板藍根顆粒質量標準研究

戴耀清，薛非凡

（1．湖北省襄陽市食品藥品檢驗所，湖北 襄陽 441021； 2．湖北省襄陽市食品藥品監督管理局，湖北 襄陽 441021）

板藍根顆粒質量標準研究

戴耀清1，薛非凡2

（1．湖北省襄陽市食品藥品檢驗所，湖北 襄陽 441021； 2．湖北省襄陽市食品藥品監督管理局，湖北 襄陽 441021）

目的 建立板藍根顆粒的質量標準。方法 使用薄層色譜法對板藍根進行薄層鑒別。采用高效液相色譜法，使用Inertsil ODS-3柱（250 mm×4．6 mm，5 χm）為色譜柱，甲醇-水(14∶86)為流動相，流速1 mL／min，柱溫為室溫(27℃)，檢測波長為260 nm。結果 薄層色譜法得到的薄層色譜中，供試品在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。當腺苷進樣量在0～0．848 χg范圍內與峰面積線性關系良好（r=0．999 9，n=6），加樣回收試驗的回收率為98．91%，RSD=0．61%(n=9）。結論 該法簡便、準確、可靠、專屬性強、重復性好，可作為板藍根顆粒的質量標準。

板藍根顆粒；質量標準；薄層色譜；高效液相色譜法；腺苷

板藍根顆粒由板藍根組方，具有清熱解毒、涼血利咽功效，用于肺胃熱盛所致咽喉腫痛、口咽干燥、腮部腫脹，急性扁桃腺炎、腮腺炎見上述證候者[1]800。原標準僅有 1項薄層鑒別，無含量測定項。在原標準的基礎上，參考板藍根藥材標準，增加1個薄層鑒別，以對照藥材和表告依春對照品為對照對其所含表告依春進行鑒別[2-3]，提高了鑒別的專屬性；含量測定指標有測腺苷[4-6]、靛玉紅[7]、表告依春[8]、蔗糖[9]、靛藍與靛玉紅[10]、氨基酸[11]。本研究中以其水溶性成分腺苷（抗炎成分）作為控制指標進行含量測定，結果表明質量標準專屬性強、可控性好，可更好地控制板藍根顆粒的內在質量?，F報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10A型高效液相色譜儀(檢測器為SPD-10AVP型紫外檢測器，CBM-102工作站)；CP-225D型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；KQ-100B型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。板藍根對照藥材（批號為 121177-200302），精氨酸對照品（批號為0872-9802）；腺苷對照品（供含量測定用，批號為110879-200202），均由中國藥品生物制品檢定所提供；板藍根顆粒（珠海正太制藥有限公司，批號為20110501，20110502，20110503，20110504，20110505，20110506，20110507，20110508，20110509，20110510）；硅膠 G（青島海洋化工廠）；732型強酸性陽離子樹脂、無水乙醇、濃氨水、乙醇均為分析純，甲醇為色譜純。

2 方法與結果

2．1 精氨酸與板藍根[4]薄層色譜鑒別

取本品1．0 g，加水50 mL使溶解，濾過，濾液通過處理好的732型強酸性陽離子樹脂(柱長10 cm，內徑1．5 cm)，用水洗至洗脫液呈中性，再用2 mol／L的氨水150 mL洗脫，棄去前50 mL洗脫液，收集后100 mL洗脫液，水浴蒸干，殘渣加稀乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。按處方比例取缺板藍根的藥材，按照制備工藝制得板藍根陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。另取板藍根對照藥材0．5 g，加稀乙醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加稀乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液；再取精氨酸對照品適量，加稀乙醇制成每1 mL中含0．2 mg的溶液，作為對照品溶液。照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB薄層色譜法試驗，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以無水乙醇-濃氨水(3∶2)為展開劑，展開，取出，熱風吹盡薄層板上的氨，噴以茚三酮試液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜中則無此班點(見圖1)。

圖1 薄層色譜圖

2．2 腺苷含量測定

2．2．1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-3柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），柱溫：室溫，27℃，流動相：甲醇-水(14∶86)，檢測波長：260 nm，流速：1 mL／min，進樣量：10 μL。

2．2．2 溶液制備

精密稱取腺苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含6 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品裝量差異項下內容物1．5 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加 30%甲醇約 20 mL，超聲處理30 min (120 W，40 kHz)，取出，放冷，加30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取不含板藍根的陰性樣品約1．5 g，精密稱定，照供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2．2．3 方法學考察

陰性干擾試驗：吸取陰性對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀。結果在腺苷峰相應位置上未見色譜峰(見圖2)，表明陰性樣品對測定無干擾，該方法可用于本品腺苷含量的測定。

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密稱取腺苷對照品10．6 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取此對照品溶液1，2，2，2，2 mL，分別置 100，100，50，25，10 mL容量瓶中，加 30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別制成 0，4．24，8．40，16．96，33．92，84．80 μg／mL質量濃度的對照品溶液，吸取上述溶液各10 μL，注入色譜儀測定，以腺苷進樣量為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y=141 144．6 X+1 183．7，r=0．999 9 (n=6)。結果表明，腺苷進樣量在0～0．848 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗：取一定質量濃度(8．48 μg／mL)的對照品溶液，連續進樣6次，測定峰面積。結果的 RSD為1．52%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液在不同時間點（0～10 h）進樣測定峰面積。結果的 RSD為1．31%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內保持穩定。

重復性試驗：取同一批樣品6份，按擬訂方法測定結果含量0．116，0．114，0．115，0．117，0．117，0．114 mg／g，RSD為 1．14% (n=6)，表明方法的重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品(批號為20110501，含量為0．116 mg／g)9份，分別精密加入84．58 μg／mL的腺苷對照品溶液1．00 mL，按擬訂方法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 腺苷加樣回收試驗結果（n=9）

2．2．4 樣品含量測定

取樣品 10批（批號為 20110501，20110502，20110503，20110504，20110505，20110506，20110507，20110508，20110509，20110510），照擬訂方法測定含量。結果 10批含量平均值為0．108 mg／g。

3 討論

3．1 板藍根薄層鑒別

板藍根含精氨酸、亮氨酸、脯氨酸、纈氨酸等多種氨基酸，其氨基酸類成分含量很高。參照2010年版《中國藥典(一部)》板藍根藥材鑒別項下方法[1]191并結合本品特點，將樣品水溶后通過強酸性陽離子樹脂柱，使氨基酸類成分得以富集，并去除了糖等黏稠物質的干擾，使樣品溶液澄清，易于點樣。同時本法展開時間較短，精氨酸對照品斑點 Rf值適中，考慮到本制劑僅板藍根1味藥材，且薄層板上樣品與對照藥材所有斑點均能對應，故將本法收載為本品的薄層鑒別；另參照藥典中板藍根藥材鑒別表告依春[1]191項下方法鑒別表告依春。

3．2 腺苷含量測定

指標成分：含量測定的指標成分是板藍根藥材測表告依春（抗病毒成分），板藍根顆粒以其水溶性成分腺苷（抗炎成分）作為控制指標進行含量測定，標準互補，雙相控制，可形成完整的質量控制鏈。

流動相選擇：以甲醇-水(8∶92)進行初試驗，結果保留時間較長。調整為甲醇-水(14∶86)后，保留時間適中，腺苷峰與相鄰色譜峰完全分離，分離度大于2．0，柱效較高，有效地節省了檢驗

時間，故選用甲醇-水(14∶86)為流動相。

測定波長選擇：取腺苷對照品適量，加甲醇制成適宜質量濃度的供試品溶液，于紫外分光光度計上掃描測定，結果在259．6 nm波長處有最大吸收，參考2010年版《中國藥典（一部）》冬蟲夏草[1]106含量測定項下腺苷的測定波長，選用260 nm作為測定波長。

3．3 樣品處理

提取溶劑：取本品3份(1．501 4，1．503 6，1．505 4 g)，每份約1．5 g，精密稱定，分別置25 mL容量瓶中，分別加甲醇、60%甲醇、30%甲醇各20 mL，超聲處理30 min，取出，放冷，定容，搖勻，濾過，進樣，測定各份樣品的含量，以確定提取溶劑。結果表明甲醇提取效率最低（0．022 mg／g），峰形也較差；60%甲醇（0．106 mg／g）提取峰形雖然較好，但所得含量低于 30%甲醇（0．113 mg／g）；30%甲醇提取峰形好，所得含量高。故選用30%甲醇作為提取溶劑。

提取時間：取本品3份（1．494 5，1．501 3，1．492 2 g），每份約1．5 g，精密稱定，分別置25 mL容量瓶中，加30%甲醇約20 mL，分別超聲處理20，30，40 min，取出，放冷，定容，搖勻，濾過，進樣，測定各份樣品的含量（0．095，0．113，0．113 mg／g），以確定提取時間。結果表明，超聲處理30 min即提取完全。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫

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Study on Quality Standard of Banlangen Granules

Dai Yaoqing1,Xue Feifan2
(1．Xiangyang Municipal Drug and Food Administration,Xiangyang,Hubei,China 441021; 2．Xiangyang Food and Drug Administration,Xiangyang,Hubei,China 441021)

Objective To establish the quality standard of Banlangen Granules．M ethods The identification of Isatidis radix was used by TLC．The high performance liquid chromatography(HPLC)was used with the Inertsil ODS-3 column(250 mm×4．6 mm,5 μm)as the chromatographic column,methanol-water(14∶86)as the mobile phase,the flow rate of 1．0 mL／min and column temperature at 27℃．The wavelength of detector was 260 nm．Results The test sample and the reference medicinal material demonstrated the same color chromatographic spots at the corresponding position．The linear range of adenosine was 0-0．848 μg／mL(r=0．999 9,n=6),and the average recovery rate was 98．91%，RSD=0．61%(n=9)．Conclusion This method is simple,accurate,reliable with good specificity and good reproducibility,and can be used for the quality standard of Banlangen Granules．

Banlangen Granules;quality standard;TLC;HPLC;adenosine

2013-08-14；

2014-08-12)

R284．1；R286．0

A

1006-4931(2015)03-0021-03