血管內皮生長因子表達與肺癌預后的關系

張勝輝，王軼靈，王明松，曹 佳，費 苛，校宏兵

（同濟大學附屬上海市第十人民醫院：1.胸心外科；2.普外科 200072）

目前肺癌被認為是世界上最常見的惡性腫瘤之一，通常的治療方式有手術、化療、放療、中醫中藥輔助治療等，然而肺癌患者的預后往往較差。隨著分子生物學的發展和人類基因組學的重大突破，人們已注意到腫瘤組織細胞某些基因結構的改變、表達的改變以及蛋白功能的改變是影響其生物學活性的最根本因素。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作為一種高度特異和高效的血管調控因子，目前已在多種腫瘤組織中被證實呈高表達，并被證實與腫瘤的生長密切相關［1］。為此作者應用免疫組化技術對78例肺癌組織中VEGF表達進行檢測，探討其表達水平與增殖細胞核抗原（PCNA）、p53表達、淋巴結轉移和患者預后的關系。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2001年1月至2004年12月在本院確診為原發性肺癌進行手術切除并得到隨訪的78例患者。其中男56例，女22例；年齡45～71歲，平均58歲。鱗癌24例，腺癌38例，大細胞癌11例，腺鱗癌5例。按1997年UICC的肺癌TNM分期，78例患者術后病理分期為Ⅰ期18例，Ⅱa期及Ⅱb期27例，Ⅲa期33例?；颊咝g后均行GP化療方案化療4個療程，并隨訪5年。

1.2試劑 鼠抗人VEGF、p53、PCNA單抗和相應的二抗、三抗均為丹麥DAKO公司產品，一抗按1∶100稀釋。免疫組化染色采用鏈霉卵白素－辣根過氧化酶法。

1.3實驗方法 腫瘤組織常規用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片厚5μm。以PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性肺癌組織為陽性對照。觀察5個視野（×400），計算細胞陽性率。陽性細胞數小于10%為陰性，陽性細胞數大于或等于10%為陽性。其中陽性細胞數小于50%為低表達，≥50%為高表達。全部病例隨訪5年，統計生存期。

1.4統計學方法 兩樣本率比較用χ2檢驗。VEGF和PCNA、p53表達作等級相關分析。用Cox模型作多因素分析。生存期用時序檢驗。

2 結 果

2.1VEGF、PCNA和p53表達 VEGF陽性信號為棕黃色，定位于細胞質（插頁Ⅱ圖1、2）。78例肺癌中VEGF總表達陽性率為94.87%（74/78），VEGF高表達者為48.72%（38/78）、低表達者為51.28%（40/78）。不同組織學類型肺癌組織中VEGF表達陽性率比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。PCNA和p53陽性反應于細胞核內，為紅棕色顆粒。78例肺癌組織中p53表達陽性率為44.87%（35/78），PCNA表達陽性率為96.15%（75/78）。

圖1 PVL組與SO組腸系膜組織學改變（HE染色，×100）

圖2 PVL組與SO組VEGF免疫組化染色（×400）

2.2VEGF表達與PCNA和p53的關系 VEGF表達陽性肺癌組織中98.65%PCNA陽性（73/74），VEGF表達陰性肺癌組織中50.00%PCNA陽性（2/4），兩組比較，差異有統計學意義（χ2＝24.955，P＜0.005）。VEGF高表達肺癌組織中p53表達陽性率為47.37%（18/38），VEGF低表達肺癌組織中p53表達陽性率為42.50%（17/40），兩組比較，差異無統計學意義。等級相關分析顯示，VEGF表達水平與PCNA呈明顯正相關（rs＝0.568，P＜0.001），與p53表達零相關（rs＝0.217，P＞0.05）。

2.3VEGF表達與腫瘤TNM分期及淋巴結轉移的關系 在78例患者中淋巴結轉移53例，其中VEGF高表達32例，占60.38%（32/53）；無淋巴結轉移25例，其中高表達6例，占24.00%（6/25），差異有統計學意義（χ2＝8.997，P＜0.005）。T1＋T2共32例，其中 VEGF高表達10例，占31.25%（10/32）；T346例，高表達28例，占60.87%（28/46），差異有統計學意義（χ2＝6.627，P＜0.05）。表明 VEGF與淋巴結轉移和腫瘤體積密切相關。隨肺癌組織VEGF表達增加，肺癌瘤體的體積明顯增大，淋巴結轉移明顯增多。

2.4VEGF表達與肺癌患者生存率的關系 本組78例患者5年生存率為20.5%，VEGF高表達38例中5年生存率為5.3%；VEGF低表達40例中5年生存率為35.0%。VEGF高表達患者生存率比低表達者明顯降低，差異有統計學意義（χ2＝10.569，P＜0.005）。

2.5Cox回歸分析 對患者性別、年齡、瘤體大?。ā?cm、＞3cm）、淋巴結轉移（N0、N1、N2）、TNM 分期（1997年 UICC分期法）、PCNA和VEGF表達的Cox比例風險模型分析（后退法），VEGF和PCNA可作為獨立判斷患者預后的指標。

3 討 論

本研究結果顯示，肺癌組織中VEGF表達總陽性率為94.87%，其中高表達者占48.72%；VEGF表達水平與PCNA表達呈明顯正相關，提示VEGF可能作為肺癌的一種“自分泌”生長因子直接促進腫瘤細胞的增殖。

生存期隨訪結果表明，VEGF低表達的肺癌患者總生存期明顯優于VEGF高表達患者；VEGF表達水平越高，患者預后越差。VEGF的過度表達提示肺癌患者的預后較差［2－3］。因此VEGF表達水平可作為評判肺癌預后的指標之一。目前有研究表明，肺癌患者外周血清中VEGF表達水平明顯高于正?；颊?，因此外周血清VEGF表達水平有助于判斷肺癌患者預后［4］。有研究表明，不僅VEGF過度表達與肺癌預后密切相關，VEGF受體也對肺癌預后起重要作用［5－6］，說明 VEGF在促進腫瘤血管生成和PCNA時可能還存在“外分泌”等其他調控機制，提示VEGF可能成為肺癌治療的新的生物靶點［7］。

本研究結果亦證實，VEGF高表達患者發生淋巴結轉移明顯增加。有研究表明，在淋巴結轉移的癌組織中VEGF表達水平明顯高于原發灶；在對肺癌組織切片進行免疫組化染色時也見VEGF的表達在整個病灶并不均一［8］。提示在肺癌組織中可能存在VEGF表達水平不同的細胞亞群，VEGF表達水平高的細胞亞群具有更大的侵襲力和轉移傾向，可以發生選擇性轉移，使得淋巴結轉移灶更多是由VEGF表達水平高的癌細胞構成，因此轉移灶中VEGF表達水平比原發灶高。此外VEGF促進腫瘤淋巴結轉移還可能存在著不依賴于腫瘤血管形成的其他機制［9］。

總之，本研究結果顯示，VEGF能促進肺癌生長和轉移，VEGF表達水平可以作為判斷肺癌預后指標之一。

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