c-Myc、CDK12 在胃癌組織中的表達及臨床意義

楊雪 程園園 田瑞華

胃癌是常見的消化系統惡性腫瘤, 近年來其發病率和死亡率均呈不斷升高趨勢［1］。目前胃癌治療主要為手術治療, 胃癌的發病與抑癌基因失活、原癌基因激活及細胞凋亡相關基因異常表達密切相關［2］。有研究證實, c-Myc 是一類經典的癌基因, 其在腫瘤組織中呈異常高表達, 并與惡性腫瘤的發生、進展及浸潤關系密切相關, 并在細胞分化、增殖和凋亡等生理過程中發揮重要作用［3］。CDK-12 在調控DNA 損傷和應激損傷的細胞應答基因轉錄方面發揮特定作用, 其在多種惡性腫瘤中呈異常高表達［4］。研究證實, CDK-12表達可上調c-Myc 及其相關基因表達, 從而加速DNA的復制［5］。兩者在惡性腫瘤中存在一定相關性, 并共同參與惡性腫瘤的發生和進展。CDK-12 是c-Myc 前體mRNA 加工必須基因。為此, 本研究對80 例胃癌患者手術標本中的c-Myc、CDK12 表達進行免疫組化法檢測, 分析兩者的相關性及臨床意義, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2016 年1 月～2019 年1 月期間本院收治的80 例胃癌患者的胃癌組織和癌旁組織標本。納入標準：均符合胃癌診斷標準［6］, 并經病理學檢查及影像學檢查證實；符合胃癌根治手術指征；無心肝腎等臟器功能不全者；術前未行放療和化療；患者知情同意。排除標準：心肝腎等臟器功能不全者；合并腸道器質性、功能性疾病者；合并免疫缺陷疾病、血液系統疾病者；合并其他惡性腫瘤者；術前接受放療、化療等治療者；妊娠期及哺乳期婦女；不能配合本研究隨訪或失訪者。80 例患者中男57 例, 女23 例；年齡44～84 歲, 平均年齡(59.1±8.4)歲；有飲酒史35 例,有吸煙史30 例；腫瘤最大直徑：＜5 cm 56 例, ≥5 cm 24 例；分化程度：高分化30 例, 中低分化50 例；組織學分型：腺癌55 例, 黏液癌18 例, 其他7 例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期26 例, Ⅲ～Ⅳ期54 例；浸潤深度：未侵犯漿膜44 例, 侵犯漿膜36 例；有淋巴結轉移30 例。本研究獲得了醫院醫學倫理委員的批準。

1.2 方法

1.2.1 試劑和儀器 鼠抗人c-Myc、CDK12 單克隆抗體、羊抗鼠二抗由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。金相顯微鏡WMJ-9688 由上海豫光儀器有限公司提供。

1.2.2 免疫組化法檢測 將標本病理蠟塊連續切片,經脫蠟、水化后用檸檬酸鹽抗原修復液進行修復, 磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌5 min, 連續3 次。用10%山羊血清在室溫下密封30 min, 加入一抗, 置于4℃冰箱中過夜, 滴加二抗, 室溫下孵育1 h, 用二氨基聯苯氨(DAB)顯色并沖洗, 蘇木精復染, 脫水、透明后中性樹膠封片, 鏡下觀察。陰性對照用PBS 代替一抗。

1.3 觀察指標及評定標準 比較胃癌組織和癌旁組織中c-Myc、CDK12 陽性表達情況；分析胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達與患者臨床病理特征的關系；分析c-Myc 與CDK12 陽性表達的相關性, 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達與胃癌患者預后的關系。由2名病理科醫師采用雙盲法閱片, 評估每張標本切片的染色強度和細胞陽性率。細胞質和細胞核內出現棕褐色或棕黃色顆粒為陽性表達。染色程度及陽性細胞占比采用雙評分、半定量法評定：無染色為0 分；淡黃色為1 分；棕黃色為2 分；棕色為3 分。每張切片任意選5個視野(×400)觀察陽性細胞占比：幾乎無染色計0 分；陽性細胞比例＜10%計1 分；10%≤陽性細胞比例＜35%計2 分；35%≤陽性細胞比例＜70%計3 分；陽性細胞比例≥70%計4 分。以兩者得分的乘積來判斷c-Myc 及CDK12 的陽性表達, 當乘積≤4分判斷為陰性, ＞4分判定為陽性［7］。術后進行3 年的隨訪, 采用電話、門診或住院病歷隨訪方式, 于2022 年1 月結束隨訪。術后6 個月內結合患者情況每隔2～4 周進行門診復查1 次；術后6 個后每隔3～6 個月門診復查1 次。記錄患者生存情況。

1.4 統計學方法 使用SPSS21.0 統計軟件進行分析, 計數資料用率(%)表示, 采用χ2檢驗；c-Myc、CDK12 表達關系采用Spearman 相關性分析；采用Kaplan-Meier 生存曲線分析患者生存預后, 采用log-rank 檢驗。P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中c-Myc、CDK12 陽性表達情況比較 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達率均明顯高于癌旁組織(P＜0.05)。見表1。

表1 80 例患者的胃癌組織和癌旁組織中c-Myc、CDK12 陽性表達情況比較［n(%)］

2.2 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達與患者臨床病理特征的關系 不同年齡、性別、腫瘤最大直徑患者胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達率比較差異無統計學意義(P＞0.05)；中低分化、Ⅲ～Ⅳ期、侵犯漿膜、有淋巴結轉移患者胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達率明顯高于高分化、Ⅰ～Ⅱ期、未侵犯漿膜、無淋巴結轉移患者胃癌組織(P＜0.05)。見表2。

表2 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達與患者臨床病理特征的關系［n(%)］

2.3 c-Myc 與CDK12 陽性表達的相關性分析 相關分析發現, c-Myc、CDK12 在胃癌組織中的表達呈正相關性(r=0.487, P=0.016＜0.05)。

2.4 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達與胃癌患者預后的關系 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性患者的3 年生存率均明顯低于c-Myc、CDK12 陰性患者(P＜0.05)。見表3, 圖1, 圖2。

圖1 c-Myc 陽性和c-Myc 陰性患者的生存率比較

圖2 CDK12 陽性和CDK12 陰性患者的生存率比較

表3 胃癌組織中c-Myc、CDK12 陽性表達與胃癌患者預后的關系［n(%)］

3 討論

胃癌的發生是由多基因、多因素共同作用的結果,其與腌制食品、高鹽飲食、吸煙及幽門螺桿菌(Hp)感染等有關［8］。c-Myc 基因是細胞核內的癌基因, 可在細胞周期的不同階段誘導細胞凋亡, 刺激細胞增生, 細胞所處生長環境及細胞接受的信號類型對細胞增殖凋亡方向起著關鍵性作用。c-Myc 表達異?？赡苁菒盒阅[瘤發生的重要原因。研究證實, c-Myc 在肺癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤中高表達, 可促進腫瘤細胞分化、增殖及血管生成, 增加腫瘤向惡性轉變和進一步擴散的風險［9］。有學者研究發現, 胃癌發病早期組織中的c-Myc 表達較胃炎組織明顯提高［10］。本研究采用免疫組化法對胃癌組織中的c-Myc 表達水平進行檢測, 結果顯示, 胃癌組織、癌旁組織中c-Myc 陽性表達率分別為77.5%、13.8%, 胃癌組織中c-Myc 陽性表達率較高, 經單因素分析顯示, c-Myc陽性表達率與分化程度、TNM 分期、病灶侵襲深度、淋巴結轉移有關, 其表達水平與患者年齡、性別無明顯關系。這一結果與黃國全等［11］報道基本相符, 說明c-Myc 表達可能與胃癌細胞侵襲、淋巴結轉移等有關。CDK12 對細胞基因組的穩定性有調節作用, 并可修復受損傷的DNA, 參與細胞的分化過程。Ji 等［12］研究指出, CDK12 與卵巢癌和乳腺癌存在密切的關系。研究發現, 如乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤患者存在CDK12 高表達, 其隨著CDK12表達水平的升高, 患者腫瘤的侵襲能力也明顯增強［13-19］。本 組80 例 胃 癌 組 織 標 本 中 有87.5% 的CDK12 陽性表達率, 明顯高于癌旁組織的15.0%, 說明CDK12 的表達水平可能與胃癌的發生、進展有關, 經單因素分析發現, CDK12 表達水平與癌組織的TNM 分期、分化程度、腫瘤侵襲深度及淋巴結轉移有關, 提示CDK12 表達水平可能在胃癌轉移和浸潤及進展過程中發揮重要作用。另外, 本研究對患者生存期進行隨訪研究, 結果顯示, c-Myc 陽性表達患者的3 年生存率明顯低于c-Myc 陰性表達患者, CDK12 陽性表達患者與CDK12 陰性表達患者3 年生存率比較也有相似的結果, 說明c-Myc 和CDK12 高表達可能對疾病的進展及預后均有明顯的影響。而本研究對c-Myc、CDK12 在胃癌組織中的關系進行分析發現, 兩者具有明顯的正相關性, 表明c-Myc、CDK12 可能在胃癌的發生、進展過程中及腫瘤侵襲轉移過程中發揮相互協同、相互影響的作用, 但其具體作用機理并未明確, 需在后續研究中擴大樣本量, 從分子學角度進一步探討。

總之, c-Myc、CDK12 在胃癌組織中異常高表達,兩者呈正相關性, 并與腫瘤的TNM 分期、分化程度、腫瘤侵襲深度及淋巴結轉移有關, 并對患者的預后有明顯影響, 可通過檢測兩者水平評估胃癌患者的預后。