向演變[10-11]。本次研究結果顯示，PCa組TBX2陽性表達率較BPH組高，提示PCa患者存在TBX2高表達。目前臨床認為EMT未腫瘤遷移侵襲的開始，其過程主要表現為上皮細胞標志物E-cadherin缺失，N-cadherin、Vimentin水平上升[12-13]。本次研究結果顯示，PCa患者中陽性組臨床分期、PSA水平、EMT相關蛋白表達量均與陰性組有顯著差異，TBX2表達與前列腺癌EMT標志蛋白中E-cadherin呈正相關性，與N-cadherin、Vimentin呈負相關性，提示TBX2基因具有癌基因顯著特征，與腫瘤浸潤侵襲有密切關系，可有效評估病情進展風險，為腫瘤預后及生物治療提供新的關鍵因子[14-15]。

綜上所述，TBX2高表達在PCa發生及發展中發揮著重要作用，其陽性表達水平可能與Pca惡性程度呈正相關性，研究TBX2陽性表達在評估PCa進展風險、制定臨床治療方案中有潛在價值，TBX2表達也是影響PCa預后的關鍵因素。