血細胞分析儀（SysmexXN－2000）計數低值血小板樣本方法學比較

劉　洋，段美慶，張　蕾，薛　杰，韓艷秋（內蒙古醫科大附屬醫院檢驗科，內蒙古　呼和浩特　010059）

血細胞分析儀（SysmexXN－2000）計數低值血小板樣本方法學比較

劉洋，段美慶，張蕾，薛杰，韓艷秋
（內蒙古醫科大附屬醫院檢驗科，內蒙古呼和浩特010059）

摘要：目的：研究血細胞分析儀（Sysmex XN-2000）的熒光法檢測低值血小板對臨床的應用價值.方法：將180例血液樣本分成3組，PLT＜50×109/L組、100×109/L≤PLT≤300×109/L組和PLT＞300×109/L組.用手工法、熒光法(PLT-F)、電阻抗法(PLT-I)同時計數血小板，參考方法為手工法計數.將手工法與熒光法、手工法與電阻抗法的PLT計數結果進行配對t檢驗.結果：SYSMEX XN-2000儀器上，100×109/L≤PLT≤300×109/L組和PLT＞300×109/L組，三種方法PLT計數結果無顯著性差異(P＞0.05).PLT＜50×109/L組，熒光法(PLT-F)和參考方法無顯著性差異(P＞0.05)，電阻抗法(PLT-I)和參考方法則有顯著性差異(P＜0.05).結論：SYSMEX XN-2000熒光法用于檢測低值血小板準確性較高，對于異常血液樣本計數血小板能夠提供一個準確而客觀的手段，為臨床提供可靠的診療依據.

關鍵詞：XN-2000血細胞分析儀；血小板；熒光法；電阻抗法

隨著血細胞分析儀的飛速發展，進入21世紀以來，在臨床常規檢測大規模使用各種血細胞分析儀后，關于血小板計數準確性的問題不斷地引起關注和討論.導致血小板計數不準確的原因主要是許多儀器檢測紅細胞和血小板在一個通道，不能準確地將血小板與非血小板顆粒分開，如小紅細胞、紅細胞碎片、白細胞碎片以及血小板和紅細胞的大小分布出現交迭[1，2，3，4].Sysmex XN－2000血細胞分析儀可以采用兩種方法檢測血小板，分別是電阻抗法（PLT-I)和熒光法（PLT-F).本研究著重探討比較在出現患者血小板低時，電阻抗法和熒光法兩種方法與手工顯微鏡法血小板計數結果的比較.

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1血液分析系統日本全自動血細胞分析儀（Sysmex XN－2000）、全自動制片染色儀（Sysmex SP－1000i）組成的全自動血液分析系統.三人共攬顯微鏡，德國萊卡公司提供.

1.1.2試劑日本Sysmex提供的XN－2000原裝進口試劑和e-check質控品（level1、2)；由中國科華醫療有限公司提供的EDTA－K2抗凝管.按照“全國臨床檢驗操作規程”第3版的要求配制血小板稀釋液[5].

1.1.3樣本來源180例樣本為本院住院患者，樣本均用EDTA－K2抗凝管真空采血.

1.2方法

1.2.1樣本分組將180例血液樣本按血小板數量分3組，即血小板數量減少組（PLT＜50×109/L)、血小板數量正常組（100×109/L≤PLT≤300×109/L)和血小板數量增高組（PLT＞300×109/L).

1.2.2檢測方法

（1）手工法為血小板計數參考方法：世界衛生組織（WHO)推薦的血小板計數方法，按照“全國臨床檢驗操作規程”（第3版）的要求配制溶血稀釋劑，成分為1g/dl的草酸銨液.由兩名有經驗的檢驗員在顯微鏡下用血細胞計數板按照雙盲法人工計數，取兩次計數結果的均值，兩次誤差控制在5%以內.[6]

（2）儀器法：由經培訓的人員操作血細胞分析儀（Sysmex XN－2000），用熒光通道、電阻抗通道對同一樣本進行測定，2h內計數完成.

1.2.3重復性實驗用熒光法和電阻抗法對同一樣本連續測定10次，計算其變異系數（CV)和標準差（SD).

1.2.4日間精密度監測在相同時間使用e-check低值（批號：18470801)和中值（批號：18470802)質控品測量1次，連續測量20天，分別計算熒光法和電阻抗法的變異系數（CV)和標準差（SD).

1.2.5統計學方法數據用SPSS18.0和Excel統計學軟件進行處理[7]，計量資料用X±SD表示，兩組比較用t檢驗，以P＜0.05為有差異，具有統計學意義.

2　結果

2.1電阻抗法和熒光法測定的重復性結果.

熒光法SD=4.2，CV為2.6%，電阻抗法SD=4.9，CV為3.0%.

2.2儀器日間精密度監測結果見表1.

表1血細胞分析儀（SysmexXN-2000）質控品e-check監測結果

2.3將手工法與熒光法、手工法與電阻抗法的PLT計數結果進行配對t檢驗.結果見表2，從表中可知，100×109/L≤PLT≤300×109/L組（B組）和PLT＞300×109/L組（C組）三種方法所測結果無顯著性差異（P＞0.05)，而PLT＜50×109/L組（A組）中電阻抗法和手工法血小板檢測結果有顯著性差異（P＜0.05)，結果無顯著差異（P＞0.05)的為熒光法和手工法檢測值.

表2 3種方法對180例全血樣本血小板檢測結果

3　討論

從實驗結果可以看出，當樣本中血小板數量PLT＜50×109/L時，用熒光法（PLT－F)與手工法計數血小板比較，差異無統計學意義（P＞0.05)，電阻抗法與手工法計數血小板比較，差異有統計學意義（P＜0.05)；當血小板數量PLT＞300×109/L，熒光法、電阻抗法計數和手工法計數血小板均無顯著性差異（P＞0.05)，同時在提示血小板值較高時，儀器計數結果準確性較高.這表明，當儀器檢測低值血小板數量的樣本時，血小板計數的準確性可能受到多種因素的影響[8，9].當一些體積較大或巨大血小板、畸形血小板、血小板聚集、血小板衛星現象[10]出現時，電阻抗法都可能未正常計數，造成血小板假性減少[11，12].所以當面對PLT減少，如再生障礙性貧血、急性心肌梗死、糖尿病、急性白血病、原發性血小板減少性紫癜等的患者，大血小板會增多，造成血小板檢測結果偏低，出現這種情況，最好使用熒光法檢測血小板.

參考文獻：

〔1〕Tatsumi N，Tsuda I，FunaharaY.Assessment of hematological data obtained by the aperture impedance method in blood from patients with thalassemia or hemoglobinpoathy [J]. ICMR Annals，1998，8(1)：49-60.

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〔6〕葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].南京：東南大學出版，2006.122.

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〔11〕張琴，廖揚.Sysmex XN-3000全自動血細胞分析儀血小板計數性能評價分析[J].生物技術通訊，2014，4(25)：550-553.

〔12〕叢玉隆，樂家新.現代血細胞分析技術與臨床[M].北京：人民軍醫出版社，2005.10-15.

中圖分類號：R735.35

文獻標識碼：A

文章編號：1673-260X（2015）09-0033-02