復方中草藥“豬康散”對仔豬紅細胞免疫功能的影響

陳張華，鄧俊良，陳倉良

(1.四川農業大學動物醫學院動物疫病與人類健康重點實驗室/環境公害與動物疾病重點實驗室，四川雅安 625014；2.內江職業技術學院，四川內江 641100)

近年來，由于各大養殖場的不合理的飼養管理，使得豬病越來越嚴重，尤其是免疫抑制性疾病更為突出，給養殖業造成了嚴重的損失?，F在人們開始采用具有毒性低、無抗藥性、經濟實用等優點的中草藥，并且逐漸將它廣泛應用于養豬生產。本實驗所用的“豬康散”是按“扶正祛邪”、“正氣存內，邪不可干”的中醫理論科學組方而成的純中藥制劑。它主要是由金銀花、連翹、板蘭根、大青葉、黃連、黃芪、黃柏、忍冬藤、梔子、石膏、知母等多位中藥組成，方中單味中藥如金銀花、板蘭根、大青葉、黃連、黃芪等均具有直接或間接的免疫增強作用，連翹、黃芪等均具有很強的清除自由基、中斷脂質過氧化使抗氧化酶免受攻擊的作用。本實驗通過結合臨床生產，測定相關指標以研究其對仔豬紅細胞免疫的作用機理。

1 材料和方法

1.1 主要實驗材料、實驗動物及儀器 豬康散由金銀花、連翹、板蘭根、大青葉、黃連、黃芪、黃柏、忍冬藤、梔子、石膏、知母等多位中藥組成，按比例配方粉碎過60 目篩，塑料袋500 g/袋分裝備用；轉移因子(500 mg×1 支，批號：20100322)購自河南輝騰動物藥業有限公司；糖酵母多糖(100 mg×1袋)購自上海長江醫院免疫實驗室；實驗仔豬由四川通威集團邛崍春源養殖公司提供。Abacus Junior VET 動物血液分析儀購自北京中西遠大科技有限公司。

1.2 實驗動物及分組 選取平均體質量約5 kg 的20 日齡健康杜長大三元雜交仔豬50 頭，根據抗體水平、體質量相近，公母各半的原則隨機分成5 個組(Ⅰ-基礎日糧、Ⅱ-轉移因子組、Ⅲ-0.5 %中藥、Ⅳ-1.0 %中藥、Ⅴ-2.0 %中藥)，每組10 頭。所有仔豬在21 d 以2 頭份/頭劑量免疫豬瘟兔化弱毒苗，Ⅱ組在注射疫苗的同時將稀釋的轉移因子按0.02 mL/kg 與疫苗混合后一同肌內注射，飼喂基礎日糧，常規飼養；3 個中藥組27 日齡時開始在基礎日糧中添加中藥“豬康散”，連喂5 d，實驗觀察期45 d。日糧配方參照NRC(1998)配制，常規飼養管理。

1.3 免疫指標檢測方法 將肝素鈉抗凝血2 mL 離心分離紅細胞，紅細胞經生理鹽水洗滌離心3 次(2 000 r/min，5 min)，將紅細胞配成1.25×107個/mL，制得紅細胞懸液。凍干補體未致敏酵母多糖，取2 mL 酵母多糖懸液于EP 管中，離心2 000 r/min，5 min，棄一半上清液，加入分離所得血清1 mL 混勻，37 ℃水浴20 min，即可制得致敏酵母多糖。取致敏酵母多糖及紅細胞懸液各50 μL，混勻，37 ℃水浴30 min；再加入0.25%的戊二醛25 μL，混勻，固定5 min；滴加25 μL 混合液于玻片上推片，立即烤干，滴加瑞氏染液30 s～1 min，滴加緩沖液5 min，清水清洗，用濾紙吸干水，烤干，滴加香柏油后顯微鏡計數。一個紅細胞結合2 個或者2 個以上酵母菌為一朵C3b 受體花環(E-C3bRR)，計數200 個紅細胞，求出花環率，計算公式為：C3b受體花環百分率(%)=(紅細胞花環數/200)×100 %。使用未致敏酵母多糖進行紅細胞免疫復合花環率(E-ICRR)試驗。

1.4 數據處理與分析 采用Excel 進行數據前處理，用SPSS19.0 統計軟件進行統計分析和LDS 多重比較。

2 結果與討論

2.1 對仔豬外周血E-C3bRR的影響 對實驗仔豬進行前腔靜脈采血，進行E-C3bRR 試驗，結果表明，在整個試驗期間，轉移因子組紅細胞補體受體花環率均高于對照組，但只在35 d 時有最高的花環率(p<0.05)；可能是轉移因子轉移免疫致敏信息的小分子可透析物質，在體內起著被動轉移免疫信息的作用。1.0 %中藥組各日齡段均差異顯著或極顯著高于對照組(p<0.05，p<0.01)，在45 d 時極顯著高于轉移因子組和2.0 %中藥組，這與楊宏斌等[1]在蛋雞飲水中添加1 %和0.5 %濃度“大沙凈”，紅細胞C3b 受體花環率(E-C3bRR)和紅細胞C3b 受體花環促進率(RFER)都極顯著高于對照組的結論相一致；在整個試驗期間，1.0 %中藥組紅細胞花環率最高，2.0 %中藥組最低。其原因可能是“豬康散”能夠提高紅細胞膜上呈集簇狀分布的CR1 和增加C3bR 的數量；同時隨著仔豬日齡的增長，其新陳代謝功能增強，機體免疫功能也在不斷增強，而后略有下降趨勢，表明“豬康散”在增強紅細胞免疫功能時效果顯著但持續時間較短(表1)。

2.2 對仔豬E-ICRR的影響 對實驗仔豬進行E-ICR 試驗，結果表明，除0.5 %、2.0 %中藥組在35日齡時紅細胞免疫復合花環率略高于對照組(p>0.05)外，轉移因子組和各中藥組E-ICRR 均低于對照組。1.0 %中藥組在整個試驗期間均低于其他各組，但只在55 d 和65 d 時與對照組間差異顯著(p<0.05)。其余組間差異均不顯著(p>0.05)。其機理可能是“豬康散”能夠提高紅細胞黏附免疫復合物的能力，及時有效的清除免疫復合物，也可能是服藥后期隨著自身抗體增多，免疫復合物蓄積增加，導致紅細胞運輸免疫復合物的負擔過重，使紅細胞膜上的C3b受體消耗過多和血液中紅細胞免疫黏附抑制因子的活性增強而導致E-ICRR 的降低(表2)。

表1 紅細胞補體受體花環(E-C3bRR)率(%)Table 1 The percentage of the E-C3bRR(%)

表2 紅細胞免疫復合花環率(E-ICRR)(%)Table 2 The percentage of the E-ICRR(%)

近年來研究表明，紅細胞具有參與免疫反應和免疫調控的功能，如調控NK 細胞、LAK 細胞和吞噬細胞的免疫活性[2]，通過CR1 的識別、黏附和殺傷抗原[3]，也可通過I 型補體受體(CR1)、CD59、DAF、HRF 參與補體系統的調控[4-5]，紅細胞免疫是機體免疫系統中的重要組成部分。其具有的多種免疫功能均是通過表面C3bR 與IC 中的補體成分結合而粘附IC[6]。因此，常常將RBC-C3bR 花環率和RBC-IC 花環率用來衡量紅細胞免疫功能的高低。本次實驗中，1.0 %“豬康散”能夠顯著提高RBCC3bR 花環率，降低RBC-IC 花環率，具有提高仔豬的紅細胞免疫的功能。該方劑作為純中藥，具有價格低廉且處理方法簡單的特點，有望在規?；酿B豬生產中廣泛應用。

[1]楊宏斌，溫潔，溫偉業.新復方中藥制劑“沙大凈”對雞紅細胞免疫功能的影響[J].山西農業大學學報，2006，26(1)：70-72.

[2]Cohen J H,Atkinson J P,Klickstein L B,et al.The C3b/C4b receptor(CR1,CD35)on erythrocytes:methods for study of the polymorphisms[J].Mol Immunol,1999,36(13):819-825.

[3]Kuttner-Kondo L,Subramanian V B,Atkinson J P,et al.Conservation in decay accelerating factor(DAF)structure among primates[J].Dev Comp Immunol,2000,24(8):815-827.

[4]Holt D S,Botto M,Bygrave A E,et al.Targeted deletion of CD59 gene causes spontaneous intravascular hemolysis and hemoglobinuria[J].Blood,2001,98(2):442-449.

[5]周惠萍.硒中毒對豬紅細胞免疫功能影響的研究[D].武漢：華中農業大學，2005.

[6]陳龍，殷定忠，龐訓勝.雛雞在感染IBDV 后紅細胞免疫功能變化的研究[J].畜牧獸醫學報，1998，30(3)：280-284.