HPLC法測定頭孢噻肟鈉的有關物質

張建廷，張巍

（東北制藥集團股份有限公司，遼寧 沈陽 110027）

頭孢噻肟鈉屬于β-內酰胺類抗生素，名稱為(6R,7R)-3-[(乙酰氧基)甲基]-7-[2-氨基-4-噻唑基-(甲氧亞氨基)乙酰氨基]-8-氧代-5-硫雜-1-氮雜雙環[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸鈉鹽，20世紀70年代由Hoechst（德國）公司和Russel（法國）公司聯合研制，作為第3代頭孢菌素類抗生素，其臨床應用十分廣泛[1-3]。

頭孢噻肟鈉在《中國藥典》2020年版、《日本藥典》18版、《美國藥典》43版及《歐洲藥典》10.0版中均有收載[4-7]，且有文獻報道注射用頭孢噻肟鈉有關物質的測定方法及雜質譜研究[8-10]，根據本品的合成工藝路線、參考文獻及各國藥典，建立了頭孢噻肟鈉原料藥有關物質的測定方法，為質量標準的制定提供指導依據。

1 實驗部分

1.1 儀器

安捷倫1260高效液相色譜儀；安捷倫C18色譜柱；AL204型和XPE26型天平（梅特勒 托利多）；FE20型酸度計（梅特勒 托利多）。

1.2 試劑

頭孢噻肟鈉原料藥（批號：S442001、S442002、S442003，華北制藥華民藥業）；頭孢噻肟對照品（中國食品藥品檢定研究院）；雜質對照品（中國食品藥品檢定研究院、山東致純醫藥科技有限公司、廣州牌牌生物科技有限公司和石家莊合佳保健品有限公司）；磷酸二氫鉀、磷酸和無水磷酸氫二鈉（AR，國藥集團）；乙腈（HPLC，Fisher）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用安捷倫 C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流速為每分鐘1.0 mL；30 ℃柱溫；235 nm波長；4 ℃進樣室溫度；進樣10 μL；以pH6.2的磷酸氫二鈉緩沖溶液（稱取3.6 g無水磷酸氫二鈉，加水1 000 mL溶解，用磷酸調pH值至6.2）∶乙腈=98∶2為流動相A，以pH6.2的磷酸氫二鈉緩沖溶液∶乙腈= 40∶60為流動相B，梯度洗脫，見表1。

表1 線性梯度洗脫程序

2.2 溶液的配制

2.2.1 空白溶液的配制

稀釋劑（取4.6 g無水磷酸氫二鈉，3.5 g磷酸氫二鉀，加水1 000 mL溶解）。

2.2.2 供試品溶液的配制

精密稱取原料藥適量，加稀釋劑溶解，配制成質量濃度約為1 mg·mL-1的溶液。

2.2.3 對照溶液的配制

精密量取供試品溶液適量，加稀釋劑稀釋，配制成質量濃度約為0.01 mg·mL-1的溶液。

2.2.4 雜質對照貯備溶液的配制

精密稱取雜質7-ACA、雜質J、雜質A～H共10個對照品各2 mg，配制成質量濃度約為0.2 mg·mL-1的溶液，作為各雜質對照貯備溶液。

2.2.5 雜質定位溶液的配制

精密量取各雜質對照貯備溶液適量，配制成質量濃度約為0.01 mg·mL-1的溶液。

2.2.6 雜質混合對照溶液配制

雜質貯備液1：精密稱取5 mg雜質A、雜質C和2.5 mg的雜質B、雜質D、雜質E和雜質F，置100 mL量瓶中，加稀釋劑超聲溶解后定容，搖勻。

雜質貯備液2：精密稱取5 mg雜質G，2.5 mg頭孢噻肟對照品，雜質H、7-ACA和雜質J各3.75 mg，置500 mL量瓶中，加稀釋劑超聲溶解后，定容，搖勻。

精密量取雜質貯備液1和2各5 mL，置25 mL量瓶中，用稀釋劑定容，搖勻，作為雜質混合對照溶液。

2.2.7 系統適用性溶液配制

精密稱取頭孢噻肟對照品適量，加入雜質對照貯備溶液，配制成頭孢噻肟質量濃度為1 mg·mL-1及各雜質質量濃度為0.01 mg·mL-1的混合溶液。

2.3 專屬性

取稀釋劑、系統適用性溶液、各雜質定位溶液、對照溶液和供試品溶液，分別注入液相色譜儀10 μL，記錄色譜圖。結果空白溶劑不干擾主成分和各雜質檢測，各色譜峰間分離度滿足要求。

2.4 精密度

2.4.1 儀器精密度

連進5針雜質混合對照溶液，計算雜質峰面積RSD均小于2%，說明儀器精密度良好。

2.4.2 重復性

取供試品溶液和對照溶液，按“2.1”色譜條件采樣分析，有關物質含量按自身對照法計算，RSD均小于30%，表明該方法具有良好的重復性。

2.4.3 中間精密度

為考察隨機變動因素對測定結果的影響，由另一分析人員在另一日期，使用不同儀器對樣品進行檢測，按“2.1”色譜條件采樣分析，取平行配制的供試品溶液和對照溶液，各6份，按外標法計算，12份中雜質H、7-ACA、雜質B、雜質J、雜質A、雜質E、雜質C、雜質F、雜質D、雜質G含量的RSD分別為1.6%、4.5%、8.9%、22.1%、8.0%、9.6%、3.1%、2.1%、2.0%、14.2%，表明方法精密度良好。

2.5 定量限與檢測限

采用逐步稀釋法測定檢測限（S/N≈3）和定量限（S/N≈10），結果表明均能滿足各雜質的檢測要求，結果見表2。

表2 檢測限和定量限結果

2.6 線性和范圍

分別精密量取按“2.2.5”方法配制的雜質貯備液1和2各 2.5 mL，4 mL，5 mL和 7.5 mL，置25 mL量瓶中，用稀釋劑定容，搖勻，即得系列標準線性溶液。按“2.1”項下色譜條件采樣分析，以濃度（C，μg·mL-1）為橫坐標，以峰面積（A）為縱坐標，作有關物質線性回歸方程。結果見表3。

表3 有關物質線性回歸方程

2.7 加樣回收率

稱取本品約25 mg，精密稱定，共10份，分別置25 mL容量瓶中，加入“2.2.5”項下雜質貯備液1和雜質貯備液2各4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL，各3份，分別加入稀釋劑稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液，按“2.1”項下色譜條件分別采樣分析，取“2.2.5”項下雜質混合對照溶液同法測定，用外標法計算，結果見表4。

表4 有關物質回收率試驗結果

2.8 耐用性

供試品溶液和對照溶液分別按“2.2.2” 和“2.2.3”方法制備，分別調整柱溫、流速、pH值及不同品牌色譜柱采樣分析，考察系統的耐用性。經測定，理論板數、分離度、雜質個數、雜質含量及總雜在室溫30±2 ℃、流速1.0±0.2 mL·min-1、pH 6.2±0.1及使用不同品牌色譜柱時均符合規定，表明該方法耐用性良好。

2.9 溶液穩定性

供試品溶液和對照溶液分別按“2.2.2” 和“2.2.3”方法制備，分別置4 ℃條件下放置，按“2.1”色譜條件分別于 0 h、2 h和4 h采樣分析，試驗表明供試品溶液和對照溶液在4 ℃條件下均不穩定，故需臨用新制。

2.10 樣品測定

取頭孢噻肟鈉原料藥（批號：S442001、S442002、S442003），供試品溶液和對照溶液分別按“2.2.2” 和“2.2.3”方法配制，按“2.1”色譜條件采樣分析，結果3批樣品雜質含量均符合要求。

3 結論

目前，頭孢噻肟鈉在《中國藥典》2020年版、《日本藥典》18版、《美國藥典》43版及《歐洲藥典》10.0版中均有收載，結合頭孢噻肟鈉原料藥的合成工藝及降解試驗分析其中的潛在雜質[11]，其中雜質B、D、E和F為降解雜質，其余為原料藥工藝雜質。

經驗證[12-14]，該方法適用于頭孢噻肟鈉原料藥有關物質的檢測，能夠有效地控制產品質量。