依托考昔片自研制劑處方優選及體外溶出度評價

尹朋朋，劉茜英，肖 慧，許俊博

（華潤雙鶴藥業股份有限公司，北京 100102）

依托考昔為高選擇性環氧合酶-2 抑制劑，廣泛用于治療骨關節炎、類風濕關節炎、強直性脊柱炎、慢性下腰背疼痛、急性痛風性關節炎、原發性痛經、術后疼痛等。依托考昔為難溶性化合物，其體內吸收受原料藥粒徑和輔料用量的影響較大。國家藥品監督管理局《仿制藥參比制劑目錄（第二十二批）》中推薦依托考昔片參比制劑（商品名Arcoxia）有3種規格（30，60，120 mg），參考原國家食品藥品監督管理總局《以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》等要求，多采用申報的最高規格進行生物等效性研究。故本研究中以120 mg 參比制劑為開發目標，以自研制劑與參比制劑在不同介質中溶出曲線的相似因子（f2）值為評價標準，參考2020 年版《中國藥典（四部）》［1］132-133及文獻［2-6］優選自研制劑的處方，并評價體外溶出度，為保障自研制劑與參比制劑的體內生物等效性研究提供參考?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GL - 25B 型干法制粒機（張家港市開創機械制造有限公司）；HLS - 30 型料斗混合器（浙江小倫制藥機械有限公司）；ZPS8 型旋轉式壓片機（上海天祥健臺制藥機械有限公司）；BGB - 5F 型高效包衣機（北京航空工藝研究所）；Entris Ⅱ型電子天平（德國Sartorius公司，精度為0.01 mg）；Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent Technologies 公司）；Vision G2 Elite 8 型溶出儀（美國Hansen 公司）；KQ - 250DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

依托考昔原料藥（廣州安信醫藥有限公司，批號為F4016170303，含量99.50%）；N- 氧化物對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為190435 - 202013，含量99.90%）；無水磷酸氫鈣（江蘇德邦多菱健康科技有限公司，批號為20190610）；微晶纖維素SH-101（安徽山河藥用輔料股份有限公司，批號為20180301）；交聯羧甲基纖維素鈉SD - 711（美國DuPont 公司，批號為552112301）；硬脂酸鎂（山東聊城阿華制藥股份有限公司，批號為191001）；胃溶型薄膜包衣預混劑（上?？房蛋录夹g有限公司，批號為7HL53251）；依托考昔片參比制劑（Arcoxia，西班牙Frosst Iberica SA 公司，批號為S040362，規格為每片120 mg）。

2 方法與結果

2.1 含量測定方法建立

色譜條件：色譜柱為Waters Xterra MS C18柱（50 mm ×4.6 mm，3.5 μm）；流動相為0.02 moL/L磷酸二氫鈉溶液（以2%磷酸水溶液或氫氧化鈉溶液調pH 為2.95 ±0.05）- 乙腈（73∶27，V/V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為235 nm；柱溫為40 ℃；進樣量為10 μL。

溶液制備：取依托考昔原料藥約33 mg，精密稱定，置50 mL 容量瓶中，加乙腈超聲（功率250 W，頻率30 kHz）溶解，定容，搖勻，即得對照品貯備液；量取2 mL，置10 mL 容量瓶中，加溶出介質，定容，搖勻，即得對照品溶液。取含藥溶液12 mL，經0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液；量取2 mL，置10 mL 容量瓶中，加溶出介質，定容，搖勻，即得供試品溶液。

方法學考察：取依托考昔原料藥和N-氧化物對照品各適量，精密稱定，用乙腈-水（1∶1，V/V）溶解，加流動相制成每1 mL約含依托考昔0.1 mg、N-氧化物0.1 μg的系統適用性溶液。按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果N- 氧化物峰的相對保留時間約為0.75（0.63～0.79）；理論板數按依托考昔峰計不低于2 000，依托考昔峰與N-氧化物峰之間的分離度不小于2.0。按精密度、穩定性、重復性試驗相關要求進行考察，結果的RSD均小于2.0%，表明儀器精密度良好，供試品溶液在室溫下放置12 h內基本穩定，方法重復性良好。

2.2 溶出曲線考察

溶出條件：采用槳法［1］132-136測定，溶出條件［7-11］見表1。

表1 4種溶出介質下溶出條件Tab.1 Dissolution conditions in four dissolution media

公式：溶出度（%）=（對照品稱樣量×對照品含量×供試品稀釋倍數×供試品溶液峰面積）/（對照品溶液稀釋倍數× 規格× 對照品溶液峰面積）× 100%。累積溶出度（%）=An+（An-1+…+A2+A1）×V1/V2，其中，An為各時間點的溶出度，V1為各時間點的固定補液體積，V2為溶出介質的體積。

溶出度測定：精密量取對照品溶液與供試品溶液各適量，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，以外標法測定參比制劑在4種介質中的溶出度，并繪制溶出曲線，結果見圖1?？梢?，參比制劑在pH 1.0 鹽酸溶液中15 min后累積溶出度達100.2%，釋放速率過快；在pH 6.8磷酸鹽溶液1 h 及水中45 min 后，累積溶出度僅超過80%，3 h 后均未達100%釋放，釋放速率過慢。故采用pH 4.5 醋酸鹽溶液（釋放速率適中）為溶出介質進行處方開發。根據《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則》［2］（以下簡稱《指導原則》），結合本產品在4種介質中的溶出曲線達到平臺期的時間，確定pH 1.0 鹽酸溶液和pH 4.5 醋酸鹽溶液選擇60 min，pH 6.8 磷酸鹽溶液和水選擇90 min為累積溶出度考察終點。

2.3 自研制劑處方開發

原料藥粒徑：依托考昔原料藥為生物藥劑學分類系統Ⅱ類（低溶解- 高滲透）化合物，制劑溶出主要受原料藥粒徑影響［12-13］。根據美國食品和藥物管理局對難溶性化合物粒徑考察的要求制訂原料藥粒徑考察范圍，采用干法制粒工藝制備3批樣品（記為自研制劑Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ），考察不同原料藥粒徑對累積溶出度的影響（見表2 和圖2）。結果顯示，自研制劑Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ的f2值分別為48，67，57。原料藥粒徑d90≤9.87 μm 時，溶出略快于參比制劑，相似度較差（f2＜50）；d90≤31.5 μm 和≤59.6 μm時，自研制劑與參比制劑溶出曲線相似度較好（f2＞50）。故擬訂原料藥粒徑為＞10～＜50 μm。

圖2 不同原料藥粒徑下的制劑溶出曲線Fig.2 Dissolution profiles of preparations with different particle sizes of APIs

表2 自研制劑處方原料藥粒徑考察Tab.2 Investigation of particle sizes of APIs in self - made preparations

微晶纖維素SH - 101 與無水磷酸氫鈣用量：調整處方中微晶纖維素SH - 101 和無水磷酸氫鈣的用量，按干法制粒工藝制備4 批樣品（記為自研制劑Ⅰ'，Ⅱ'，Ⅲ'，Ⅳ'），比較自研制劑與參比制劑的溶出曲線（見表3和圖3）。結果顯示，自研制劑Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ的f2值分別為53，67，50，61。故初步確定處方中微晶纖維素SH -101 的用量為每片128 mg，無水磷酸氫鈣的用量為每片140 mg。

圖3 不同微晶纖維素SH-101與無水磷酸氫鈣用量下的制劑溶出曲線Fig.3 Dissolution profiles of preparations with different dosages of microcrystalline cellulose SH - 101 and anhydrous calcium hydrogen phosphate

表3 處方微晶纖維素SH-101與無水磷酸氫鈣用量考察（mg）Tab.3 Investigation of dosages of microcrystalline cellulose SH -101 and anhydrous calcium hydrogen phosphate in self - made preparations（mg）

硬脂酸鎂（外加）用量：硬脂酸鎂為疏水性輔料，用量過大會對物料潤滑過度，引起溶出延緩。內加硬脂酸鎂制粒和壓片過程中，疏水薄膜難以成形，故僅需保證干法制粒過程中不發生黏輥軸即可，用量對制劑溶出影響較??；外加硬脂酸鎂在混合過程中可能形成疏水薄膜包裹顆粒，從而影響制劑溶出。按干法制粒工藝制備了3批樣品（記為自研制劑Ⅰ″，Ⅱ″，Ⅲ″），對外加硬脂酸鎂的用量進行考察（見表4 和圖4）。為保證不同處方制備的樣品質量一致，對微晶纖維素SH - 101 的用量進行了微調。結果顯示，自研制劑Ⅰ″，Ⅱ″，Ⅲ″的f2值分別為63，67，68。故確定處方中硬脂酸鎂（外加）的用量為每片3 mg。

表4 自研制劑處方硬脂酸鎂（外加）用量考察（mg）Tab.4 Investigation of dosages of magnesium stearate added in self - made preparations（mg）

最終處方確認：最終擬訂處方見表5。根據《指導原則》，應對比自研制劑與參比制劑在4 種溶出介質的溶出曲線。根據f2值對比選點原則［2］，pH 1.0 鹽酸溶液為快速溶出，不進行f2值對比；pH 4.5 醋酸鹽溶液選擇5，10，15，30 min的溶出度進行f2值對比；pH 6.8磷酸鹽溶液選擇5，10，15，30，45，60，90 min；水選擇5，10，15，30，45，60 min（見圖5）。結果顯示，最終擬訂處方自研制劑與參比制劑以pH 4.5 醋酸鹽溶液、pH 6.8 磷酸鹽溶液和水為溶出介質，f2值分別為79，68，78，均高于60，相似性良好；且以pH 1.0 鹽酸溶液為溶出介質，參比制劑和自研制劑在15 min 內的溶出度均≥85%，故二者溶出曲線相似［2］。

A. pH 1.0鹽酸溶液 B. pH 4.5醋酸鹽溶液 C.pH 6.8磷酸鹽溶液 D. 水圖5 4種溶出介質下的自研制劑與參比制劑溶出曲線A.pH 1.0 hydrochloric acid solution B.pH 4.5 acetate solution C.pH 6.8 phosphate solution D.WaterFig.5 Dissolution profiles of self - made and reference preparations in four dissolution media

表5 最終擬訂處方（mg）Tab.5 Final prescriptions（mg）

3 討論

3.1 原料藥粒徑對制劑溶出度的影響

依托考昔制劑的體外溶出和體內吸收主要受原料藥粒徑的影響［12-13］。原料藥粒徑減小，體外溶出提高，體內吸收增加。這主要是由于化合物的溶解速率受與水接觸面積的影響，即比表面積越大，溶解速率越快（其中，比表面積為表面積與體積的比值，隨著顆粒尺寸的減小而顯著增加［14-15］）。故將本品制劑中原料藥的粒徑控制在＞10～＜50 μm。

3.2 輔料對制劑溶出度的影響

依托考昔片制備為干法制粒工藝，需2次添加硬脂酸鎂。疏水性的硬脂酸鎂用量會影響原料在水中的溶解度，進而影響制劑的體外溶出和體內吸收［16-18］。內加硬脂酸鎂用量對制劑溶出的影響較小，故重點考察外加用量。最終確定本品中硬脂酸鎂的外加用量為每片3 mg。難溶性化合物在處方開發中應重點關注硬脂酸鎂的用量。

3.3 體內外相關性建立

依托考昔具有高滲透性，故溶解度為該藥物吸收的限制因素。普通口服制劑的體外溶出曲線和體內吸收易建立良好的體內外相關性［19-21］。自研制劑與參比制劑的體外溶出曲線對比結果顯示，4 條溶出介質下的溶出曲線均有較好的相似度?；谌艹銮€對比，篩選并確定處方，可顯著提高生物等效性試驗的成功率。

3.4 小結

本研究中以pH 4.5醋酸鹽溶液為有區分力的溶出介質，以原料藥粒徑和輔料用量為主要篩選目標，成功篩選出了與參比制劑溶出性質基本一致的自研制劑處方。為保證自研制劑與參比制劑的生物等效性，后續需更深入地研究。