FⅧ抑制物與狼瘡抗凝物對凝血因子檢測結果的影響

顏楠,刁艷君,韓峰,劉家云(空軍軍醫大學附屬西京醫院檢驗科,西安 710032)

關于獲得性凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的來源,一種是非血友病患者產生的抗FⅧ自身抗體,另一種是血友病患者接受外源性凝血因子產品輸注后產生的抗FⅧ同種抗體[1]。抑制物形成受多種因素影響,遺傳和治療因素協同作用促成抑制物產生,表現為出血不止或出血難止,出血的嚴重程度主要取決于凝血因子水平[2]。狼瘡抗凝物(Lupus anticoagulants,LAC)是一種抗磷脂抗體,在體外試驗中,LAC可通過拮抗帶負電荷的磷脂或磷脂-蛋白質復合物,干擾凝血試劑使凝血時間假性延長,在體內LAC則是強烈的促凝物質,誘導組織因子表達、干擾纖溶酶原激活物釋放、激活血小板、影響補體活化、抑制蛋白C,使人體呈現病理性高凝狀態,是引發靜、動脈血栓形成的重要風險因素[3-4]。FⅧ抑制物與LAC都會引起活化部分凝血活酶時間(APTT)延長,甚至干擾依賴APTT試劑檢測的內源性凝血因子的定量檢測,因此在凝血因子定量檢測時含量均同時減低的患者,需要排除是否存在病理性抑制物的干擾引起的假性減低[5]。通過對內源性凝血因子的多梯度稀釋檢測可以辨別FⅧ抑制物與LAC。

1 材料和方法

1.1研究對象 回顧性分析我院2022年2月至2023年2月門診與住院病例。收集FⅧ抑制物陽性致內源性凝血因子活性假性減低組6例,均為男性,年齡9～64(40.0±22.6)歲;LAC陽性致內源性凝血因子活性假性減低組15例,男1例,女14例,年齡11～60(34.5±15.5)歲。

1.2儀器與試劑 CS5100全自動凝血分析儀(日本Sysmex公司)。APTT、凝血酶原時間(PT)、LAC試劑以及FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性試劑購自德國SIEMENS公司。

1.3方法 清晨空腹抽取靜脈血2.7 mL,枸櫞酸鈉抗凝,1 500×g離心10 min后分離血漿。

FⅧ抑制物組:檢測PT、APTT以及內源性凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性及其稀釋3個梯度后的活性,進行APTT糾正試驗,檢測FⅧ抑制物、LAC(LA1/LA2)。

LAC組:分別檢測LAC(LA1/LA2),檢測內源性凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性及其稀釋3個梯度后的活性。

2 結果

FⅧ抑制物組6例患者APTT延長顯著(見表1)且APTT糾正試驗均不糾正(見表2);內源性凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性均減低,其中FⅧ活性減低最顯著(見表1);經3個梯度(1∶2、1∶4、1∶8)稀釋,FⅧ活性稀釋后變化均較小,FⅨ、FⅪ、FⅫ活性稀釋后均恢復為接近正常水平(見圖1)。FⅧ抑制物結果均為陽性,LAC(LA1/LA2)檢測結果均為陰性(見表2)。

表1 FⅧ抑制物組6例患者PT、APTT與內源性凝血因子結果

注:A～F分別為患者1～6。圖1 FⅧ抑制物組6例患者內源性凝血因子活性在不同稀釋度下的變化曲線

表2 FⅧ抑制物組6例患者APTT糾正試驗、FⅧ抑制物與LAC結果

將LAC組15例LAC陽性患者內源性凝血因子FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ活性稀釋前后檢測結果進行對比分析,差異均有統計學意義(P<0.05),且均能恢復至接近正常水平(見表3)。通過對比FⅧ抑制物組和LAC組稀釋后的FⅧ活性(見圖2),可有效鑒別FⅧ抑制物與LAC。

表3 LAC組患者各內源性凝血因子稀釋前后結果比較

圖2 LAC組與FⅧ抑制物組FⅧ活性不同梯度稀釋檢測對比

3 討論

抑制物的產生可分為遺傳因素和非遺傳因素,遺傳因素是主要因素,后者為次要因素[6]。FⅧ抑制物篩選采用APTT糾正試驗,由于FⅧ抑制物有時間溫度依賴性,因此若APTT即刻被糾正,則需要進一步進行37 ℃溫育2 h后的糾正試驗[7]。FⅧ抑制物滴度檢測采用改良的Bestheda法[8]。用不同稀釋度的患者血漿與正常血漿等量混合溫育2 h,測定殘余FⅧ活性。能使正常血漿FⅧ活性減少50%時,FⅧ抑制物的含量為1個Bethesda單位,以BU/μL表示[9]。LAC是一種能與帶負電荷的磷脂或磷脂蛋白復合物結合的免疫球蛋白,屬于抗磷脂抗體可干擾依賴磷脂的體外凝血反應[10],其機制為血漿中的LAC能中和APTT試劑中的磷脂,導致凝血時間延長[11]。APTT檢測參與的凝血因子主要有FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ,當其時間延長時提示內源性凝血功能障礙[12]。行標中對標本的稀釋要求規定,因子Ⅷ和Ⅸ活性檢測至少應進行2個稀釋度的檢測[13]。

本研究FⅧ抑制物組中6例患者APTT延長顯著且APTT糾正試驗均不糾正,提示可能有病理抑制物存在。本研究中,內源性凝血因子活性均減低,其中FⅧ活性減低最顯著,稀釋不同梯度后檢測,除FⅧ外其他因子均恢復至接近正常水平;提示可能存在FⅧ抑制物。LAC組中對15例患者的內源性凝血因子活性進行不同梯度稀釋檢測,差異均有統計學意義(P<0.05),且均能恢復至接近正常水平。

FⅧ抑制物與LAC均為病理性抗凝物質,實驗室診斷病理性抗凝物質的確證試驗較為復雜或尚無參考物質和參考方法,分析前、分析中諸多因素均可影響檢測結果的準確性和重復性,其臨床應用效果不是非常理想[14]。通過對凝血因子多梯度稀釋的方法不僅可以排除病理性抗凝物質的干擾,甚至可辨別抑制物與LAC。為臨床早期診斷和治療提供依據,同時也是對不能開展FⅧ抑制物與LAC檢測的實驗室的有效補充。