火龍果籽油抑制癌細胞增殖作用的研究

許 鳳 董迪迪 周增群 王鴻飛 邵興鋒 李和生

（寧波大學食品科學與工程系，寧波 315211）

火龍果籽油抑制癌細胞增殖作用的研究

許 鳳 董迪迪 周增群 王鴻飛 邵興鋒 李和生

（寧波大學食品科學與工程系，寧波 315211）

采用氣相－質譜聯用儀（GC－MS）分析了火龍果籽油的脂肪酸組成；利用噻唑藍（MTT）法，檢測了火龍果籽油抑制HepG－2、HT－29人體癌細胞的增殖，并繪制了火龍果籽油對這些癌細胞生長曲線的影響。結果表明：火龍果籽油中主要含有亞油酸（41.28%）、油酸（26.17%）、棕櫚酸（20.76%）等組分，不飽和脂肪酸高達 72.10%；MTT法顯示火龍果籽油呈劑量（1、3、5 mg／mL）和時間（24、48、72、96 h）依賴方式抑制HepG－2、HT－29等細胞增殖，作用48 h細胞抑制率分別可達到24.76%、38.92%、48.18%和35.47%、46.11%、53.78%，火龍果籽油對這些癌細胞的生長具有顯著性、持續性的抑制作用。

火龍果籽油 脂肪酸組成 癌細胞 生長曲線

火龍果（Hylocereus Undatus）又稱紅龍果、龍珠果，為仙人掌科三角柱屬（Hylocereus）或蛇鞭柱屬（Selenicereus），原產于中美洲的熱帶、亞熱帶，目前在我國的海南、廣西、廣東、福建等省區也進行了大規模的引種種植?；瘕埞雌涔す忸伾煞譃榧t皮白肉、紅皮紅肉、黃皮白肉3類［1］?；瘕埞哂懈郀I養、低能量等特點，有“火龍果屬于高維生素、低糖類、低脂肪的‘一高兩低’的保健食品”的論述。

火龍果籽中含有約30%的火龍果籽油，火龍果籽油中富含約75%的不飽和脂肪酸，是一種極其優質的植物性油脂［2］。但是，目前火龍果的研究主要集中在果樹的種植、鮮果的保鮮貯藏、果汁果酒的加工等方面，而工廠加工剩余后的火龍果籽一般作為廢物直接處理，不僅造成了環境污染，也造成了極大的資源浪費。本試驗以榨汁后的火龍果籽作為原料，粉粹后通過超臨界CO2提取火龍果籽油，采用氣相－質譜聯用儀分析火龍果籽油的脂肪酸組成，同時分析火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞的抑制作用，為火龍果籽油的進一步加工利用提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

火龍果：紅皮紅肉型（Hylocereus Polyrhizus），產于福建??；火龍果籽：浙江聚仙莊飲品有限公司；火龍果籽油：自制；人體肝癌細胞株HepG－2、結腸癌細胞株 HT－29：武漢博士德生物工程有限公司；RPIM1640培養液：Thermo Fisher公司；10%H2SO4－CH3OH：先在燒杯中倒入大約50mL CH3OH，然后慢慢滴入10mL H2SO4搖勻后倒入100mL容量瓶中，用CH3OH定容至刻度；胎牛血清：北京全式金生物技術有限公司；青霉素－鏈霉素溶液：碧云天生物技術研究所；PBS：吉諾生物醫藥技術有限公司；MTT試劑盒：南京凱基生物科技發展有限公司；0.25%胰酶（含 EDTA）：Gibco Life Technologies公司；DMSO：Sigma公司。

1.2 儀器與設備

Spe－ed SFE型超臨界萃取儀：美國 Applied Separations公司；Agilent 7890A氣相色譜質譜聯用儀：美國安捷倫公司；Galaxy 170R型恒溫CO2細胞培養箱：Eppendorf公司；ELX800型自動酶標光度儀：美國BioTek公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 火龍果籽油的提取

剔除霉變、干癟等劣質火龍果籽，研磨粉碎后40目過篩，45℃干燥4.5 h，稱取一定量的火龍果籽粉末裝入超臨界CO2萃取釜中，在設定適宜的萃取工藝條件（萃取時間3 h、萃取壓力35 MPa、萃取溫度45℃）下，萃取得到火龍果籽油。

1.3.2 火龍果籽油的脂肪酸組成

1.3.2.1 火龍果籽油的甲酯化

取約50 mg的火龍果籽油于10mL具塞試管中，加入2.0mL 10%H2SO4－CH3OH溶液，震蕩搖勻后在70℃水浴中反應1 h，冷卻至室溫后，加入2mL正己烷，震蕩搖勻后加蒸餾水至瓶頸，搖勻后靜置10min，取上清液，再加1mL正己烷于剩余溶液中，震蕩搖勻后靜置10min，取上清液，將2次的上清液合并經0.22μm有機相針式濾器過濾后待測［3］。

1.3.2.2 GC－MS檢測的參數設置

色譜條件：色譜柱為DB－WAX（30m×250μm，0.25μm）彈性石英毛細管柱；進樣溫度：250℃；程序升溫：先以20℃／min的升溫速率由150℃升至200℃，保持5min，再以5℃／min的升溫速率至250℃，保持10min；分流比為50∶1；進樣量：1.0μL；載氣：氦氣；載氣流量：1mL／min；溶劑延遲時間：4min［4－5］。

質譜條件：離子源：EI＋；離子源溫度：250℃；電離電壓：70 eV；電子倍增器電壓：1 988 V；發射電流：32.4μA；接口溫度：250℃；傳輸線溫度：250℃；質量范圍：m／z20～500［6－7］。

1.3.3 火龍果籽油對人體癌細胞增殖作用的影響1.3.3.1 細胞培養

將HepG－2、HT－29人體癌細胞株置于RPMI1640完全培養液（10%胎牛血清＋100 u／mL青霉素 ＋100 u／mL鏈霉素 ＋RPMI1640）中，于37℃、5%CO2培養箱中培養。每2 d以胰酶消化傳代1次，取對數生長期的細胞進行試驗［8］。

1.3.3.2 火龍果籽油抑制HepG－2、HT－29人體癌細胞增殖的活性

取對數生長期的HepG－2、HT－29人體癌細胞以每孔5×103個細胞接種于96孔板中，培養24 h后換液，設置試驗組（加不同濃度的火龍果籽油）、空白調零組（不接種細胞）、對照組（正常接種細胞），每組設8個復孔。培養48 h后每孔加入50μL MTT，繼續培養4 h后，去除上清液，每孔加入150μL DMSO在平板搖床搖勻，然后使用酶標儀在490 nm波長處檢測每孔的光密度［9］。

式中：A490nm為對照組在490 nm處的吸光值；B490nm為試驗組在490 nm處的吸光值；C490nm為空白調零組在490 nm處的吸光值。

不同組別的培養液配方如表1所示。

表1 不同組別培養液配方表

1.3.3.3 火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞生長曲線的影響

參考方法1.3.3.2，采用MTT法，分別檢測對照組、試驗組（1、5 mg／mL火龍果籽油）換液培養24、48、72、96 h后的細胞存活率，繪制細胞的生長曲線［10－11］。

式中：A490nm為對照組在490 nm處的吸光值；B490nm為試驗組在490 nm處的吸光值；C490nm為空白調零組在490 nm處的吸光值。

1.3.4 數據處理

采用SPSS20統計軟件分析試驗數據，以均數±標準差（x±SD）表示，各組間的均數差異性采用t檢驗。

2 結果與分析

2.1 火龍果籽油的脂肪酸組成

對經超臨界CO2提取的火龍果籽油進行GCMS檢測分析，火龍果籽油的脂肪酸組成色譜圖如圖1所示。

圖1 火龍果籽油GC－MS總離子流色譜圖

經數據工作站檢索及與標準譜庫中標準譜圖比對，各色譜峰相應質譜圖進行圖譜庫正反兩向檢索定性鑒別，結合匹配度高，利用面積歸一化法計算該色譜圖各組分的相對含量計算結果如表2所示。

表2 火龍果籽油的脂肪酸組成

由表2可知，火龍果籽油中共含有9種脂肪酸成分：不飽和脂肪酸高達72.10%，其中亞油酸41.28%，油酸26.17%，另外還含有亞麻酸（0.49%）、花生酸（1.01%）、角鯊烯（2.39%）等長鏈多不飽和脂肪酸；飽和脂肪酸以棕櫚酸（20.76%）為主。亞油酸可以降低血脂中膽固醇和三酰甘油水平，防止脂肪肝、動脈粥樣硬化、血栓等生理作用，同時對防止心腦血管疾病也有積極作用；亞麻酸具有增強智力和免疫力，減緩人體衰老等作用；角鯊烯具有抗癌、護肝、抗衰老、修復細胞增強抵抗力等作用。由此可見，火龍果籽油具有較高的營養價值。

2.2 火龍果籽油對人體癌細胞增殖作用的影響

2.2.1 火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞增殖的抑制作用

通過MTT法的檢測，火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞增殖的抑制率分析結果如圖2所示。

圖2 火龍果籽油抑制癌細胞增殖的活性

由圖2可知，火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞增殖的抑制率隨著火龍果濃度的升高而提高，也就是火龍果濃度越高對癌細胞的抑制活性越強；火龍果籽油對HT－29人體結腸癌細胞的抑制率高于對HepG－2人體肝癌細胞的抑制率，也就是火龍果對HT－29人體結腸癌細胞的抑制活性較強。因此，火龍果對HepG－2、HT－29人體癌細胞的增殖具有一定的抑制活性，為火龍果的開發利用提供了參考。

2.2.2 火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞生長曲線的影響

根據方法1.3.3.3對HepG－2、HT－29人體癌細胞的存活率進行測定，繪制HepG－2、HT－29人體癌細胞的生長曲線分別如圖3～圖4所示。

由圖3可知，隨著培養時間的延長，添加了火龍果籽油的培養液培養的HepG－2人體肝癌細胞的存活率逐漸降低；火龍果濃度越高，HepG－2人體肝癌細胞的存活率降低的速度越快。

圖3 火龍果籽油對HepG－2人體肝癌細胞生長曲線的影響

由圖4可知，當培養時間小于72 h時，隨著培養時間的延長，添加了火龍果籽油的培養液培養的HT－29人體結腸癌細胞的存活率迅速降低；當培養時間大于72 h時，隨著培養時間的延長，添加了火龍果籽油的培養液培養的HT－29人體結腸癌細胞的存活率降低速度減緩。

圖4 火龍果籽油對HT－29人體結腸癌細胞生長曲線的影響

綜上所述，火龍果籽油對HepG－2、HT－29人體癌細胞具有持續性的抑制作用。

3 結論

火龍果籽油中共含有9種脂肪酸成分：不飽和脂肪酸高達72.10%，其中亞油酸41.28%，油酸26.17%，另外還含有亞麻酸（0.49%）、花生酸（1.01%）、角鯊烯（2.39%）等長鏈多不飽和脂肪酸；飽和脂肪酸以棕櫚酸（20.76%）為主。

火龍果籽油呈劑量（1、3、5 mg／mL）依賴方式抑制HepG－2、HT－29等細胞的增殖，作用48 h細胞抑制率分別可達到24.76%、38.92%、48.18%和35.47%、46.11%、53.78%，火龍果籽油對這些癌細胞的生長具有顯著性、持續性的抑制作用。

［1］中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（第一分冊）［M］.第52卷.北京：科學出版社，1999：283－284

［2］潘艷麗，芮漢明，林朝鵬.火龍果種仁營養成分的測定和評價［J］.華南理工大學學報：自然科學版，2004，32（3）：41－43

［3］夏秋瑜，李瑞，陳衛軍，等.海棠果油的提取及其理化性質和脂肪酸組成分析 ［J］.中國糧油學報，2010，25（11）：78－81

［4］李紅，張露，劉延奇，等.香榧子油的理化性質及脂肪酸組成分析［J］.中國糧油學報，2012，27（5）：65－69

［5］王海波，李昌寶，吳雪峰，等.響應面方法優化羅漢果籽油提取工藝及脂肪酸組成分析 ［J］.中國糧油學報，2013，28（7）：46－49

［6］Korenman Y I，Gfuzdev I V，Kondratenok B M.Extraction and Gas－chromatographic determination of phenol and cresols soil［J］.Journal of Analytical Chemistry，2001，56（2）：166－169

［7］Gecgel U S D，Velioglu H M.Investigating some physicochemical properties and fatty acid composition of native black Mulberry（Morus nigra L.）Seed Oil［J］.Journal of American oil and Chemistry Societry，2011，88：1179－1187

［8］程寶鸞.動物細胞培養技術［M］.廣州：華南理工大學出版社，2000：131－132

［9］Lutterodt H，Slavin M，WhentM，etal.Fatty acid composition， oxidative stability， antioxidant and antiproliferative properties of selected cold－pressed grape seed oils and Flours［J］.Food Chemistry，2011，128：391－399

［10］Sreelatha S，Jeyachitra A，Padma P R.Antiproliferation and induction of apoptosis by Moringa Oleifera leaf extract on human cancer cells［J］.Food and Chemical Toxicology，2011，49：1270－1275

［11］朱科學，連彩霞，郭曉娜，等.小麥胚芽水溶性提取物的體外抗乳腺癌活性研究 ［J］.中國糧油學報，2013，28（7）：19－22.

The Antiproliferative Properties of Hylocereus Undatus Britt Seed Oil

Xu Feng Dong Didi Zhou Zengqun Wang Hongfei Shao Xingfeng Li Hesheng

（Department of Food Science and Engineering，Ningbo University，Ningbo 315211）

The ingredients and contents of fatty acids in Hylocereus Undatus Britt seed oil（HUSO）were determined with GC－MS.The inhibitory effects of HUSO on the proliferation activities，growth curve of hunman cancer cell line HepG－2 and HT－29 were examined.In addition，the curve about inhibitory effects of HUSO on cancer cell growth was drawed.The results showed that the main fatty acids in HUSO were linolic acid（41.28%），oleie acid（26.17%），and palmitic acid（20.76%）.The unsaturated fatty acidswere 72.10%of total fatty acids，and the inhibitions of UHSO on the proliferation of HepG－2 and HT－29 were in dose－（1，3 and 5 mg／mL）and time－（24，48，72 and 96 h）dependentmanners，and the inhibition rate of HepG－2 and HT－29 cells reached 24.76%，38.92%and 48.18%，35.47%，46.11%and 53.78%after incubation of48 h respectively.The Hylocereus Undatus Britt seed oil had an significant and continued inhibiting effect on the growth of cancer cells.

Hylocereus Undatus Britt seed oil，fatty acid components，cancer cell，growth curve

TS229

A

1003－0174（2015）06－0084－04

國家自然科學基金（31301574），寧波市自然科學基金（2013A610159），寧波大學學科項目（xkl1344），寧波大學人才引進項目（ZX2012000031）

2014－01－06

許鳳，女，1983年出生，講師，農產品加工

王鴻飛，男，1964年出生，教授，農產品加工，食品科學