HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1對宮頸癌的早期診斷價值

倪紅妙 曾慧 丁利勝

[摘要]?目的?探討人乳頭瘤病毒（human?papilloma?virus，HPV）-DNA分型聯合血清中性粒細胞-淋巴細胞比值（lymphocyte?ratio，NLR）、雙皮質素樣激酶1（bicorticoid?kinase，DCLK1）水平對宮頸癌的早期診斷價值。方法?隨機納入2018年8月至2022年6月在筆者醫院婦科確診的120例早期宮頸癌患者為宮頸癌組，120例良性病變患者為良性組。采用ELISA法檢測DCLK1水平；采用自動血細胞分析儀檢測NLR；采用HPV分型基因芯片檢測系統檢測宮頸分泌物的HPV亞型；采用受試者操作特征（receiver?operator?curve，ROC）曲線來分析血清NLR、DCLK1水平診斷宮頸癌的截斷值；采用四表格分析HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平單獨及聯合對宮頸癌的診斷價值。結果?與良性組相比，宮頸癌組血清NLR、DCLK1水平顯著升高（P<0.05）。宮頸癌組的各類型HR-HPV陽性率均顯著高于良性組（P<0.05）。以血清NLR、DCLK1水平為檢驗變量繪制ROC曲線，血清NLR、DCLK1預測早期宮頸癌的曲線下面積（area?under?curve，AUC）分別為0.724、0.718，截斷值分別為3.08、3.32。HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1檢出假陽性18例，假陰性17例，Kappa值為0.725，與病理結果一致性較高。HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1水平診斷早期宮頸癌的敏感度、陰性預測值及準確度均明顯高于HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平單獨診斷（P<0.05）。結論?HPV-DNA分型聯合NLR、DCLK1對早期宮頸癌的診斷結果與病理結果具有較高的一致性，且敏感度、準確度明顯提高。

[關鍵詞]?宮頸癌；中性粒細胞/淋巴細胞；雙皮質素樣激酶1；HPV-DNA分型；診斷

[中圖分類號]?R737.33??????[文獻標識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.08.003

Diagnostic?value?of?HPV-DNA?typing?combined?with?serum?NLR?and?DCLK1?for?cervical?cancer

NI?Hongmiao，?ZENG?Hui，?DING?Lisheng

Laboratory?Department?of?Hangzhou?Ninth?Peoples?Hospital，?Hangzhou?311225，?Zhejiang，?China

[Abstract]?Objective?To?investigate?the?value?of?receiver?operating?curve?human?papilloma?virus?（HPV）-DNA?typing?combined?with?serum?neutrophil?lymphocyte?ratio?（NLR）?and?bicorticoid?kinase?1?（DCLK1）?levels?in?the?early?diagnosis?of?cervical?cancer.?Methods?A?total?of?120?patients?with?early?cervical?cancer?diagnosed?in?our?obstetrics?and?gynecology?department?from?August?2018?to?June?2022?were?randomly?included?as?cervical?cancer?group，?and?120?patients?with?benign?lesions?were?included?as?benign?group.?The?level?of?DCLK1?was?detected?by?ELISA;?NLR?was?detected?by?automatic?blood?cell?analyzer;?HPV?subtypes?in?cervical?secretions?were?detected?by?HPV?genotyping?gene?chip?detection?system;?the?cut-off?values?of?serum?NLR?and?DCLK1?levels?in?the?diagnosis?of?cervical?cancer?were?analyzed?by?using?the?receiver?operator?curve?（ROC）;?four?table?method?was?applied?to?analyze?the?diagnostic?value?of?HPV-DNA?typing，?serum?NLR，?DCLK1?levels?alone?and?in?combination?for?cervical?cancer.?Results?Compared?with?benign?group，?the?levels?of?serum?NLR?and?DCLK1?in?cervical?cancer?group?were?obviously?higher?（P<0.05）.?The?positive?rate?of?HR-HPV?in?cervical?cancer?group?was?obviously?higher?than?that?in?benign?group?（P<0.05）.?The?ROC?curve?was?drawn?with?serum?NLR?and?DCLK1?levels?as?test?variables，?the?results?showed?that?the?AUC?of?serum?NLR?and?DCLK1?predicting?early?cervical?cancer?was?0.724?and?0.718，?respectively，?and?the?cut-off?value?was?3.08?and?3.32，?respectively.?HPV-DNA?typing?combined?with?serum?NLR?and?DCLK1?detected?18?false?positives?and?17?false?negatives，?Kappa?value?was?0.725，?which?was?consistent?with?pathological?results.?The?sensitivity，?negative?predictive?value?and?accuracy?of?HPV-DNA?typing?combined?with?serum?NLR?and?DCLK1?levels?in?the?diagnosis?of?early?cervical?cancer?were?obviously?higher?than?those?of?HPV-DNA?typing，?serum?NLR?and?DCLK1?levels?alone?（P<0.05）.?Conclusion?The?results?of?HPV-DNA?typing?combined?with?NLR?and?DCLK1?in?the?diagnosis?of?early?cervical?cancer?are?highly?consistent?with?the?pathological?results，?and?the?sensitivity?and?accuracy?are?obviously?improved.

[Key?words]?Cervical?cancer;?Neutrophils/lymphocytes;?Doublecortin?like?kinase?1;?HPV-DNA?typing;?Diagnosis

宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，其發病率和病死率分別在全球女性惡性腫瘤中排名第3位和第4位，嚴重危害女性的身心健康[1]。隨著靶向治療等新型治療技術的出現，宮頸癌的治療方法已經逐步向精確醫學轉變，而早期診斷和早期治療是提高宮頸癌患者生存率的有效手段。雖然有細胞學涂片（thinprep?cytologic?test，TCT）和人乳頭瘤病毒（human?papilloma?virus，HPV）檢測等篩查工具，但其平均敏感度和特異性令人并不滿意[2]。因此，需要有效的生物標志物，可為宮頸癌的早期診斷的治療提供參考。近年研究證實，惡性腫瘤的發生和發展與炎癥因子密切相關，在常見的血液炎癥指標中，中性粒細胞-淋巴細胞比值（neutrolphil?to?lymphocyte?ratio，NLR）可有效反映人體內炎癥反應[3]。NLR在睪丸生殖細胞腫瘤（testicular?germ?cell?tumors，TCCT）中表達升高，表現出良好的鑒別診斷潛力，可作為預測TCCT的標志物[4]。

雙皮質素樣激酶1（doublecortin-like?kinase?1，DCLK1）是一種多功能蛋白，參與干細胞生成、腫瘤細胞克隆形成和腫瘤發生等過程[5]。研究表明，DCLK1的表達水平隨著腫瘤嚴重程度的惡化而增加，而降低DCLK1表達可顯著抑制腫瘤發展，且不會對正常干細胞造成明顯損傷[6]。HPV是宮頸癌形成的重要因素，HPV-DNA分型檢測可有效闡明HPV感染與宮頸癌發病之間的關系[7]。宮頸癌的進展過程比較復雜，僅憑單個指標難以對其進行準確的早期診斷，需多個指標聯合進行判定[8-9]。本研究檢測宮頸癌患者血清中NLR、DCLK1水平，分析二者及聯合HPV-DNA分型對宮頸癌的早期診斷價值。

1??資料與方法

1.1??一般資料

選取2018年8月至2022年6月在筆者醫院婦科確診的120例早期宮頸癌患者為宮頸癌組。納入標準：①通過醫療手段，患者被確診為早期宮頸癌[10]；②首次被確診，入組前未進行治療（放療、化療等）；③臨床資料完整。排除標準：①合并其他腫瘤疾?。ㄈ缛橄侔?、卵巢癌等）者；②子宮肌瘤者；③肝腎功能異?；虿蝗?；④認知障礙，無法正常交流者。另外同期納入120例良性病變患者作為良性組。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），見表1。該研究經本院倫理委員會批準（倫理審批號：2018LW57），研究對象均簽署知情同意書。

1.2??血清NLR、DCLK1檢測

清晨空腹抽取研究者靜脈血6ml，分為2份，一份室溫靜置30min，以4000r/min離心后分離獲得血清，使用特定的酶聯免疫測定（enzyme-linked?immunosorbent?assay，ELISA）試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司）檢測血清中DCLK1的蛋白水平。另一份使用邁瑞BC-6800全自動血液細胞分析儀檢測中性粒細胞（neutrophils，NeuC）及淋巴細胞（lymphocyte，LymC），中性粒細胞/淋巴細胞（neutrophil-lymphocyte?ratio，NLR）定義為NeuC絕對值除以LymC絕對值的比值。

1.3??HPV-DNA分型檢測

在患者月經期結束1周后進行陰道取樣檢測。將采集的宮頸口分泌物置于細胞保存液中保存，使用HPV分型基因芯片檢測系統檢測宮頸分泌物的亞型，其中高危亞型18種，任何一種亞型檢測陽性則視為HR-HPV陽性。

1.4??觀察指標

比較宮頸癌組、良性組血清NLR、DCLK1水平及HPV-DNA分型情況，受試者操作特征（receiver?operator?characteristic，ROC）曲線分析血清NLR、DCLK1水平診斷早期宮頸癌的截斷值；以病理結果為金標準，分析HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平單獨及聯合對早期宮頸癌的診斷價值。

1.5??統計學方法

采用SPSS?25.0統計學軟件對數據進行處理分析，計量資料均符合正態分布，以均數±標準差（）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數資料以例數（百分比）[n（%）]表示，采用χ2檢；采用ROC分析血清NLR、DCLK1水平診斷宮頸癌的截斷值；采用四表格分析HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平單獨及聯合對宮頸癌的診斷價值。P<0.05為差異有統計學意義。

2??結果

2.1??血清NLR、DCLK1與HPV-DNA分型比較

與良性組相比，宮頸癌組血清中的NLR、DCLK1水平升高（P<0.05），見表2。宮頸癌組的各類型HR-HPV陽性率均顯著高于良性組（P<0.05），見表3。

2.2??血清NLR、DCLK1水平對早期宮頸癌的診斷價值

以血清NLR、DCLK1水平為檢驗變量繪制ROC曲線。血清NLR、DCLK1預測早期宮頸癌的曲線下面積（area?under?curve，AUC）分別為0.724、0.718，截斷值分別為3.08、3.32，見圖1。

2.3??HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1水平診斷宮頸癌與病理標準的一致性分析

HPV-DNA分型單獨檢出假陽性17例，假陰性24例，Kappa值為0.658（P<0.05），與病理結果一致性較高。血清NLR水平檢出假陽性36例，假陰性28例，Kappa值為0.467（P<0.05）；血清DCLK1水平檢出假陽性55例，假陰性21例，Kappa值為0.367（P<0.05）。HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1水平檢出假陽性16例，假陰性17例，Kappa值為0.725（P<0.05），與病理結果一致性較高，見表4。

2.4??HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1水平診斷早期宮頸癌的效能

HPV-DNA分型聯合血清NLR、DCLK1水平診斷早期宮頸癌的敏感度、陰性預測值及準確度均明顯高于HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平單獨診斷（P<0.05），見表5。

3??討論

宮頸癌是一種影響女性生殖系統的惡性腫瘤，其發病率居女性常見癌癥中第4位，對女性身心健康構成嚴重威脅[11-13]。晚期宮頸癌治療效果較差且易復發，生存率亟待提高；然而宮頸癌在早期無較多典型癥狀，其中陰道出血、分泌物異常等癥狀易與其他婦科病混淆，早期診斷難度較大[14]。因此，尋找有效的生物標志物對宮頸癌進行早期診斷，對患者的生命健康有著重大意義。

癌細胞以及周圍的基質和炎性因子通過相互協調作用產生炎癥性腫瘤微環境（tumor?microenvironment，TME），可誘導癌癥的發生，并影響癌癥進展的所有階段[15-16]。炎癥標志物具有成本低、易獲得的特點，且炎癥與腫瘤之間的關系被多項研究證實，它可能通過刺激腫瘤細胞增殖或遷移侵襲，在癌癥的進展中起重要作用[4，17]。NLR是炎癥疾病中簡單、有效的代表性標志物[4]。本研究結果表明，宮頸癌組的NLR顯著高于良性組，這與Han等[18]發現在子宮宮頸癌中NLR上調的結果一致，為NLR用于診斷早期宮頸癌疾病提供了理論支持。DCLK1是一種微管相關蛋白，屬于鈣調蛋白依賴性激酶（calmodnlin?dependent?protein?kinase，CaMK）家族成員，可通過促進惡性腫瘤的生長、EMT過程等參與腫瘤的發生、發展。

DCLK1作為腫瘤中潛在的癌癥干細胞標志物，在結直腸癌中DCLK1表達上調，DCLK1抑制劑可以阻斷宮頸癌AR1/β-連環蛋白途徑，減弱癌細胞干性[19]。Lai等[20]的研究表明，DCLK1在子宮內膜癌中DCLK1表達上調，可通過調節Akt/NF-κB途徑活化，促進子宮內膜癌細胞的增殖和轉移。與上述研究結果一致，本實驗中宮頸癌組的DCLK1顯著高于良性組，這提示DCLK1參與宮頸癌疾病的發生、發展。另外，研究發現宮頸癌的發生發展受NF-κB途徑調控，而DCLK1參與NF-κB信號轉導，NLR則由NF-κB途徑激活[21-22]。此外，NLR、DCLK1預測早期宮頸癌的AUC為0.724、0.718，提示血清NLR、DCLK1對早期宮頸癌有一定的診斷價值。

宮頸癌誘因繁多，其中HPV感染是宮頸癌的主要誘導因素之一，因此，HPV篩查、TCT檢查方法是早期宮頸癌篩查的主要手段[23]。然而，細胞學假陽性率很高，易造成過度醫療和額外的經濟損失，因此，建議進行敏感度高的HPV-DNA檢測[24]。研究顯示，多項指標聯合可提高對宮頸癌診斷的準確度[25]。本研究中將HPV-DNA分型作為早期宮頸癌的診斷標準，發現HPV-DNA分型與病理結果的一致性為良，表明單獨使用HPV-DNA分型作為早期宮頸癌的獨立診斷方法不甚理想。因此本研究將HPV-?DNA分型、NLR、DCLK1聯合用于早期宮頸癌的診斷，結果顯示，聯合診斷結果與病理結果具有較高的一致性，且具有更高的敏感度、陰性預測值及準確度，表明NLR、DCLK1聯合HPV-DNA分型對于早期宮頸癌的診斷效果較為理想，可較為靈敏地篩查出早期宮頸癌患者，并盡早進行治療。

綜上所述，HPV-DNA分型聯合NLR、DCLK1對早期宮頸癌的診斷結果與病理結果具有較高的一致性，且敏感度、準確度明顯提高。由于宮頸癌具有可預防性、可恢復性，因此，對其早診斷、早防治，可有效保障患者生命安全。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻]

[1] BRAY?F，?FERLAY?J，?SOERJOMATARAM?I，?et?al.?Global?cancer?statistics?2018：?GLOBOCAN?estimates?of?incidence?and?mortality?worldwide?for?36?cancers?in?185?countries[J].?CA?Cancer?J?Clin，?2018，?68（6）：?394–424.

[2] SHEN?Z?W，?ZHANG?L?J，?SHEN?Z?Y，?et?al.?Efficacy?of?raman?spectroscopy?in?the?diagnosis?of?uterine?cervical?neoplasms：?A?Meta-analysis[J].?Front?Med?（Lausanne），?2022，?9（1）：?828346.

[3] LENG?J，?WU?F，?ZHANG?L.?Prognostic?significance?of?pretreatment?neutrophil-to-lymphocyte?ratio，?platelet-?to-lymphocyte?ratio，?or?monocyte-to-lymphocyte?ratio?in?endometrial?neoplasms：?A?systematic?review?and?meta-?analysis[J].?Front?Oncol，?2022，?12（1）：?734948.

[4] WANG?S，?YANG?X，?YU?Z，?et?al.?The?values?of?systemic?immune-inflammation?index?and?neutrophil-lymphocyte?ratio?in?predicting?testicular?germ?cell?tumors：?A?retrospective?clinical?study[J].?Front?Oncol，?2022，?12（1）：?893877.

[5] UNDI?R?B，?LARABEE?J?L，?FILIBERTI?A，?et?al.?Targeting?doublecortin-like?kinase?1?（DCLK1）-regulated?SARS-CoV-2?pathogenesis?in?COVID-19[J].?J?Virol，?2022，?96（17）：?e0096722.

[6] KIM?J?H，?PARK?S?Y，?JEON?S?E，?et?al.?DCLK1?promotes?colorectal?cancer?stemness?and?aggressiveness?via?the?XRCC5/COX2?axis[J].?Theranostics，?2022，?12（12）：?5258–5271.

[7] 馮明明，?周林，?張潔，?等.?宮頸癌術后復發的危險因素及SCC-Ag、HR-HPV對復發的預測價值分析[J].?現代生物醫學進展，?2020，?20（8）：?1583–1587.

[8] MENG?Z，?ZHAO?Z?C，?LI?B?Y，?et?al.?A?cervical?histopathology?dataset?for?computer?aided?diagnosis?of?precancerous?lesions[J].?IEEE?Trans?Med?Imaging，?2021，?40（6）：?1531–1541.

[9] PONTES?V?B，?MARTINS?L?F?L，?SZKLO?M，?et?al.?Factors?associated?with?cervical?intraepithelial?neoplasia?（CIN2/CIN3），?early?stage?and?advanced?stage?of?cervical?cancer?diagnosis?in?the?brazilian?amazonian?region[J].?Eur?J?Cancer?Prev，?2020，?29（4）：?342–345.

[10] 方三高，?石群立，?周曉軍，?等.?解讀年女性生殖器官腫瘤分類（宮?頸）[J].?重慶醫學，?2015，?43（28）：?3889–3899.

[11] ARBYN?M，?WEIDERPASS?E，?BRUNI?L，?et?al.?Estimates?of?incidence?and?mortality?of?cervical?cancer?in?2018：?A?worldwide?analysis[J].?Lancet?Glob?Health，?2020，?8（2）：?e191–e203.

[12] 候麗盈，?劉艷，?魯鵬，?等.?白蛋白結合型紫杉醇在宮頸癌新輔助化療中的研究進展[J].?國際婦產科學雜志，?2021，?48（2）：?135–143.

[13] SUNG?H，?FERLAY?J，?SIEGEL?R?L，?Et?al.?Global?cancer?statistics?2020：?GLOBOCAN?estimates?of?incidence?and?mortality?worldwide?for?36?cancers?in?185?countries[J].?CA?Cancer?J?Clin，?2021，?71（3）：?209–249.

[14] 王小杰，?張夢.?血清標志物水平、HPV-DNA分型對早期宮頸癌的診斷價值[J].?實用癌癥雜志，?2022，?37（4）：?675–678.

[15] 吉麗銀，?符策崗.?腫瘤微環境與乳腺癌發生發展[J].?中國組織化學與細胞化學雜志，?2022，?31（4）：?395–400.

[16] 裴文浩，?王文銳，?楊清玲，?等.?腫瘤細胞來源的外泌體在腫瘤微環境中的調控作用及其與腫瘤相關巨噬細胞的關系[J].?沈陽醫學院學報，?2022，?24（4）：?405–411.

[17] KLAVER?D，?GANDER?H，?DOBLER?G，?et?al.?The?P2Y?receptor?of?human?M2?macrophages?activates?canonical?and?IL-1?receptor?signaling?to?translate?the?extracellular?danger?signal?ATP?into?anti-inflammatory?and?pro-?angiogenic?responses[J].?Cell?Mol?Life?Sci，?2022，?79（10）：?519.

[18] HAN?X，?LIU?S，?YANG?G，?et?al.?Prognostic?value?of?systemic?hemato-immunological?indices?in?uterine?cervical?cancer：?A?systemic?review，?meta-analysis，?and?meta-regression?of?observational?studies[J].?Gynecol?Oncol，?2021，?160（1）：?351–360.

[19] WANG?L，?ZHAO?L，?LIN?Z，?et?al.?Targeting?DCLK1?overcomes?5-fluorouracil?resistance?in?colorectal?cancer?through?inhibiting?CCAR1/β-catenin?pathway-mediated?cancer?stemness[J].?Clin?Transl?Med，?2022，?12（5）：?e743.

[20] LAI?T，?QIU?H，?SI?L，?et?al.?Long?noncoding?RNA?BMPR1B-AS1?facilitates?endometrial?cancer?cell?proliferation?and?metastasis?by?sponging?miR-7-2-3p?to?modulate?the?DCLK1/Akt/NF-κB?pathway[J].?Cell?Cycle，?2022，?21（15）：?1599–1618.

[21] MINOCHA?T，?DAS?M，?RAI?V，?et?al.?Melatonin?induces?apoptosis?and?cell?cycle?arrest?in?cervical?cancer?cells?via?inhibition?of?NF-κB?pathway[J].?Inflammopharmacology，?2022，?30（4）：?1411–1429.

[22] FANG?X，?WANG?Y，?ZHANG?Y，?Et?al.?NLRP3?inflammasome?and?its?critical?role?in?gynecological?disorders?and?obstetrical?complications[J].?Front?Immunol，?2021，?11（1）：?555826.

[23] 黎知青，?賀玉娟，?閆萌等.?HPV聯合TCT檢查在宮頸癌篩查中的應用分析[J].?微循環學雜志，?2021，?31（2）：?52–56.

[24] LI?T，?LAI?Y，?YUAN?J.?The?diagnostic?accuracy?of?TCT?+?HPV-DNA?for?cervical?cancer：?Systematic?review?and?meta-analysis[J].?Ann?Transl?Med，?2022，?10（14）：?761.

[25] HUSAIYIN?S，?JIAO?Z，?YIMAMU?K，?et?al.?Thin?prep?cytology?combined?with?HPV?detection?in?the?diagnosis?of?cervical?lesions?in?1622?patients[J].?PLoS?One，?2021，?16（12）：?e0260915.

（收稿日期：2023–03–28）

（修回日期：2023–11–24）

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