不同配比黃芪丹參對氣虛血瘀證模型大鼠血液流變學及TXB2、6-keto-PGF1α影響的研究

朱黎霞 張英豐

1.南方醫科大學珠江醫院中醫科，廣東廣州510282；2.廣州中醫藥大學中藥學院，廣東廣州510006

不同配比黃芪丹參對氣虛血瘀證模型大鼠血液流變學及TXB2、6-keto-PGF1α影響的研究

朱黎霞1張英豐2▲

1.南方醫科大學珠江醫院中醫科，廣東廣州510282；2.廣州中醫藥大學中藥學院，廣東廣州510006

目的探討黃芪丹參不同配比對氣虛血瘀證大鼠血液流變學及血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的影響。方法將SD大鼠隨機分為正常組、模型組和黃芪丹參不同配比組，每組各10只。黃芪、丹參的總給藥量均為原藥材15 g/kg，黃芪、丹參比例分別為5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5。采用饑餓、游泳加皮下注射腎上腺素的方法復制氣虛血瘀證大鼠模型，各組大鼠給予不同配比的水煎液凍干物，測定血液流變學指標和TXB2、6-keto-PGF1α含量。結果氣虛血瘀模型組血流變參數和TXB2顯著升高，6-keto-PGF1α顯著降低，與正常組比較差異有高度統計學意義（P＜0.01），模型復制成功。黃芪丹參3∶1、1∶1、1∶3、1∶5配比組可改善血瘀狀態，使升高的TXB2水平降低，提升6-keto-PGF1α及6-keto-PGF1α/TXB2比值，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。結論黃芪丹參對大鼠氣虛血瘀證確有療效，其中1∶3配比組效果最佳。

丹參黃芪藥對；氣虛血瘀證；血液流變學；配比研究

證是中醫特有概念，辨證論治是中醫特色，氣虛血瘀證是中醫臨床常見證型之一，益氣活血是行之有效的治法，黃芪、丹參是常見的藥對組合。本文構建了氣虛血瘀證大鼠模型，探討不同配比對氣虛血瘀證大鼠模型血液流變學及血栓素B2（TXB2）、6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）、6-keto-PGF1α/TXB2比值的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器LG-R-80B型血液黏度儀（北京中勤世帝科學儀器有限公司），Anke TDL-40B（上海安亭科學儀器廠）；LGJ-10C真空冷凍干燥機（鄭州南北儀器設備有限公司）。

1.1.2 試劑鹽酸腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司），TXB2、6-keto-PGF1α試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 藥物黃芪、丹參飲片購自廣州致信藥業，經鑒定黃芪為豆科植物膜莢黃芪Astralusmembranaceus（Fish.）Bge.的干燥根，丹參為Radix Salviae Miltiorrhiae的干燥根莖。水煎液凍干物的制備：黃芪丹參藥材按5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5比例混合，總量均為5 kg。加水煎煮2次，加水量分別為10、8倍，時間依次為30、20min，煎好后過濾并壓榨藥渣。將水煎液和壓榨液合并，靜置、離心，60℃下減壓濃縮得一定密度的浸膏，并于-40℃下冷凍干燥。

1.1.4 實驗動物健康雄性SD大鼠，清潔級，體重（200±10）g，廣州中醫藥大學動物實驗中心提供，許可證號SCXK2008-0020。

1.2 方法

1.2.1 分組大鼠隨機分為正常組、模型組和黃芪丹參5∶1、3∶1、1∶1、1∶3、1∶5組，每組各10只。

1.2.2 氣虛血瘀證大鼠模型制備根據中醫“勞則氣耗”理論，結合“冷凝激怒”模擬血瘀狀態，在文獻方法[1-5]的基礎上加以改進。除正常組動物外，所有大鼠早上給予一半飼料，晚間再給予一半飼料（每天總量40 g/kg，每天總攝食量控制在正常值的1/2左右），時間維持1周，除正常組動物外，第8天開始在限制食量的基礎上，放入（20±2）℃左右水中游泳，當每組50%的大鼠出現自然沉降時停止游泳，連續18 d。除空白正常組動物外，第16天開始每只大鼠在游泳前皮下注射腎上腺素0.4 mL/kg于10℃水中游泳，共10 d。根據動物精神狀態、毛發變化、體重等一般情況，結合血液流變學改善判斷模型是否成功。

1.2.3 給藥劑量根據人與實驗大鼠的體表面積折算法計算給藥量。實驗第2周開始，除正常組及模型組大鼠外，每只大鼠均灌胃給予凍干物（相當于原藥材15 g/kg），每天1次，給藥持續到造模結束后第7天。正常組及模型組灌服同體積生理鹽水。

1.2.4 血液流變學及TXB2、6-keto-PGF1α的檢測末次給藥后1 h腹主動脈取血于肝素鋰抗凝管內，3000 r/min×30 min取上層血漿。在全自動血液流變儀上由專人檢測，檢測指標包括高（200 s-1）、中（100 s-1、50 s-1）、低（1 s-1）切變速率下的全血黏度，并測定切變速率為50 s-1下的血漿黏度[6]。按照試劑盒說明書測定血漿TXB2、6-keto-PGF1α含量。

1.3 統計學方法

采用統計軟件SPSS 18.0對數據進行分析，正態分布計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。計數資料以率表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 黃芪丹參配伍對血液流變學的影響

結果顯示：造模后模型組與正常組比較，高、中、低切變率、血漿黏度急遽升高，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。大鼠分別給予不同配比的丹參黃芪后，3∶1、1∶1、1∶3、1∶5配比組高、中、低切變率、血漿黏度和模型組比較顯著降低，差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。從變化趨勢看，隨著黃芪比例降低，降低血黏度效果越好，但黃芪丹參比例低于1∶3時反而療效降低。見表1。

表1 黃芪丹參不同配比對氣虛血瘀證大鼠血液流變學的影響（mPa·s，±s，n=10）

表1 黃芪丹參不同配比對氣虛血瘀證大鼠血液流變學的影響（mPa·s，±s，n=10）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別血漿黏度50 s-1全血黏度200 s-1100 s-150 s-11 s-1正常組模型組5∶1組3∶1組1∶1組1∶3組1∶5組4.09±0.12 4.78±0.27**4.63±0.16 4.39±0.28##4.36±0.14##4.27±0.11##4.31±0.29##4.62±0.18 5.35±0.13**5.18±0.28 5.09±0.19#4.92±0.25##4.85±0.32##5.06±0.41##5.26±0.15 5.91±0.38**5.79±0.24 5.70±0.33#5.64±0.25##5.38±0.37##5.51±0.41##23.54±1.57 28.66±4.66**27.12±2.94 26.39±1.87#25.46±2.64#24.98±1.55##25.22±1.69##1.62±0.14 2.23±0.18**2.11±0.24 2.01±0.21##1.97±0.17##1.81±0.13##1.91±0.25##

2.2 黃芪丹參配伍對TXB2、6-keto-PGF1α的影響

結果顯示：造模后模型組與正常組比較，血栓素TXB2急劇升高、6-keto-PGF1α水平降低，6-keto-PGF1α/TXB2比值降低，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。大鼠分別給予不同配比的丹參黃芪后，3∶1、1∶1、1∶3、1∶5組可使升高的TXB2水平降低，提高6-keto-PGF1α及6-keto-PGF1α/TXB2比值，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。黃芪丹參比例1∶3時效果最佳。見表2。

表2 黃芪丹參不同配比對氣虛血瘀證大鼠TXB2、6-keto-PGF1α的影響（pg/mL，±s，n=10）

表2 黃芪丹參不同配比對氣虛血瘀證大鼠TXB2、6-keto-PGF1α的影響（pg/mL，±s，n=10）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；TXB2：血栓素B2；6-keto-PGF1α：6-酮前列腺素F1α

組別TXB2（pg/mL）6-keto-PGF1α（pg/mL）6-keto-PGF1α/TXB2正常組模型組5∶1組3∶1組1∶1組1∶3組1∶5組437.75±35.97 631.36±32.65**592.66±54.80 557.39±28.37##501.79±41.22##467.52±35.41##475.04±32.29##515.76±43.51 308.28±21.22**336.94±32.11 423.23±31.04##443.78±29.11##470.47±45.11##447.99±48.86##1.18±0.06 0.49±0.05**0.57±0.07#0.76±0.05##0.89±0.09##1.01±0.08##0.94±0.08##

3 討論

中藥復方是多成分混合體，作為外源性物質進入機體必然對內環境產生擾動，具有整體性和相互性原則。中藥組成的“數、量、相對比例”決定了復方功效，中藥復方配伍成為當前研究的熱點。中醫藥臨床實踐中，常將功效相近或相輔相成的兩味藥物相對固定配伍使用，稱為藥對，成為方劑配伍的基本組成形式之一。藥對因其組方簡單，療效確切，臨床應用廣泛，易于入手研究，以其為研究對象具有可行性和可操作性。黃芪味甘、微溫，歸脾、肺經，為補氣要藥。丹參味苦、微寒，歸心、肝經為活血主藥。丹參、黃芪則為臨床常用的藥對組合，丹參活血，黃芪補氣，對于氣虛血瘀證具有良好療效。楊振等[7]報道丹參黃芪提取物可改善心腦血管功能、降低血脂。

氣虛血瘀證是臨床諸多疾病常見的中醫證候之一，尤其是在心腦血管疾病中常見。由于氣虛運血無力，血行瘀滯而表現的癥候，常由病久氣虛，漸致瘀血內停而引起。尤其在心腦血管疾病中常見。隨著生活方式的轉變加上工作節奏的加快，氣虛血瘀證在臨床上多見。中醫認為“氣為血帥、血為氣母”、“氣行則血行、氣滯則血瘀”，氣、血之間相互依存、相互促進，在氣虛血瘀型中互為因果，中醫認為黃芪補氣，丹參活血，丹參黃芪配伍對氣虛血瘀證的高“濃、黏、凝、聚”狀態有顯著改善，在所選定的各個配比組均可以改善血瘀狀態，隨著丹參比例增加而效果越顯著，但在1∶5時效果反而比1∶3有所降低，說明補氣對改善血瘀狀態必不可少，且比例非常關鍵。

氣虛血瘀證模型復制方法較多，如苗蘭等[8]采用睡眠剝奪法加高脂高糖飼料復制。本文根據中醫“饑則損氣”、“勞則耗氣”、“肥甘厚味傷脾”等理論，采用饑餓、勞累、加腎上腺素等模擬情志刺激等多重因素復制氣虛血瘀型大鼠模型。造模后大鼠精神狀態、皮毛光潔度、體重等均發生明顯改變，出現精神萎靡、身體消瘦、毛發萎黃、舌質瘀斑等癥狀。高、中、低切邊速率下血黏度顯著升高。本方法復制氣虛血瘀證大鼠模型成功、可靠。

血栓素A2（TXA2）和前列環素（PGI2）的平衡對于維持血液流動性和血管內皮正常功能極為重要，在血瘀狀態下PGI2合成減少，TXA2合成增多，PGI2/TXA2的平衡被破壞。由于PGI2、TXA2均不穩定，可用其代謝產物TXB2、6-keto-PGF1α及其6-keto-PGF1α/TXB2來反映藥物的治療狀況[9]。本實驗中發現，模型組TXB2顯著增加、6-keto-PGF1α顯著降低，6-keto-PGF1α/ TXB2明顯低于正常組，差異有高度統計學意義（P＜0.01）。丹參是中醫“活血化瘀”要藥，藥效物質基礎清新，療效確切，確能改善血瘀證大鼠血瘀狀態，對6-keto-PGF1α、TXB2有顯著影響[10]。經給予不同配比的黃芪丹參提取物后給藥組相比模型組TXB2顯著降低、6-keto-PGF1α顯著增加，6-keto-PGF1α/TXB2顯著增加，其中1∶3比例效果最佳，與柳潤輝等[11]組分配伍研究結果較為接近。

在中藥配比研究中，藥物的處理方法非常重要，要求不僅能夠最大程度保留活性成分，也需要和傳統用藥方法盡量保持一致。目前常用的有水煎法、醇提法等，各有優缺點。如水煎法簡便易行，但對脂溶性成分浸提效率較低，且溶出雜質較多、不利于長期儲存。醇提法采用不同濃度乙醇獲得活性成分或有效部位，活性成分濃度提高，易于獲得理想結果，但非傳統處理方法。大量基礎研究發現丹參的脂溶性成分群（丹參酮ⅡA、隱丹參酮等）、水溶性成分群（丹參素、原兒茶醛、丹酚酸A、B、C、D、E等）均為活性成分群，但對光、熱、水分均不穩定，提取過程中損耗較多。本文通過結合水煎法和冷凍干燥法獲得提取物，既繼承了傳統中藥處理方法的精髓，體現了在煎煮過程中復方成分群間復雜的相互作用，又最大程度地保持了活性成分的穩定性，且提取物復溶性好，利于長期給藥。目前采用此方法的文獻報道尚不多見，本研究可供類似研究借鑒。

臨床研究發現血瘀證患者一般血液均有“濃、黏、凝、聚”的改變，故將凝血指標異常、血液流變學列為血瘀證實驗室診斷標準[12]。通過本研究，發現黃芪丹參比例為1∶3時對氣虛血瘀證大鼠活血效果較好,通過丹參黃芪的協同增效作用改善了“濃、黏、凝、聚”的血瘀狀態。本研究主要偏重于血瘀指標，中醫認為“氣虛”和免疫功能密切相關，在后續研究中擬引入免疫功能試驗，通過多指標、多效應的綜合平衡法進一步評價其益氣活血的配伍機制。

[1]黃麗，雷磊.氣虛血瘀證動物模型研究應用現狀[J].中醫藥導報，2007，13（11）：81-83.

[2]尹軍祥，田金洲，王永炎，等.氣虛血瘀證動物模型制作方法與評價[J].中華中醫藥雜志，2006，21（7）：424-426.

[3]寧倫，丁成華，竇倩.氣虛血瘀證動物模型研究概況[J].山東中醫雜志，2013，32（7）：508-510.

[4]袁穎，郭忻，金素安，等.黃芪當歸不同配伍對氣虛血瘀證大鼠血液流變學及血清干擾素-γ、白細胞介素-4的影響[J].中國中醫藥信息雜志，2013，20（11）：44-46.

[5]榮曉鳳，李榮亨，呂霞.氣虛血瘀證大鼠NO、ET、TXB2、6-keto-PGF1α的變化及意義[J].中國中醫基礎醫學雜志，2009，15（12）：914-916.

[6]王宏，曲紹春，于曉風.血栓心脈寧片對急性血瘀模型大鼠血小板功能及血液流變學的影響[J].中國老年醫學雜志，2010，30（22）：3335-3337.

[7]楊振，鄭友蘭，洪鐵.丹參黃芪提取物對大鼠血管內皮損傷的保護作用[J].長春中醫藥大學學報，2010，26（2）：183-184.

[8]苗蘭，劉建勛，任建勛.氣虛血瘀證模型大鼠血清蛋白質組學初步研究[J].中國實驗方劑學雜志，2009，15（9）：42-46.

[9]江承平，劉福，李毅.參附注射液對腦缺血再灌注大鼠MDA、SOD、TXB2及6-keto-PGF1α的影響及意義[J].中國醫科大學學報，2012，41（2）：124-127.

[10]白如君，褚偉，徐潔.丹參提取液對糖尿病大鼠血漿ET、TXB2、6-keto-PGF1α的影響[J].湖北中醫學院學報，2006，8（3）：11-12.

[11]柳潤輝，蘇娟，徐?？?藥對“丹參-黃芪”有效組分的最佳配伍配比研究[J].中國藥學雜志，2006，41（11）：815-817.

[12]杜金行，史載祥.血瘀證中西醫結合診療指南[C].武漢：第八次全國中西醫結合血瘀證及活血化瘀研究學術大會，2011：37.

Effect of com patibility of Astragalus Membranaceus and Salvia M iltiorrhiza in different proportionon hemorheology and contents of TXB2,6-keto-PGF1αin blood of Qi deficiency and blood stasis ratmodel

ZHU Lixia1ZHANG Yingfeng2▲
1.Department of Traditional Chinese Medicine,Zhujiang Hospital of South Medical University,Guangdong Province, Guangzhou 510282,China;2.School of Chinese Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangdong Province,Guangzhou 510006,China

Objective To explore the influence of the different compatibility proportion of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza on Qi deficiency and blood stasis ratmodel on hemorheology and the content of TXB2and 6-keto-PGF1α.Methods The SD rats were randomly divided into normal group,model group and five compatibility groups,10 rats in each group.The Qi deficiency and blood stasis ratmodel was replicated by restricted diet,forced swimming and norepinephrine subcutaneous injecting.The ratswere orally given with different proportion of dry freezing water decoction,the proportions of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza were 5∶1,3∶1,1∶1,1∶3,1∶5 respectively,and the total dosage were all 15 g/kg.The hemorheology and the content of TXB2and 6-keto-PGF1αwere determined.Results The hemorheology parameters and TXB2were significantly increased and 6-keto-PGF1αlowered in Qi deficiency,compared with normal group,the differences were statistically significant(P＜0.01),the Qi deficiency and blood stasis ratmodels were successful.The compatibility of Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza in proportion of 3∶1,1∶1,1∶3,1∶5 groups showed improved blood stasis state,TXB2content was decreased,6-keto-PGF1αand 6-keto-PGF1α/TXB2ratio were increased,comparingwith model group,the differenceswere statistically significant (P＜0.01).Conclusion The different proportion is effective,the ratio of1∶3 has the best effect.

Astragalus Membranaceus and Salvia Miltiorrhiza coupletmedicine;Qi deficiency and blood stasis syndrome;Hemorheology;Compatibility study

R963

A

1673-7210（2014）08（a）-0013-04

2014-04-17本文編輯：蘇暢）

國家自然科學基金資助項目（編號30701097）。

▲通訊作者