姜黃素-分光光度法測定藥物中的Fe2+*

高蘇亞，李 華，張 韞，范 濤，王 黎，楊 筱

(1.西安醫學院 藥學院,陜西 西安 710021；2.西北大學 分析科學研究所,陜西 西安 710069)

復方硫酸亞鐵葉酸片為衛生部頒藥品標準中收載的抗貧血藥[1]。該藥由硫酸亞鐵、葉酸、黃芪、白術、當歸、干酵母及輔料組成，適應于缺鐵性貧血。目前測定該藥中Fe2+含量大多采用鄰菲啰啉-分光光度法[2]、火焰原子吸收法[3]等，而采用姜黃素-分光光度法測定Fe2+鮮有文獻報道。姜黃素與Fe2+的絡合反應靈敏，形成的絡合物較穩定[4-6]。另外，可藥食兩用的姜黃素無毒、無污染，可作為理想的顯色劑和染料使用[7]。作者以姜黃素為顯色劑，采用簡單的分光光度法測定復方硫酸亞鐵葉酸片中的Fe2+含量，方法準確可靠，靈敏度高，拓展了姜黃素與Fe2+相互作用在藥物分析中的應用。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

復方硫酸亞鐵葉酸片：批號：20091030，20091020，吉林省西點藥業科技發展股份有限公司。姜黃素(CUR)：上?；瘜W試劑三廠；三羥甲基氨基甲烷(Tris)：天津市福晨化學試劑廠；硫酸亞鐵：天津市化學試劑三廠；鹽酸：深圳市迪創化工有限公司；無水乙醇：四川西隴化工廠，上述試劑均為分析純。實驗過程中所用水為二次蒸餾水。

UV-2450紫外-可見分光光度計：日本島津公司；PB-10型酸度計、BS210S電子天平：德國Sartorious公司。

1.2 溶液制備

姜黃素儲備溶液的配制：精密稱取36.80 mg姜黃素于50 mL容量瓶，加少量無水乙醇振蕩至溶解，定容，搖勻，即得濃度為2.00×10-3mol/L姜黃素溶液，4 ℃儲存。

標準Fe2+溶液的配制：精密稱取49.70 mg硫酸亞鐵晶體(FeSO4·7H2O)于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L 鹽酸溶解，定容，搖勻，即得質量濃度為0.200mg/ mL Fe2+儲備液，儲存于4 ℃冰箱，使用時取一定量加0.1 mol/L 鹽酸稀釋至質量濃度為40 μg/mL。

供試品溶液的制備：取樣品復方硫酸亞鐵葉酸片10片，精密稱定，去糖衣，研細，然后精密稱取約0.35 g(相當于約50 mg FeSO4)，置于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L HCl溶解并定容，搖勻，離心20 min(2 000 r/min，20 ℃)，并用0.45 μm濾膜濾過，再精密量取續濾液 2.50 mL于50 mL容量瓶中，加0.1 mol/L HCl定容，搖勻即得。

陰性對照溶液的制備：除FeSO4外，其余藥材按藥品標準[1]處方比例精密稱定，并將白術半量粉碎成細粉(備用)；然后用6倍量(質量)體積分數為70%乙醇將剩余半量白術和當歸采用滲漉法提取，將所得提取液回收乙醇；將黃芪加水煎煮2次，煎煮時間依次為3 h、2 h，濾過，與滲漉提取液合并，再減壓濃縮至稠膏，冷卻，與上述備用白術細粉、葉酸、干酵母混合均勻，干燥，研細，即得陰性樣品。最后，按上述“供試品溶液的制備”方法，制得陰性對照溶液。

1.3 實驗方法

在一系列10 mL容量瓶中分別加入2.5 mL姜黃素儲存溶液、1.0 mL 0.1 mol/L Tris-HCl緩沖溶液(pH=6.50)，精密加入一定量標準Fe2+溶液或供試品溶液，加乙醇至刻度，搖勻，靜置30 min。以相應試劑作參比，1.0 cm石英比色皿，狹縫2 nm，測定其吸收光譜和432 nm波長處的吸光度[6]。

2 結果與討論

2.1 姜黃素和Fe2+的紫外-可見吸收光譜

姜黃素和Fe2+的紫外-可見吸收光譜見圖1。

λ/nm圖1 姜黃素和Fe2+的紫外-可見吸收光譜

由圖1可知，Fe2+基本無吸收，姜黃素在430 nm有最大吸收，加入Fe2+后，其吸收略有紅移且吸光度明顯減小。說明姜黃素與Fe2+發生作用(有關其配合作用在另一篇論文中論述)。

2.2 干擾實驗

按“實驗方法”項作陰性對照溶液的干擾實驗。實驗結果表明：陰性對照溶液在432 nm波長處沒有明顯吸收，說明其它成分對測定幾乎無干擾。

2.3 工作曲線的制備

分別精密量取40 μg/mL標準Fe2+溶液0.1、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mL置10 mL容量瓶中，按“實驗方法”項測定，結果見圖2和表1。

λ/nm圖2 姜黃素-Fe2+工作曲線的吸收光譜圖

圖2和表1結果表明：吸光度(A)與ρ(Fe2+)(x)的回歸方程為A=0.047 4x+ 0.323 7(r=0.999 5)，在0.40～8.00 μg/mL線性關系良好。

表1 不同ρ(Fe2+)的吸光度

2.4 精密度、重復性和穩定性實驗

分別精密量取 6份0.8 mL標準Fe2+溶液于10 mL容量瓶中，按“實驗方法”測定，測得吸光度的RSD= 0.6%(見表2)，表明該方法精密度良好。分別精密吸取供試品溶液(批號為20091030)1.00 mL置10 mL容量瓶中，共6份，按“實驗方法”操作，平行測定3次，測得樣品的平均含量為51.28 mg/片(以FeSO4計)，RSD=1.2%(見表2)；再將其中1份供試品溶液(批號為20091030)每隔10 min測定一次，結果發現：該樣品溶液在0.5 h顯色穩定，測得其FeSO4含量在0.5～3 h內的RSD為0.8%，表明該方法的重復性和穩定性也良好。

表2 精密度、重復性實驗

2.5 加樣回收率實驗

分別精密稱取5份已知含量的復方硫酸亞鐵葉酸片樣品(批號20091030)適量，分別精密加入標準Fe2+溶液，按“供試品溶液的制備”方法制備溶液；分別精密吸取0.5 mL于10 mL容量瓶中，按“實驗方法”項測定，結果見表3。

表3 回收率測定結果(n=5)

2.6 樣品測定

將復方硫酸亞鐵葉酸片樣品(批號為20091030，20091020)按“供試品溶液的制備”方法各制備2份溶液，再分別精密吸取1.0 mL制備溶液置10 mL容量瓶中，按“實驗方法”測定。測得2批樣品中FeSO4平均含量分別為51.28 mg/片和48.52 mg/片，分別為標示量(FeSO450 mg/片)的102.5%和97.04%。

3 結 論

在姜黃素與Fe2+相互作用研究的基礎上可知，在Tris-HCl緩沖液(pH=6.5)中，姜黃素與Fe2+反應可形成較穩定的酒紅色配合物。因此作者建立了姜黃素-分光光度法測定復方硫酸亞鐵葉酸片中Fe2+，其吸光度(A)與ρ(Fe2+)(x)在0.40～8.00 μg/mL線性方程為A=0.047 4x+ 0.323 7(r=0.999 5)，呈良好的線性關系。該方法簡單靈敏，結果可靠，且無毒環保，可為藥物中Fe2+的含量測定提供參考。

[ 參 考 文 獻 ]

[1] 衛生部頒藥品標準(新藥轉正標準西藥第三十冊).WS1-(X-072)-2002Z,復方硫酸亞鐵葉酸片[S].北京:人民衛生出版社,2008：X30-X211.

[2] 戴德銀.實用新藥特藥手冊(第4版)[M].北京:人民軍醫出版社,2007：928.

[3] 畢雪艷,郝寧,韓永紅,等.火焰原子吸收法測定復方硫酸亞鐵葉酸片中鐵的含量[J].中國醫院藥學雜志,2007,27(3)：421.

[4] Barik A,Mishra B,Kunwar A,et al.Comparative study of copper(Ⅱ) curcumin complexes as superoxide dismutase mimics and free radical scavengers[J].Eur J Med Chem,2007,42(4)：431-439.

[5] Bemabe-Pineda M,Ramirez-Silva T M,Romero-Romob M M,et al.Spectrophotometric and electrochemical determination of the formation constants of the complexes curcumin-Fe(III)-water and curcumin-Fe(Ⅱ)- water[J].Spectrochimica Acta Part A,2004,60(5)：1105-1113.

[6] 高蘇亞,范濤,楊莉寧,等.姜黃素-Fe2+穩定常數的測定及其與鮭魚精DNA的相互作用研究[J].分析試驗室,2011,30(8)：36-38.

[7] 高蘇亞.藥物分子與生物相關物質相互作用的方法學研究及其在藥物分析中的應用[D].西北大學,2012：42-44.