膀胱尿路上皮癌中腫瘤轉移抑制基因TIP30/CC3基因的表達及意義

楊濤　李燕　孫福振　王剛　劉俊江

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膀胱尿路上皮癌中腫瘤轉移抑制基因TIP30/CC3基因的表達及意義

楊濤李燕孫福振王剛劉俊江

【摘要】目的探討膀胱尿路上皮癌腫的腫瘤轉移抑制基因TIP30/CC3基因的相關表達以及表達的意義。方法收集于2010至2014年存有的完整臨床以及病理資料的膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊50例以及癌旁組織50例，通過使用免疫組織化學法對50例膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊以及50例癌旁組織進行相應的檢測，分析其中的TIP30/CC3基因表達水平，同時分析TIP30/CC3基因和患者膀胱尿路上皮癌病理特征以及臨床特點的相關聯系，同時對TIP30/CC3基因的相關表達進行相應的定量分析，對患者的膀胱尿路上皮癌中以及癌旁組織中的反應陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率進行對比。結果TIP30/CC3基因在膀胱尿路上皮癌中呈現出一種低表達狀態，但在患者的癌旁組織中呈現出高表達狀態。癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率高于膀胱尿路上皮癌，差異有統計學意義(P＜0.05) ;同時TIP30/CC3基因和腫瘤的浸潤深度以及臨床的UICC分期之間差異有統計學意義(P＜0.05)，但與患者的年齡以及性別之間的差異無統計學意義(P＞0.05)。結論作為一種抑癌基因，TIP30/CC3基因在膀胱尿路上皮癌中的低表達情況極有可能促進了膀胱尿路上皮癌的發生以及發展，在臨床對膀胱尿路上皮癌患者進行治療以及預防膀胱尿路上皮癌的過程中需要關注TIP30/CC3基因的表達。

【關鍵詞】膀胱尿路上皮癌;腫瘤轉移抑制基因; TIP30/CC3

膀胱癌是一種發生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，也是一種泌尿系統中最為常見的惡性腫瘤。對于膀胱癌而言，若沒有對患者采取及時有效的措施，會嚴重危害患者的身體健康，甚至威脅到患者的生命［1］。在臨床治療膀胱尿路上皮癌患者的過程中，學者發現TIP30/CC3為一種與腫瘤轉移抑制有關的基因，TIP30/CC3基因的編碼產物TIP30/CC3蛋白能夠以細胞輔助因子為個體，并且能夠有效的活化并且增強HIV-1的相關轉錄功能，同時能夠特異性的提升HIV-1增值調節蛋白Tat的轉錄，TIP30/CC3基因在臨床上具有促進腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤轉移以及抑制腫瘤血管的形成等功能［2］。我院在對膀胱尿路上皮癌患者的治療過程中，通過使用免疫組織化學法對TIP30/CC3蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表達，發現了TIP30/CC3基因在膀胱尿路上皮癌發生和發展過程中的相關作用，效果報告如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取我院2013年5月至2014年5月的膀胱尿路上皮癌存檔蠟塊50例，其中男37例，女13例;年齡48～76歲，平均年齡(53.5±1.6)歲。同時需要使用50例膀胱尿路上皮癌的癌旁組織，距離腫瘤邊緣3～5 cm作為對照。標本均未經過HE染色，并且按照WHO的尿路腫瘤組織學分類法進行分類，浸潤性尿路上皮癌32例，非浸潤性乳頭狀尿路上皮癌18例(其中高級別13例，低級別5例) ;初發腫瘤患者27例，繼發腫瘤患者23例。

1.2方法應用免疫組織化學法對TIP30/CC3基因的表達進行相關的測定。測定過程中，5 μm的組織切片進行常規的脫蠟至水，在0.01 mol/L的PBS中進行漂洗3×3 min，使抗原修復，在室溫下進行了自然冷卻后，可以在PBS下進行5×3 min的漂洗，并在漂洗完成后滴入3%的過氧化氫，在37℃的環境下進行10 min的孵育，同時在0.01 mol/L的PBS中進行漂洗3×3 min，在正常養血清中進行37℃的濕盒中進行10 min的孵育，并在去除多余的血清后，在4℃的環境下孵育過夜，并在0.01 mol/L的PBS中進行漂洗3× 3 min，低價生物素標記的二抗37℃孵育盒，進行10 min的孵育，同時需要在0.01 mol/L的PBS中進行漂洗3×3 min，最后低價鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物復合物37℃的濕盒中進行10 min的孵育，并在0.01 mol/L的PBS中進行漂洗3×3 min，滴入DAB顯色液進行顯色，使用自來水進行沖洗將反應終止后，可以使用蘇木素再次染色，并使用1%的鹽酸酒精進行數秒鐘的分色，使用流水進行沖洗，并使用0.1%的氨水進行返藍處理，最后使用鏡檢方法進行檢測，并使用陽性片作為陽性對照。

1.3標準使用HPIAS-1000彩色病理圖文報告系統對TIP30/CC3的表達進行分析，每張切片隨機選取5個不重疊并完整的高倍視野，測定視野下反映的陽性面積、細胞總面積以及平均光密度，同時每5個視野的陽性面積率、平均光密度作為測量值。

1.4統計學分析應用PSS 17.0統計軟件，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率比較癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率明顯高于膀胱尿路上皮癌，差異有統計學意義(P＜0.05)。尿路上皮癌細胞能夠減少較少量的棕黃色顆粒，說明TIP30/CC3呈現出低表達情況，而癌旁正常膀胱組織中能夠較高高密集分布的棕黃色分布，說明TIP30/CC3呈現出高表達情況。見表1，圖1、2。

表1　膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率比較　n=50，±s

表1　膀胱尿路上皮癌及癌旁組織中TIP30/CC3的平均光密度以及陽性面積率比較　n=50，±s

類別　平均光密度　陽性面積率膀胱尿路上皮癌0.0532±0.0017　0.0641±0.0017癌旁組織　0.2895±0.0052　0.2375±0.0052 t值305.4185　224.1201 P值0.0000　0.0000

圖1　尿路上皮癌有少量棕黃色顆粒，表明TIP30/CC3呈現低表達

圖2　正常膀胱組織中較高高密度分布的棕黃色分布，表明TIP30/CC3呈現高表達

2.2TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌病理分級臨床分期的關系TIP30/CC3基因和腫瘤的浸潤深度以及臨床的UICC分期之間差異有統計學意義(P＜0.05)，但與患者的年齡及性別之間差異無統計學意義(P＞0.05)。見表2。

表2　TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌病理分級的臨床分期的關系n=50，例(%)

3　討論

膀胱癌是一種發生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，也是一種泌尿系統中最為常見的惡性腫瘤。對于膀胱癌而言，其中一種最為常見的種類為膀胱尿路上皮癌。Zhao等［3］研究顯示，膀胱尿路上皮癌的病因較為復雜，不僅有內在因素，同時也有外在的環境因素。目前可以明確的導致發生膀胱尿路上皮癌的原因有職業接觸芳香胺以及吸煙，其中約有45%的膀胱尿路上皮癌患者是由于吸煙引起的，而隨著吸煙時間的延長，發病率也越來越明顯。對于膀胱尿路上皮癌的臨床表現，最初表現為血尿，但血尿往往無痛、間歇并且為全程血尿，也有部分患者為鏡下可見的血尿。而隨著病情的發展，往往會產生尿頻、尿急、尿痛，甚至出現排尿困難等現象，對患者的正常工作以及生活造成嚴重影響，若沒有對患者采取及時有效的措施，會嚴重危害患者的身體健康，甚至威脅到患者的生命。

TIP30基因是Shtivelman等［4］最先利用RNA差異顯示技術，發現的一種基因，它與小細胞肺癌轉移抑制相關，當時命名為CC3。腫瘤細胞向遠處轉移是惡性細胞與宿主間相互作用的結果，同時也是導致腫瘤患者死亡的一個重要原因。

Baker等［5］研究顯示，人體的TIP30蛋白是一種能夠特異性的提升HIV-1增值蛋白Tat的專利輔助因子，同時其序列和CC3蛋白是相通的，但對于CC3蛋白而言，Omari等［6］研究顯示，TIP30/CC3是一種短鏈脫氫酶/還原酶家族中的一類，同時也是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，其抑癌功能已經在近年來得到了較好的發現以及證實，同時TIP30/CC3的作用機制也在不斷的得到研究，為徹底治療腫瘤帶來了希望。

在本次研究中，使用免疫組織化學的方式，對于膀胱尿路上皮癌組織中的TIP30/CC3進行了相應的檢測。結果發現TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌組織中呈現出一種低表達的情況，但是在患者的癌旁組織中則呈現高表達，同時差異有統計學意義(P＜0.05)。通過分析可以發現，癌癥的發生以一種較為復雜的過程，同時也是一種多基因以及多因素的改變而造成的［7］。

有研究結果顯示TIP30/CC3在人的全身各種組織中均有表達，如心臟、肺部、腦、腎、骨胳、胰腺等［8］，但在很多腫瘤組織中表達減低或缺失，證明TIP30的低表達促進腫瘤細胞的生成。進一步實驗發現，如果敲除小鼠的TIP30/CC3基因研究［7］結果顯示，缺失了TIP30/CC3基因的小鼠自發引起肝細胞癌、膀胱移行細胞癌、卵巢脂肪細胞瘤和血管肉瘤等［8］。TIP30/CC3還可以抑制腫瘤細胞生長，通過細胞周期分析的方法，發現TIP30對G0～G1期細胞明顯有阻滯作用，并導致S期細胞比例下降，從而抑制腫瘤細胞增殖［9］。同時有研究發現，TIP30有促進腫瘤細胞凋亡的作用，通過結合核膜物質運輸相關蛋白，并抑制細胞核內外的流通性，導致促進腫瘤細胞的凋亡［6］。TIP30還可以通過抑制血管生成刺激因子-1，并上調其抑制因子(血管生成刺激因子-2)的表達，可以誘導腦特異性血管生成抑制因子-1蛋白的表達，并也能促進富半胱酸的酸性蛋白的表達，最終抑制腫瘤新生血管形成［10］。

本研究顯示，抑癌基因TIP30在膀胱尿路上皮癌患者組織中的失表達極有可能會促成膀胱尿路上皮癌的發生。對于抑癌作用，也是一種極為復雜的過程，并且是需要使用多種因素共同作用的。TIP30/CC3基因具有一種促凋亡的作用，通過在患者組織中的高表達，能夠幫助患者抑制腫瘤的生長，同時能夠通過TIP30/CC3的高表達形式，幫助抑制患者膀胱尿路上皮癌組織中的發生和發展，在對患者臨床早期的診斷以及治療的過程中有指導性的作用［11］。

而在本次研究中也能夠顯示，TIP30/CC3和患者膀胱尿路上皮癌的臨床分期和病理分級都有著顯著性的差異。在今后的研究中，我們將會進一步的探索TIP30基因對于多種腫瘤組織表達降低的相關機制，對惡性腫瘤患者的治療提供臨床依據。

參考文獻

1陜光，夏樾.腫瘤轉移抑制基因TIP30/CC3在膀胱尿路上皮癌中的作用.中國組織化學與細胞化學雜志，2012，21:439-442.

2黃奇迪，胡孝渠，萬麗，等.CC3/TIP30蛋白在乳腺癌中的表達及其與HER－2/neu基因的相關性研究.中華外科雜志，2012，50:57-61.

3 Zhao J，Ni H，Ma Y.TIP30/CC3 expression in breast carcinoma: relation to metastasis，clinicopathologic parameters and p53 expression.Human Pathology，2007，38:293-298.

4Shtivelman E.A link between metastasis and resistance to apoptosis of variant small cell lung carcinoma.Oncogene，1997，14:2167-2173.

5 Baker ME，Yan L，Pear MR，et al.Three－dimensional model of human TIP30，a coactivator for HIV-1 Tat－activated transcription，and CC3，a protein associated with metastasis suppression.Cellular and molecular life sciences，2000，57:851-858.

6 Omari KE，Bird LE，Nichols CE，et al.Crystal structure of CC3 (TIP30) : implications for its role al a tumor suppressor.J Biol Chem，2005，280: 18229-18236.

7Chen V，Shtivelman E.CC3/TIP30 regulates metabolic adaptation of tumor cells to glucose limitation.Ceu Cycle，2010，4941-4953.

8 Ito M，Jiang C，Krumm K，et al.TIP30 deficiency increases susceptibility to tumorigenesis.Cancer Res，2003，63:8763-8767.

9張蕾，呂春堂，周中華.TIP30蛋白在涎腺腺樣囊性癌高轉移細胞中的表達鑒定及作用.現代口腔醫學雜志，2005，19:54-56.

10 NicAmhlaoibh R，Shtivelman E.Metastasis suppressor CC3 inhibits angiogenic properties of tumor cells in vitro.Oncogene，2001，20:270-275.

11 Baker ME.TIP30，a cofactor for HIV-1 Tat-activated transcription，is homologous to short-chain dehydrogenases/reductases.Currentiology，1999，9:478-482.

·論著·

Expression and significance of tumor metastasis suppressor gene－TIP30/CC3 gene in bladder urothelium carcinoma

YANG Tao*，LI Yan，SUN Fuzhen*，et al.*
Department of Urinary Surgery，Hebei Provincial People’s Hospital，Shijiazhuang 050051，China

【Abstract】Objective To investigate the expression and significance of tumor metastasis suppressor gene－TIP30/CC3 gene in bladder urothelium carcinoma.Methods Fifty cases of bladder urothelial carcinoma paraffin blocks and 50 cases of carcinoma adjacent tissues paraffin blocks that were stored in Department of Pathology of our hospital from 2010 to 2014 were collected in the study，with complete clinical and pathological data.The expression levels of TIP30/CC3 gene in these specimens were detected by immunohistochemistry (SP)，at the same time，the correlation between the expressions of TIP30/CC3 gene and pathological characteristics as well as clinical features of bladder urothelial carcinoma was analyzed.Besides the expressions of TIP30/CC3 gene were quantitatively analyzed，and the average optical density and positive area rate in positive reaction granules were measured and compared between bladder urothelial carcinoma tissues and carcinoma adjacent tissues.Results The low－expression of TIP30/CC3 gene was observed in bladder urothelial carcinoma，however，high－expression of TIP30/CC3 gene was observed in carcinoma adjacent tissues.The average optical density and positive area rate in carcinoma adjacent tissues were significantly higher than those in bladder urothelial carcinoma tissues，moreover，there was a significant difference between the expression of TIP30/CC3 gene and tumor’s infiltration depth as well as clinical UICC stages (P＜0.05).However there was no significant difference between the expression of TIP30/CC3 gene and patient’s age and sex (P＞0.05).ConclusionAs a tumor suppressor gene，the low－expression of TIP30/CC3 gene in bladder urothelial carcinoma may promote the pathogenesis and development of bladder urothelial carcinoma，therefore，we should pay much attention to the expression of TIP30/CC3 gene in treatment and prevention of bladder urothelial carcinoma.

【Key words】bladder urothelial carcinoma; tumor metastasis suppressor gene; TIP30/CC3

(收稿日期:2015－11－17)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2016.05.002

通訊作者:劉俊江，050051石家莊市，河北省人民醫院泌尿外科; E-mail: liujunjiang67@163.com

【中圖分類號】R 737.14

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002－7386(2016) 05－0650－03

作者單位: 050051石家莊市，河北省人民醫院泌尿外科(楊濤、孫福振、王剛、劉俊江)，血液科(李燕)