核因子－κB在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義

范艷燕

（南京醫科大學附屬第二醫院東院／南京市第三醫院婦產科 210003）

宮頸癌是女性生殖道惡性腫瘤發病率最高的腫瘤，在所有女性癌瘤中也僅居乳腺癌之后，嚴重危害婦女健康。據2000年世界范圍內統計，每年全世界約有50萬新發病例；而中國每年的新發病例為13萬以上，每年有2～3萬婦女死于宮頸癌?？梢娕R床上迫切需要更新、更可靠的宮頸癌腫瘤標記物作為評價預后及指導治療的指標。本研究通過檢測宮頸癌患者腫瘤細胞胞核中核因子－κB（NF－κB）p65的表達來探討其臨床意義。

1 臨床資料

1.1 研究對象 選擇1998年1月1日至2008年8月31日在南京市第三醫院婦產科住院行手術治療的宮頸癌患者43例，術前均無化、放療及其他治療史，所有患者不合并其他炎癥疾病。年齡35～67歲，中位48歲。臨床分期按國際婦產科聯盟（FIGO）2000年標準［1］：Ⅰa期9例，Ⅰb期20例，Ⅱa期14例；病理分級：高分化（G1）14例，中分化（G2）18例，低分化（G3）11例；病理類型：鱗癌38例，腺癌5例；淋巴結轉移27例，無淋巴結轉移16例。選擇同期在此因宮頸上皮內瘤樣病變（CIN）行宮頸錐切術的病例32例（CINⅠ15例，CINⅡ8例，CINⅢ9例）和在門診行宮頸活檢術為正常宮頸者43例作為對照。所有病例標本均經組織病理學檢查確診。標本經甲醛固定常規石蠟包埋，5μm連續切片。

1.2 試劑 NF－κBp65兔抗人單克隆抗體購自福建邁新公司，二氨基聯苯胺（DAB）購自美國Sigma公司，Envision試劑盒購自美國DAKO公司。

1.3 檢測方法 免疫組化染色采用Envision二步法［2］。常規脫蠟，放入枸櫞酸鈉緩沖溶液（10mmol／L，pH6.0）中，微波爐170W加熱16min抗原修復。滴加NF－κBp65抗體4℃過夜。用磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）漂洗10min，山羊抗兔Envision二抗（1∶100）37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復染，常規脫水，透明，封片。用PBS代替一抗作為陰性對照，用已知骨髓瘤組織切片作為陽性對照。

1.4 結果判定 免疫組化結果判定：陽性細胞為胞漿或胞核著色呈黃色［3］。NF－κBp65亞單位在腫瘤細胞漿、細胞核均有表達，因為活化的p65蛋白只有進入細胞核才能發揮轉錄調控作用，故陽性細胞計數以核染色為準［4］。

1.5 統計學方法 NF－κBp65的表達量采用SPSS10.0統計軟件進行t檢驗和χ2檢驗。

2 結 果

2.1 NF－κBp65的表達 NF－κBp65在宮頸癌、CINⅢ、CINⅡ、CINⅠ和正常宮頸組織的表達陽性率分別為67.4%（29／43）、66.7%（6／9）、25.0%（2／8）、6.7%（1／15）、0%（0／43）。正常宮頸組與CINⅠ組比較，差異無統計學意義（χ2＝0.31，P＞0.05）；CINⅠ組與 CINⅡ組比較，差異無統計學意義（χ2＝0.27，P＞0.05）；CINⅡ組與CINⅢ組比較，差異無統計學意義（χ2＝1.49，P＞0.05）；CINⅢ組與宮頸癌組比較，差異無統計學意義（χ2＝0.39，P＞0.05），宮頸癌組與正常宮頸組比較，差異有統計學意義（χ2＝54.52，P＜0.001），宮頸癌組與正常宮頸組比較，差異有統計學意義（χ2＝54.52，P＜0.001），見表1。

2.2 NF－κBp65表達與臨床病理關系 NF－κBp65在Ⅰa期的表達陽性率為33.3%，Ⅰb期為65.0%，Ⅱa期為92.9%，三者兩兩比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。在G1～2的表達陽性率為57.1%，G3為72.4%，二者比較，差異無統計學意義（χ2＝0.472，P＞0.05）；在鱗癌中的表達陽性率為68.4%，腺癌為60.0%，二者比較，差異無統計學意義（χ2＝0.017，P＞0.05）；在無盆腔淋巴結轉移中的表達陽性率為43.8%，盆腔淋巴結轉移者為81.5%，二者比較，差異有統計學意義（χ2＝6.511，P＜0.05），見表2。

表1 NF－κBp65在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織的表達

表2 NF－κBp65表達與臨床病理的關系

3 討 論

腫瘤發病機制在分子生物學領域的研究證明許多基因及細胞因子在宮頸癌的演進過程中發揮重要作用。近年來對NF－κB進行的大量研究發現，其是具有多向性轉錄調節作用的序列特異性DNA結合蛋白，調控多種基因的表達，參與細胞增殖、凋亡及細胞因子的產生［5］。

NF－κB是1986年Sen和Baltimore首先從B淋巴細胞核抽提物中檢驗出的［6］，是由兩個亞單位構成的二聚體復合物。其中由p65和p50或p52亞單位構成的異二聚體幾乎存在于所有真核細胞內。細胞未受到刺激時，NF－κB二聚體與其抑制物結合，不具有調節基因轉錄的能力［7］。當細胞受到內毒素、過氧化物、細胞毒素、紫外線、離子射線等細胞外信號刺激時，NF－κB被“釋放”，迅速從細胞質進入細胞核，參與細胞因子、趨化因子、生長因子、急性期蛋白、免疫受體、轉錄因子等基因的轉錄［8］，影響細胞增殖、凋亡，參與腫瘤的發生、發展，同時影響抗腫瘤細胞毒性藥物及離子輻射的敏感性。

本研究結果顯示，NF－κBp65在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織表達陽性率有明顯差異；在宮頸癌中，Ⅰa期、Ⅰb期和Ⅱa期三者比較，表達陽性率有明顯差異，盆腔有、無淋巴結轉移的表達陽性率有明顯差異，說明NF－κB與宮頸癌的發生、發展和轉移有關，并在其中起重要的調節作用。提示利用測定NF－κBp65含量，可以預測疾病嚴重程度及預后。本研究結果顯示，正常宮頸組與CINⅠ組、CINⅠ組與CINⅡ組、CINⅡ組與CINⅢ組、CINⅢ組與宮頸癌組兩兩比較，NF－κBp65表達均無明顯差別，可能尚需擴大樣本量進一步研究，但也從另一個側面說明宮頸癌的發生、發展是一個循序漸進的過程。早期發現、早期診斷、早期治療、積極治療癌前病變可以阻斷宮頸癌的發生。

目前關于NF－κB在宮頸癌各個病理分級中的表達是否存在差異的報道各不相同。本研究結果顯示，NF－κBp65在宮頸癌中的表達與病理分級無關，要明確NF－κBp65表達與宮頸癌病理分級的關系可能尚需要更大的樣本量來解決。宮頸鱗癌和腺癌之間的表達陽性率無明顯差異，這一方面可能因為人類乳頭瘤病毒（HPV）是宮頸癌（無論鱗癌還是腺癌）發生的關鍵因素，所以兩者都主要是受HPV刺激，使受抑制的NF－κB活化，參與腫瘤的發生；另一方面可能是因為NF－κB幾乎存在于所有真核細胞里，參與多種轉錄調節，所以無論是在鱗癌細胞里還是在腺癌細胞里也都廣泛存在，導致NF－κB在鱗癌和腺癌之間的表達陽性率無差別。

總之，有可能通過免疫組化檢測方法篩選宮頸癌陽性患者，指導臨床宮頸癌患者個體化治療方案的選擇，進一步將導向化療及靶向治療的觀念引入宮頸癌新輔助化療領域，為抗腫瘤提供一個新的途徑。

［1］ 顧美皎.臨床婦產科學［M］.北京：人民衛生出版社，2001：885.

［2］ 馬丁，奚玲.宮頸癌流行病學及病因學研究進展［J］.實用婦產科雜志，2001，17（5）：61.

［3］ Pahl HL.Activator and targetgenes of Rel／NF－κB transcription factors［J］.Oncogene，1999，18（49）：6853.

［4］ Bhartia AC，Aggarwal BB.Nuclear factor kappa B and cancer：Its role in prevention and therapy［J］.Bicchen Phamacol，2002，64（6）：883.

［5］ Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequence［J］.Cell，1986，46（5）：707.

［6］ Mercurio F，Manning AM.Mutiple signals cinvering on NF－κB［J］.Current Opinion in Cell biology，1999，11（2）：226.

［7］ Sen R，Baltimore D.Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequence［J］.Cell，1986，46（5）：707.

［8］ Karin M，Ben－Neriah Y.Phosphorylation meets ubquitination.the control of NF－κB activity［J］.Annu Rev Immunol，2002，18（4）：621.